四大类微生物菌落形态的比较及识别.doc

四大类微生物菌落形态的比较和鉴识一、实验目的和内容目的：1熟习四大类微生物菌落的主要特色2 掌握鉴识四大类微生物菌落形态的依照和重点，并应用于鉴识未知菌落内容：1观察已知的四大类微生物菌落特色2 辨识未知的四大类微生物菌落特色实验原理掌握鉴识四大类微生物菌落形态的重点对于从事菌种的挑选、杂菌的鉴识和菌种判断等项工作都有重要意义菌落是由某一微生物的少量细胞或孢子在固体培育基表面生殖后所形成的子细胞集体，所以，菌落形态在必定程度上是个体细胞形态和构造在宏观上的反响因为每一大类微生物都有其独到的细胞形态，因此其菌落形态特色也各异在四大类微生物的菌落中，细菌和酵母菌的形态较凑近，放线菌和霉菌形态较相似菌和酵母菌的异同细菌和多数酵母菌都是单细胞微生物菌落中各细胞间都充满毛细管水、养料和某些代谢产物，所以，细菌和酵母菌的菌落形态拥有尖似的特色，如湿润、较圆滑、较透明、易挑起、菌落正反面及边沿、中央部位的颜色一致，且菌落质地较均匀等它们之间的差别以下：细菌：因为细胞小，故形成的菌落也较小，较薄、较透明且有“细腻”感不一样的细菌会产生不一样的色素，所以常会出现五彩缤纷的菌落其余，有些细菌拥有特别的细胞构造，所以，在菌落形态上也有所反响，如无鞭毛不可以运动的细菌其菌落外形较圆而突出；有鞭毛能运动的细菌其菌落常常大而扁平，周缘不整齐，而运动能力特强的细菌则出现更大、更扁平的菌落，其边沿从不规则、缺刻状直至出现乔迁性的菌落，例如变形杆菌属和菌种。

拥有荚膜的细菌其菌落更黏稠、圆滑、透明荚膜较厚的细菌其菌落甚至呈透明的水珠状有芽孢的细菌常因其折光率和其余原由此使菌落呈粗糙、不透明、多皱褶等特色细菌还常因分解含氮有机物而产生臭味，这也有助于菌落的鉴识酵母菌：因为细胞较大（直径约比细菌大10倍）且不可以运动，故其菌落一般比细菌大、厚并且透明度较差酵母菌产生色素较为单一，平时呈矿蜡色，少量为橙红色，个别是黑色但也有例外，如假丝酵母因形成籍节状的假菌丝，故细胞易向外圈延长，造成菌落大而扁平易边沿不整齐等特有形态酵母菌因广泛能发酵含碳有机物而产生醇类，故其菌落常伴有酒香味2．放线菌和霉菌的异同放线菌和霉菌的细胞都是丝状的，当生擅长固体培育基上时有营养菌丝（或基内菌丝）平易生菌丝的分化气生菌丝向空间生长，菌丝之间无毛细管水，所以菌落外观呈干燥、不透明的丝状、绒毛状或皮革状等特征因为营养菌丝伸入培育基中使菌落和培育基连接密切，故菌丝不易被挑起因为气生菌丝、孢子和营养菌丝颜色不一样，常使菌落正反面呈不一样颜色丝状菌是以菌丝顶端延长的方式进行生长的，越近菌落中心的气生菌丝其生理年龄越大，也越早分化出子实器官或分生孢子，从而反响在菌落颜色上的变化，一般状况下，菌落中心的颜色常比边沿深。

有些菌的气生菌丝还会分泌出水溶性色素并扩散到培育基中而使培育基变色有些菌的气生菌丝在生长后期还会分泌滴，所以，在菌落上出现“水珠”放线菌：放线菌属原核生物，其菌丝纤细，生长较慢，气生菌丝生长后期逐渐分化出孢子丝，形成大批的孢子，所以菌落较小，表面呈密切的绒状或粉状等特色因为菌丝伸入培育基中常使菌落边沿的培育基呈凹状许多放线菌还产生特别的土腥味或冰片味霉菌：霉菌属真核生物，它们的菌丝一般较放线菌粗（几倍）且长（几倍至几十倍），其生长速度比放线菌快，故菌落大而松散或大而密切因为气生菌丝会形成必定形状、构造和色彩的子实器官，所以菌落表面常常有肉眼可见的构造和颜色依据上述特色可将四大类微生物菌落的鉴识重点归纳以下：三、实验资料和器具已知菌落：细菌类（大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌）酵母（酿酒酵母）放线菌类（细黄链霉菌）霉菌类（产黄青霉、黑曲霉、黑根霉）未知菌落试剂：培育基（牛肉膏蛋白胨培育基、马铃薯培育基和高氏1号培育基）四、操作步骤1制备已知菌的单菌落经过平板划线法获取细菌、酵母菌和放线菌的单菌落用三点接种法获取霉菌的单菌落细菌平板放37恒温培育24~48小时酵母菌平板置28培育2~3天。

