肿瘤分子诊断-课件.ppt

肿瘤分子诊断服务介绍肿瘤分子诊断服务介绍标准化用药个体化用药个体化用药标准化用药标准化用药个体化用药标准疗法1标准疗法2标准疗法32 2肿瘤药物与相关靶标肿瘤药物与相关靶标如何实现个体化用药？如何实现个体化用药？分子分型分子分型 药物疗效药物疗效4 4目前的服务目前的服务目前的平台目前的平台目前的客户目前的客户肿瘤TaqMan-ARMs医院感染性疾病测序健康管理公司新生儿筛查实时定量PCR研究所qPCR-HRM药厂循环肿瘤细胞（CTC）保险公司mRNA表达检测循环肿瘤细胞（CTC)检测基因多态性检测体细胞基因突变检测体细胞基因突变检测EGFR,K-RAS,B-RAF，C-KIT qPCR-HRM qPCR-HRM（可用于血浆标本检测）（可用于血浆标本检测）Taqman-ARMS Taqman-ARMS（与国际获批的技术相当）（与国际获批的技术相当）DNA DNA测序（基因突变检测的金标准技术）测序（基因突变检测的金标准技术）8 8 所有定量所有定量PCRPCR仪均可使用仪均可使用主要用于各类组织，包括手术、穿刺或镜检组织类主要用于各类组织，包括手术、穿刺或镜检组织类2 2小时即可完成检测小时即可完成检测 试剂盒商业化程度高，临床认可程度高试剂盒商业化程度高，临床认可程度高 国内已有试剂盒获批国内已有试剂盒获批SFDASFDA9 9 qPCR-HRM qPCR-HRM技术是基于高效稳健的技术是基于高效稳健的PCRPCR上的高分辨熔解曲线分析（上的高分辨熔解曲线分析（High-High-ResolutionMeltingResolutionMelting）技术，灵敏度可以达到技术，灵敏度可以达到1%-0.1%1%-0.1%，既能检测已知突变，既能检测已知突变，也能检测未知突变。

也能检测未知突变qPCR-HRMqPCR-HRM的突变检测已获国际多中心双盲实验验证（的突变检测已获国际多中心双盲实验验证（Journal of Journal of Molecular Diagnostics,Vol.11,No.6,November 2009Molecular Diagnostics,Vol.11,No.6,November 2009）实例图：利用实例图：利用HRM技术对技术对7个样本分别进行个样本分别进行EGFR（左图）、（左图）、KRAS（右图）突变检测，（右图）突变检测，红色表示该样本发生突变，蓝色表示未突变，蓝色横直线为阴性对照左图显示红色表示该样本发生突变，蓝色表示未突变，蓝色横直线为阴性对照左图显示2个样个样本发生了本发生了EGFR突变；右图显示突变；右图显示4个样本发生了个样本发生了KRAS突变EGFRKRAS1010 血血浆浆EGFREGFR突突变检测变检测：18 18号外号外显显子：无突子：无突变变1919号外号外显显子：突子：突变变2020号外号外显显子：无突子：无突变变2121号外号外显显子：无突子：无突变变附附图图主要特点：主要特点：实现血浆中来自肿瘤的微量实现血浆中来自肿瘤的微量DNADNA的的突变检测。

突变检测目前所做的临床实验目前所做的临床实验中，中，血浆血浆EGFREGFR检测结果检测结果与与其其手术标本手术标本之间的整体符之间的整体符合率合率符合率达到符合率达到91.25%91.25%是是临临床上不能手床上不能手术术、也同、也同时时不愿穿不愿穿刺患者的替代刺患者的替代检测检测方案；也可方案；也可 获获得性得性耐耐药进药进行行预预先先检测检测qPCR-HRMqPCR-HRM用于血浆微量突变检测用于血浆微量突变检测用于血浆微量突变检测用于血浆微量突变检测1111国际公认的分子检测金标准有明确的物价收费实验流程较复杂，需要大型仪器突变突变检测技术之一检测技术之一 DNA测序测序肿瘤类型肿瘤类型靶向药物靶向药物基因基因疗效佳的情况疗效佳的情况非小细胞肺癌易瑞沙（Iressa）特罗凯（Tarceva）EGFRKRASEGFR突变/KRAS野生 胃肠间质瘤格列卫（Gleevec）C-KitC-kit第11外显子突变/PDGFR突变 结直肠癌爱必妥KRASBRAF野生型突变检测项目列举突变检测项目列举EGFR突变检测突变检测EGFR E19/E21敏感突变敏感突变 适合使用适合使用TKI药物治疗药物治疗耐药位点检测耐药位点检测T790MT790MK-RAS突变检测突变检测BRAFNCCNNCCN 2010年NCCN结直肠结直肠癌临床实践指南癌临床实践指南指出：K-ras基因为野生型而同时具有BRAF V600E突变的患者，靶向EGFR抗体治疗无效。

