厚朴内生真菌的研究菌种分离及其鉴定药学论文开题报告.doc

药学论文•厚朴内生真菌的研究（I）:菌种分离及其鉴定作者：庞蕾，严铸云，郭晓恒，罗静，万德光【关键词】 厚朴；，，内生真菌；，，多样性摘要:从两个不同来源的厚朴Magnolia officinalis Rchd. ct Wils.的茎中，分离获得内生真菌48株，经显微形态观察,鉴定为1纲、3目、6科、16 属不同来源的厚朴内生真菌的种群、数量及分布部位存在显著差异关键词：厚朴；内生真菌；多样性Study on Endophytic Fungi in Magno1ia officinalis Rehd. el WiIs.(I ) :Isolation and Idcntification of Endophytic FungiAbstract : 48 strains of endophyt ic fungi were isolated from the stemof Magnolia officinalis Rehd. et Wils. They were morphologically ident i fied belonging to 16 genera, 6 families, 3 orders and 1 class• The result of the experiment has shown that quantity, species and distributing of the endophytes varied in Magnolia officinalis Rchd. ct Wils, of di fferent habi tat.Key words ： Magnolia officinalis Rehd. et Wils. ； Endophytic fungi ； Diversi ty厚朴Magnolia officinalis Rchd. ct Wils.是著名的川产道地药材，属 国家二级保护的珍惜濒危药用植物。

用于湿滞伤中，腕痞吐泻，食积气滞，腹胀 便秘，痰饮咳喘等病症〔1〕厚朴多以复方入药，用量较大；而厚朴原植物生 长周期长，曾出现厚朴资源匮乏，采用环剥技术确保进行了枝皮剥除的植株能继 续生长的方法来保存资源的现象现在厚朴虽已进行大面积规模化种植，但从长 远观点看，厚朴资源仍显不足叫直物内生真菌能够产生与宿主相同或相似化学成 分这一特性在一定程度上可以缓解植物资源短缺问题厚朴内生真菌的研究未见 报道笔者对厚朴内生真菌进行了菌株分离、鉴定等工作现将研究结果报道如 下1材料与方法1.1材料1.1.1来源 采集四川峨眉山唐山健康植株的枝条；四川都江堰市虹口乡健 康植株的枝条作为样本原植物经鉴定为厚朴Magnolia officinal is Rehd. et Wils.1.1.2培养基PDA培养基（马铃薯培养基）（用于培养）、PDA培养基+ 青链霉素混和液（用于分离）、查氏培养基（NaN03，K2HP04，KC1珊gSO4，FcS04， 蔗糖）（用于鉴别）、促孑包培养基（KH2P04，KN03，MgS04 - 7H2O，KC1 ，淀粉， 葡萄糖，蔗糖）（用于鉴别）1.2方法1.2.1内生真菌的分离用自来水将新鲜植物表面洗净，稍干后切成适宜长 度的小段，在75%酒精中浸泡3〜5min，用无菌水冲洗3〜4次，无菌滤纸吸干。

然后用无菌刀片将组织表皮削去，分别取韧皮部、木质部和髓部切成5 mmx5 mm xl mm的小块贴放于分离培养基上，置25〜28C恒温箱中培养3〜20 d，待培养 基上各丰直物组织周围长出菌丝后，采用尖立荷菌丝挑取法对所分离的内生真菌进行 纯化，即得内生真菌1.2.2内生真菌的鉴定采用插片培养和点植法，对分离获得的银杏内生真 菌进行显微形态特征的观察、分类鉴定分类检索参照文献〔2,3〕2结果与讨论2.1厚朴内生真菌种群多样性分析从厚朴中共分离出48株内生真菌，经 显微形态观察，鉴定为1纲、3目、6科、16属厚朴内生真菌种群组成见表1表1 厚朴内生真菌种群组成(略)由表1可以看出，厚朴内生真菌在种类上存在着极其丰富的多样性特征在 厚朴内生真菌中，从数量上看，以曲霉属(Aspergillus )、青霉属(Pcnici 1 Hum) 和镰泡属(Fusarium)为优势种群，包含菌株分别占总菌株数的31.3%，18.8%， 14.6% o部分属种代表性显微形态特征参见图1〜62.2不同采集地点厚朴内生真菌的分布从不同地点采集的厚朴才•直株中均分 离到了一定数量、不同类群的内生真菌，表明内生真菌在厚朴体内广泛存在。

不 同采集地的厚朴中内生真菌的优势菌群不同其中，采集于峨眉山唐山的厚朴优 势菌群为青霉属（Pcnicillium）；采集于都江堰市虹口乡的厚朴优势菌群为曲 霉属（Aspergillus） 结果见表2 图1葡萄JfiBotrytis sp.显微特征（略）图2镰泡菌Fusarium sp.显微特征（略）图3阜泡霉Papularia sp.显微特征（略）图4胶帚霉Gliocladium sp.显微特征（略）图5曲霉Aspergillus sp.显微特征（略）图6青霉Penici 11 ium sp.显微特征（略）由表2可以看出，采集于峨眉山的厚朴植株中的内生真菌在种类上较乏采自 都江堰者显得丰富，两地植株中分离出的内生真菌数量相当镰抱属（Fusarium） 为不同来源厚朴植株的共有菌群，而两地植株的优势菌群也成为各自的特有菌群 之一表2 不同采集地点厚朴内生真菌数量及种类分布情况（略）本次实验从两个不同来源的厚朴中共分离到48株内生真菌，经鉴定为1纲、 3目、6科、16属，显示出该植物内生真菌在种类和数量上的多样性采自不同 地点的厚朴植株内生真菌种群差异较为明显，采集于峨眉山唐山的厚朴优势菌群 为青霉属（Penici 11 ium），而采自都江堰市虹口乡的厚朴优势菌群为曲霉属（Aspergi Hus）。

镰抱属（Fusarium）是不同来源厚朴植株的共有菌群采集 于峨眉山的厚朴植株中的内生真菌在种类上较之采自都江堰者显得丰富我们认 为这与采集地的具体环境及厚朴的树龄有关树龄较长的植株能够提供给微生物 一个相对较长的与宿主之间的“磨合期”，使一些致病菌转变成暂时不致病的内 生菌，内生真菌的种类也就相对较多这再一次表明，植物内生真菌的数量和种 类与植物自身状况及其所处环境密切相关有关厚朴内生真菌中活性菌株的筛选 研究，将在随后的文章中给予报道参考文献：〔1〕国家药典委员会.中国药典，I部〔S〕.北京：化学工业出版社， 2005 ： 176.〔2〕魏景超.真菌鉴定手册〔M〕.上海：上海科学技术出版社，1979.〔3〕 H. L巴尼特，B. B亨特著，沈崇尧译.半知菌属图解〔M〕.北京：科学出版社，1977.。