残渣中甘与草多糖的提取分离.doc

甘草酸的提取和测定一．实验目的：1 掌握干草的提取原理 2 熟悉皂甙的性质和测定方法二实验原理甘草酸是由甘草中提取甘草，又名美草、蜜甘、甜根子，多生长在我国西北、华北、东北地区，为多年生草本植物甘草酸作为其主要成分，随产地不同含量亦不同，一般在(4～14) ％之内甘草酸是甘草甜味的有效成分，又名甘草甜素、甘草皂甙分子式 42H62O16，相对分子质量 822.92 甘草酸为白色或淡黄色结晶型粉末，熔点 220 ℃，有特殊甜味，其甜度约为蔗糖的 250 倍，溶于热水和热的稀乙醇，不溶于无水乙醇和乙醚甘草酸遇酸则沉淀，常利用此性质进行提取和精制为了使用方便，一般都把甘草酸制成水溶性的盐类，如甘草酸钠、甘草酸二钠、甘草酸三钠、甘草酸铵等方法：甘草酸在原料中以钾盐和钙盐的形式存在，其盐易溶于水，因此可用极性溶剂溶解，提取后滤液再加硫酸，因难溶于酸性溶液而析出游离的甘草酸三．实验步骤甘草酸的制备（1） 粉碎：将干净干燥的甘草放入粉碎机中粉碎，过 10 目筛选，制得甘草粉2） 提取：称取一定质量的甘草粉放入反应器中，加入其 5 倍质量的水，在搅拌下于 85 ℃以上加热回流 2．5 h，过滤、滤渣再加 3 倍质量的水重复提取一次，合并泸液。

3） 浓缩：将甘草酸提取液用薄膜蒸发器进行真空浓缩，当滤液体积减少4／5 时，趁热过滤 （4） 分离：在已经冷却的浓缩滤液中，加入其 1／2 容量的 95%的乙醇，然后静止过夜，经过滤除去植物蛋白、多糖等沉淀物5） 沉淀：在经上述处理的甘草酸浓缩液中，用浓硫酸调其 PH 值，使甘草酸沉淀析出，然后进行离心分离，得粗甘草酸6） 重结晶：用 (60～70) ℃的稀乙醇进行重结晶，减压过滤后得甘草酸湿品7） 干燥：将湿甘草酸放入真空干燥箱内，调节真空度，在(70 ～80) ℃温度下加热(40～60) min，即得干甘草酸8） 成品：将干燥的甘草酸粉碎，过筛，即得甘草酸成品甘草酸的定性和定量测定1 甘草酸的定性鉴别取样品 4 mg，置白磁板上，加 4%硫酸 7 滴，渐渐变成橙黄色至橙红色2 甘草酸纯度的测定取样品 6g，精确称定，加蒸馏水 50 mL 溶解后，移置 100 mL 容量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀，静置 10 h吸取上清液 250 mL 置小烧杯中，加氨试液 3 滴然后加热至稠膏状，加 30 mL 蒸馏水溶解，慢慢加入 3%盐酸溶液5mL，在冰水中冷却 30 min，过滤，沉淀物用 5mL 冰水洗 3 次。

弃去洗液及滤液，将沉淀物放在表面皿中使水分自然蒸发，然后加入 10 mL65 ℃的乙醇，使沉淀物溶解，过滤，将乙醇溶液放入干燥恒重的烧杯中加热蒸干，精确称定则甘草酸纯度(X)的计算采用下式：A=13.17C—0.017 提取率=nCV/m×100％n 提取液稀释倍数 c 提取液中甘草酸的浓度 mg/ml v 提取液体积 ml m 甘草的质量 mg A 吸光度甘草酸产品的质量指标经测试甘草酸的质量指标如下(质量分数) ：甘草酸含量(以 C42H62O16 计) ：≥65％；水分：≤12 ％；灰分：≤11 ％；重金属：≤25×10－6；熔点：218 －220 ℃残渣中甘草多糖的提取分离一、 实验目的: 掌握多糖类物质的提取方法二、 实验原理：甘草多糖为易溶于水的白色粉末，熔点很高，不溶于酒精等有机溶剂，故可以用水提醇沉法得到甘草多糖醇沉法的基本原理是：利用药材等植物中的大多数成分如生物碱盐、甙类、有机 酸类、氨基酸、多糖等易溶于水和醇中的特性，用水提出，并将其提取液浓缩，加入适当的乙醇或水反复数次沉降，除去其不溶物质，最后得到澄明液体苯酚法测定；糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在 10－100mg 范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在 485nm 波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。

苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵敏度高，实验时基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色稳定 160min 以上三、实验材料和仪器：仪器：分光光度计、电炉、铝锅、20mL 刻度试管、刻度吸管、记号笔、吸水纸适量试剂：提取甘草酸后的废渣，硫酸，苯酚，95%乙醇，葡萄糖标准品药品配置方法 （1）90％苯酚溶液：称取 90g 苯酚（AR） ，加蒸馏水 10mL 溶解，在室温下可保存数月 （ 2）9％苯酚溶液：取 3mL 90％苯酚溶液，加蒸馏水至 30mL，现配现用 （3 ）浓硫酸（比重 1.84） （4）1％蔗糖标准液：将分析纯蔗糖在 80℃下烘至恒重，精确称取 1.000g加少量水溶解，移入 100mL 容量瓶中，加入 0.5mL 浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度 （5）100ug/L 蔗糖标准液：精确吸取 1％蔗糖标准液 1mL 加入 100mL 容量瓶中，加水定容 四、实验步骤：1、取一定量的甘草药渣，将中药水提液浓缩至 1︰1～1︰2（ml︰g） ，药液放冷后，边搅拌边缓慢加入乙醇使达规定含醇量，密闭冷藏 24～48h，滤过，滤液回收乙醇，得到精制液操作时应注意以下问题：①药液应适当浓缩，以减少乙醇用量。

但应控制浓缩程度，若过浓，有效成分易包裹于沉淀中而造成损失②浓缩的药液冷却后方可加入乙醇，以免乙醇受热挥发损失③选择适宜的醇沉浓度一般药液中含醇量达 50％～60％可除去淀粉等杂质，含醇量达 75％以上大部分杂质均可沉淀除去④慢加快搅应快速搅动药液，缓缓加入乙醇，以避免局部醇浓度过高造成有效成分被包裹损失⑤密闭冷藏可防止乙醇挥发，促进析出沉淀的沉降，便于滤过操作⑥洗涤沉淀沉淀采用乙醇（浓度与药液中的乙醇浓度相同）洗涤可减少有效成分在沉淀中的包裹损失2、将每次提取的滤液过滤并合并，量取体积，并测定吸光度，粗步计算甘草多糖得率3、提取液减压浓缩，浓缩液加 95%乙醇使最后醇浓度到一定浓度，静置过夜4、沉淀干燥，得粗黄多糖5、鉴定： 1．标准曲线的制作： 取 20mL 刻度试管 11 支，从 0－10 分别编号，按下表加入溶液和水，然后按顺序向试管内加入 1mL 9％苯酚溶液，摇匀，再从管液正面以 5－20s加入 5 mL 浓硫酸，摇匀比色液总体积为 8 mL，在恒温下放置 30min然后以空白为参比，在 485nm 波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程管号 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10100ug/L蔗糖液（ml）0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 1.8 2.0水（ml) 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0蔗糖量（μg）0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 2002、吸取 0.5mL 样品液于试管中（重复 2 次），加蒸馏水 1.5mL，同制作标准曲线的步骤，按顺序分别加入苯酚、浓硫酸溶液，显色并测定光密度。

由标准线性方程求出糖的量，按下式计算测试样品中糖含量 可溶性糖含量（％）＝从标准曲线查得糖的量（μg）×提取液体积（ml）×稀释倍数/[测定用样品液的体积 (ml)×样品重量(g)×106]×100 。