BRAF-V600EBRAF-V600E检测检测肿瘤学临床实践指南（中国版）2010第一版药物名称药物名称检测靶标检测靶标检测内容检测内容检测结果检测结果预测内容预测内容吉非替尼/厄洛替尼EGFR基因突变野生型耐药突变型敏感西妥昔单抗K-ras，B-raf基因突变野生型敏感突变型耐药伊马替尼C-Kit基因突变野生型耐药突变型敏感基因多态性检测与药物代谢毒性(UGT1A1,CYP,DPD)单核苷酸多态性（SNP）是最常见的基因变异至少至少1%1%的人群的人群绝大多数人群绝大多数人群共有序列共有序列G to CG to CSNPSNP 位点位点变异的序列变异的序列最常见的基因多态性 SNP7/13/20227/13/20221919为什么为什么 SNPs SNPs 重要重要?个体个体 1 1个体个体 2 2=SNP variations in DNA=SNP variations in DNASNPSNP标志基因标志基因 A A基因基因 B B基因基因 A ASNP SNP 可能使基因可能使基因 B B 产生变产生变异的蛋白质分子异的蛋白质分子7/13/20227/13/20222020个体的个体的SNP SNP 谱谱SNP SNP 谱谱A ASNP SNP 谱谱B BSNP SNP 谱谱C CSNP SNP 谱谱F FSNP SNP 谱谱E ESNP SNP 谱谱D D7/13/20227/13/20222121SNP SNP 谱有助于确定药物的疗效和副作用谱有助于确定药物的疗效和副作用乳腺癌病人乳腺癌病人个体的个体的SNP SNP 谱可以分成不同的类型谱可以分成不同的类型SNP SNP 谱谱 A A对药物有期望的反应对药物有期望的反应对药物没有期望的反应对药物没有期望的反应SNP SNP 谱谱 A A的人对药物的人对药物有期望的反应有期望的反应SNP SNP 谱谱E ESNP SNP 谱谱 B BSNP SNP 谱谱 C CSNP SNP 谱谱D D7/13/20227/13/20222222药物代谢与药物代谢与SNP检测检测化疗药物在体内经过吸收、代谢、分布和清除，通过其活性物质对治疗靶点的直接化疗药物在体内经过吸收、代谢、分布和清除，通过其活性物质对治疗靶点的直接攻击而发挥作用，整个过程需要多种蛋白质攻击而发挥作用，整个过程需要多种蛋白质/酶的共同参与和协同作用。

酶的共同参与和协同作用SNP SNP 主要是指在基因组水平上变异频率大于主要是指在基因组水平上变异频率大于1%1%的单核苷酸变异所引起的的单核苷酸变异所引起的DNADNA序列多态序列多态性，多态性会导致不同个体体内各种蛋白，酶活性的差异，因此导致药物使用情况性，多态性会导致不同个体体内各种蛋白，酶活性的差异，因此导致药物使用情况的不同胆红素尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因（胆红素尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因（UGT1A1UGT1A1）UGT1A1*27(C686A)或UGT1A1*28(TA)7TAA:野生型：6个TA UGT1A1*6(G211A)：使使UGT1A1UGT1A1的转录活性下降了三分之二的转录活性下降了三分之二导致对伊立替康的毒性增加导致对伊立替康的毒性增加FDA提示：UGT1A1的多态性-伊立替康伊立替康的毒性增加的毒性增加(6TA)此型的酶活性是野生型的此型的酶活性是野生型的4949CYP19A1CYP19A1是芳香化酶的编码基因，临床研究已证实有着很大的影响是芳香化酶的编码基因，临床研究已证实有着很大的影响作用在接受芳香化酶抑制剂治疗的乳腺癌患者中，携带作用在接受芳香化酶抑制剂治疗的乳腺癌患者中，携带CYP19A1CYP19A1基因基因rs4646rs4646（GTGT）突变患者的治疗效果较无此突变的患者显著）突变患者的治疗效果较无此突变的患者显著2-42-4（下图）。