霉菌和放线菌置28培育5~7天待长成菌落后，观察并记录四大类微生物菌落的形态特色2 制备未知菌的菌落特色从环境检测所获取的平板，挑取若干个菌落，逐一编号，作为鉴识四大类用的未知菌落3 鉴识未知菌落1. 划分“干”或“湿”：依据菌落是“干”或“湿”及菌落正反面颜色、中央与边沿颜色能否一致，第一判断某未知菌落是属于细菌、酵母菌类，还是属于放线菌、霉菌类2. 细分菌落：依据上述重点进一步划分未知菌落是属于四大类中的哪一类菌，并将判断结果填入下表中3. 结果记录（一）菌落形态特色的描述1．细菌菌落的描述菌落表面形态：有圆滑、皱褶、放射状、根状等菌落边沿形态：有整齐、波状、丝状、锯齿状、裂叶状等形态菌落隆起形态：有扁平、隆起、凉帽状、胶状等透明度：可分为秀明、半透明、不透明等2．酵母菌菌落形态的描述：可参照细菌3．放线菌和霉菌菌落的描述：菌落表面的形态：粗糙、齐心圆、辐射状沟纹、粉状、绒毛状或皮革状等菌落颜色：菌落正面颜色（包含气生菌丝或孢子颜色）；菌落反面颜色（指营养菌丝颜色）；有否水溶性色素？（色素会渗透培育基中，使菌落四周的培育基改变颜色）二）将已知菌落形态的观察和描述记录于表1中（三）将对未知菌落的鉴识结果记录在表2中六、注意事项1 每张实验台上各有一套已知菌落和未知菌落，观察时请勿随意搬动，省得搞混菌号。

2 观察和判断菌落大小时，要注意单菌落在平板上分布疏密的状况，一般菌落密集处勤菌落小，分布罕见的部位菌落大表1已知菌落形态的观察记录鉴识重点菌落描述大菌名湿干表面边沿隆起形颜色透明类厚薄大小松密大小状正面反面水溶性色素度细大肠杆菌金黄色葡萄菌球菌枯草杆菌酵母酵酒酵母菌粘红酵母热带假丝酵母放线细黄链菌霉菌霉菌青霉曲霉根霉表2未知菌落的观察记录湿干菌落描述菌落厚或薄大或小松或密大或小表面边沿隆起形状颜色号正面反面水溶性色┊┊┊┊分其余基本方法微生物分其余方法很多，主要有连续稀释分别法，平板划线分别法和单细胞分别法等方法此中，单细胞分别法需要名贵精美仪器，中学没法睁开，而连续稀释分别法和平板划线分别法却简略易行，中学完整具备睁开条件现将这两种方法说明以下1.连续稀释分别法①取1克土样，在火焰旁放入装有99毫克无菌水的锥形瓶内，充分摇匀，将菌分别②用移液管汲取上述菌悬液倍，即10-3的菌悬液按1毫升，放入盛有9毫升无菌水的试管中，并进一步稀释成100010倍稀释法连续稀释到10-8（每1次稀释，都须更换移液管）③取3支1毫升移液管分别从10-8、10-7、10-6菌悬液中汲取1毫升菌悬液，分别注入编号10-8、10-7和10-6的培育皿内，同一稀释液重复做3个培育皿。

④将温度为45～50℃的营养琼脂培育基（其成分和配制方法见本章第三节）倒入上述各培养皿内，轻轻旋转使菌悬液充分混杂均匀，凝固后，将培育皿倒扣搁置在暖和处（28℃左右），每天观察培育基表面有无微生物菌落⑤经过一准时间培育后，培育基上长出菌落，依据菌落特色，初步判断属于何各种类的微生物，并在显微镜下检查，若菌体形态一致，则可以为是初步分别到纯菌种⑥将分别培育所得的纯菌种，从平板培育基转移到试管斜面培育基上培育2.平板划线分别法①取1克土样，在火焰旁加进装有99毫升无菌水的锥形瓶中，拥堵棉塞，制成菌悬液待用②取一培育皿置于实验台上，左手将培育皿打开稍许，向培育皿内注入融化的营养固体培育基 10～12毫升，轻轻转动培育皿，使此中的培育基分布均匀，平放桌上，使其凝成平板而后在皿底用蜡笔划分A、B、C、D几个区应连续制作几份平板培育基③将培育皿底部用姆指和无名指固定成倾斜状态，在火焰旁将培育皿略微打开在此同时，用环状接种针在火焰旁取少量菌悬液，迅速送入培育皿内，在平板培育基的一边，作第1次平行划线6～7条，转动培育皿约70°角，用烧过冷却的接种针，经过第1次划线部分作第2次平行划线，而后再用相同方法，作第3次平行划线。

划线时，应使平板培育基表面向下，省得空气中杂菌落入接种针应与平板表面成30°角左右不要使接种针碰到培育皿边缘，也不要将培育基划破④将划线后的培育皿倒放在28℃左右的暖和处进行培育，待长出菌落后，判断微生物类群，并依据镜检结果，判断能否已分别到了纯菌种假如菌种很纯，则可转移到斜面培育基长进一步培育连续稀释分别法和平板划线法，均须在无菌室或接种箱内进行二、各种微生物的分别1.从土壤中分别好气性及兼性厌气细菌其分别方法见本节“分其余基本方法”2.从土壤中分别放线菌①制作高氏一号培育基，趁热注入培育皿中，凝成平板，待用②称取土壤10克，放入装有100毫升无菌水的锥形瓶中，并加入10%酚10滴，以克制细菌生长振荡10分钟，制成10-1菌悬液依照连续稀释分别法，进一步制成10-3菌悬液③用移液管汲取0.1毫升10-3菌悬液，注入平板培育基上，用无菌玻璃刮刀将菌悬液均匀涂抹在整个培育基上而后将培育皿倒置于25～30℃温箱中，培育7～10天，培育基上会出现微生物菌落假如菌落的硬度较大，干燥致密，且与基质密切结合，不易被针挑起，这就是放线菌菌落④挑取放线菌菌落，接种于斜面培育基上3.从土壤中分别霉菌①制作。