HPLC测定去痛片中咖啡因含量.doc

化学与制药工程学院 药物分析实验报告 实验题目： HPLC法测定去痛片中咖啡因含量 班 级： 应化0704 学 号： 07220418 姓 名： 宋森 实验日期： 2010.12.13 实验题目：HPLC法测定去痛片中咖啡因含量一、实验目的1.掌握固体样品的处理方法2.掌握高效液相色谱仪的工作原理及操作3.利用外标法计算待测组分含量二、实验原理咖啡因 (Caffeine) 又称咖啡碱 ，是一种白色生物碱， 学名 “1， 2， 3- 三甲基黄嘌呤” ，其结构为C18H10N4O2 H2O，通常得自咖啡和茶，在药品中主要作为温和兴奋剂及治疗特定的头痛病分离原理：试样溶于流动相后，进入色谱柱固定相中，有机溶剂分子会被吸附在非极性固定相表面的烷基集团上，而溶质分子在流动相中被溶剂化，并与吸附在固定相表面上弱极性溶剂分子进行置换，从而构成溶质在固定相和流动相中的分配平衡当达到平衡时，服从下式： K = Cs/ Cm式中K是分配系数，Cs和Cm溶质在固定相和流动相中的浓度由于试样组分在固定相和流动相之间的作用存在差异，被测组分在两相中的分配系数K的不同而得到分离。

在反相色谱中极性大的组分先流出，极性小的组分后流出实验采用外标法，分别测定标准品溶液及供试品溶液，根据公式：AX/CX=AS/CS 其中AX为供试品的峰面积，CX为供试品的浓度，AS为标准品的峰面积，CS为标准品的浓度，带入相关数据，即可求得待测组分含量三、仪器条件仪器型号：LC-2130 , 色谱柱：C18柱 ，检测波长：275nm , 流动相： 甲醇：水 = 60 : 40 ，流速：1.0mL/min , 进样量：20μL 四、操作过程1.取去痛片20片，精密称定为9.9430g ，研细，取上述细粉0.8889g置于50mL容量瓶中，加甲醇20mL，超声5min，使咖啡因溶解，继续加甲醇至刻度，过滤，精密量取续滤液2mL置于50mL容量瓶中，定容至刻度2.打开高效液相色谱仪，设置相关仪器参数，待基线平稳后，开始进样，记录峰面积3.关闭仪器，根据公式计算待测组分含量五、实验数据记录及处理 AX = 2305863 ， AS = 2283809 ，CS = 51.20μg/mL 代入公式： 得：CX = 51.69μg/mL ，计算标示量：六、实验讨论1.本实验所采用的色谱柱为C18色谱柱，属于反相色谱，在反相键合相色谱中，键合固定相的极性小于流动相的极性，适于分离非极性、极性、或离子性化合物，其应用范围比正相更广泛。

2.实验过程中，在供试品与标准品之间取样时一定要用甲醇清洗微量进样器，以确保样品不被污染3.本实验采用高效液相色谱法，具有分离速度快，灵敏度高，操作简便等优点七、结论 经测定，供试品含咖啡因为标示量的103.26% ，符合chp2000相关规定八、评语和成绩成绩： 指导教师： 。