下图）CYP19A1 rs4646CYP19A1 rs4646（GTGT）SNPSNP是乳腺癌患者接受芳香化酶抑制剂治是乳腺癌患者接受芳香化酶抑制剂治疗疗效的有效预测指标疗疗效的有效预测指标如图一项对乳腺癌患者的临床研究显示：如图一项对乳腺癌患者的临床研究显示：CYP19A1CYP19A1基因基因rs4646rs4646突变的患者使用芳香化突变的患者使用芳香化酶抑制剂药物疗效明显优于野生型患者酶抑制剂药物疗效明显优于野生型患者（p0.0001p0.0001）1 1参考文献参考文献1.Ian ES et al.N Engl J Med.2003;384:2431-42.1.Ian ES et al.N Engl J Med.2003;384:2431-42.2.Ramon C et al.Clin Cancer Res.2008;14:811-6.2.Ramon C et al.Clin Cancer Res.2008;14:811-6.3.Lunardi G et al.J Clin Oncol.2009;27:555.3.Lunardi G et al.J Clin Oncol.2009;27:555.4.Fasching PA et al.Breast Cancer Res Tr.2008;112:89-4.Fasching PA et al.Breast Cancer Res Tr.2008;112:89-98.98.2525基因表达检测（基因表达检测（mRNA表达）表达）(ERCC1BRCA1TUBB3TS)(ERCC1BRCA1TUBB3TS)相关肿瘤相关肿瘤药物名称药物名称检测靶标检测靶标检测内容检测内容检测结果检测结果预测内容预测内容结直肠癌贝伐单抗VEGFRmRNA表达水平高疗效好低疗效差乳腺癌曲妥珠单抗HER-2FISH/mRNA表达水平高疗效好低疗效差肝癌索拉非尼pDGFRmRNA表达水平低疗效好高疗效差28靶向药物靶向药物项目名称项目名称样本样本结果结果疗效关系关系曲妥珠单抗HER2乳腺癌（手术/穿刺）+阳性疗效好-HER2HER2基因表达基因表达检测检测采用采用RT-PCRRT-PCR方法替代方法替代FISHFISH或免疫组化方法，临床准确率或免疫组化方法，临床准确率达达97%97%以上。

以上主要特点：主要特点：客观，不用人为观察客观，不用人为观察时间短，整个检测时间短，整个检测6060分钟左右完成分钟左右完成高通量，一次可以检测高通量，一次可以检测6 6人份PDGFR 低表达患者的无进展生存期和总生存期明显长于高表达患者索拉菲尼检测基因索拉菲尼检测基因-PDGFR-PDGFR贝伐单抗检测基因贝伐单抗检测基因-VEGFR药物名称检测靶标检测内容奥沙利铂/卡铂/顺铂ERCC1/BRCA1mRNA表达水平5-FU/培美曲赛TSmRNA表达水平紫杉醇/多西紫杉醇/长春瑞滨STUBB3,STMN1mRNA表达水平替莫唑胺MGMTmRNA表达水平阿霉素/表柔比星TOPOamRNA表达水平吉西他滨RRM1mRNA表达水平ERCC1ERCC1表达与铂类药物疗效相关表达与铂类药物疗效相关的临床数据的临床数据 ERCC1ERCC1阴性患者，能从铂类辅助化疗中获益阴性患者，能从铂类辅助化疗中获益.BRCA1/2BRCA1/2表达与铂类药物疗效相表达与铂类药物疗效相关的临床数据关的临床数据 BRCA1BRCA1过度表达过度表达。