Kupffer细胞中NLRP3炎症小体在非酒精性脂肪肝炎中的作用机制.pdf

分类号：U D C ：R 6 5 7 ．3重庆医科大学密级：硕士学位论文论文题目作者姓名K u p f f e r 细胞中N L R P 3 炎症小体在非酒精性脂肪肝炎中的作用机制朱稀雯指导教师姓名( 职称、单位名称)龚建平教授重庆医科大学附属第二医院重庆市渝中区临江路7 4 号4 0 0 0 1 0申请学位级别硕士学科、专业名称外科学( 肝胆外科)论文答辩年月2 0 1 3 年5 月2 0 1 3 年5 月重庆医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得重庆医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任学位论文作者签名：日期：7 秒l 弓．o t 上占学位论文版权使用授权书本入完全了解重庆医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期问论文工作的知识产权单位属重庆医科大学本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为重庆医科大学。

学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅学校可以公布学位论文的全部或部分内容( 保密内容除外) ，并编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他手段保存论文保密论文在解密后适用本授权二挣论文作者签名：指导教师签日期：目录英汉缩略语名词对照⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯- 1中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．3英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．5论文正文；K u p f f e r 细胞中N L R P 3 炎症小体在非酒糟性脂肪肝中的作用机制⋯7前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯．7 1 材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．92 实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．1 23 结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．2 0 4 讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2 7全文小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3 1 参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3 2 文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3 4 致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5 2攻读硕士期间发表的文章⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．5 3缩写词A N O V A姆B S AD M 匣MD A BE U S AF B SF F AF I T CG o l dv i e wH B S SH CH R PI L - l BI L ．1 8I RK C SL P Sm MM SN A 覃L DN A S H英汉缩略语名词对照英文全文A n a l y s i so fv a r i a n c eA m m o n i u mp e r s u l f a t eF a t t ya c i df r e ea l b u m i nb o v i n es e r u m中文译名方差分析过硫酸铵f r o m 无脂肪酸的牛血清白蛋白D u l b e c c o ’Sm o d i f i e de a g l em e d i u m3 ．3 N - D i a m i n o b e n z i d i n eE n z y m el i n k e di m m u n o s o r b e n ta s s a yF o e t a lB o v i neS e r u mF r e ef a t t ya c i dF l u o r e s c e mi s o t h i o c y a n a t eG o l d v i e wH a n k s ’B a l a n c e dS a l tS o l u t i o nH e p a t i cc e l lH o r s e r a d i s hp e r o x i d a s eI m e r l e u k i n ．1BI n t e r l e u k i n ．18I n s u l i nr e s i s t a n c eK u p f f e rc e l l sL i p o p o l y s a c c h a r i d em m o l ／LM e t a b o l i cs y n d r o m eN o nA l c o h o l i cF a t t yL i v e rD i s e a s eN o n - a l c o h o l i cs t e a t o h e p a t i t i s1D M E M 培养基3 ’3 ．二胺基联苯胺酶联免疫吸附分析胎牛血清游离脂肪酸异硫氰酸荧光素I 型核酸染料H a n k s ’液肝实质细胞辣根过氧化物酶白介素．1 B白介素．1 8胰岛素抵抗K u p f f e r 细胞脂多糖毫摩尔／升代谢综合征非酒精性脂肪性肝病非酒精性脂肪性肝炎A F L DN I R P 3O DP AP B SP V D FR O SS D S ．P A G ET A Er I B ST B S TA l c o h o l i cF a t t yL i v e rD i s e a s eN I ．R P 3i n f l a m m a s o m eO p t i c a ld e n s i t yP a h n i t i ca c i dP h o s p h a t eb u f f e r e ds a l i n eP o l y v m y l i d e n ef l u o r i d eR e a c t i v eo x y g e ns p e c i e sS o d i u md o d e c y ls u l f a t ep o l y a c r y l a m i d eg e le l e c t r o p h o r e s i sT r i sa c e t a t e ．E D T Ab u 能rT r i s ．b u f f e r e ds a l i n eT w e e n2 0 ．．t r i s ．．b u f f e r e ds a l i n e2酒精性脂肪性肝病N L R P 3 炎症小体吸光光密度值棕榈酸磷酸盐缓冲液P V D F 膜活性氧聚丙烯酰胺凝胶电泳T r i sa c e t a t e 缓冲液t r i s ．缓冲盐K u p f f e r 细胞中N L R P 3 炎症小体在非酒精性脂肪肝炎中的作用机制摘要目的1 、证实在N A S H 患者肝脏K u p f f e r 细胞( K C s ) 中N L R P 3 炎症小体的表达。

2 、初步探讨N L R P 3 炎症小体在游离脂肪酸( F F A ) 激活离体K C s 所致炎症反应中可能发挥的作用方法1 、收集疑似非酒精性脂肪性肝炎患者肝脏标本，进行H E 、M A S S O N 染色，根据N A S 积分分组：N A S 积分> 4 分为N A S H 组( 5 例) ，N A S 积分 4a sN A S Hg r o u p ( 5c a s e s ) ，N A S 9 0c m ( 男) ，> 8 0c m ( 女) ，B M I > 2 5 k g ／m 2 ；( 3 ) 甘油三酯增高：血清T G ≥1 1 7 m m o l ／L ，或已诊断为高脂血症；( 4 ) 高密度脂蛋白胆固醇降低：H D L - C 4 分为N A S H 组，N A S 积分旦m工卜I t - l pI L - 1 8■C o n t r o lG r o u p 口F F AG r o u p图1 4 ：备姐E L l S 检测I L - 1 B 、I L - 1 8 表达F i g ．1 4T h el e v e l so ft h ep r o t e i ni nd i f f e r e n tg r o u p sb yE L I S A ．‘ 10 0 0 9 9／L ) 0 0 1 ．C l i n i c a lr e s e a r c h e ss h o w e dt h a tt h el e v e lo fs l C A M 一1w a ss i g n i f i c a n t l yh i g h e ri nH C Cg r o u pt h a nt h a ti nt h eb e n i g nt u m o rg r o u pa n dn o r m a lc o n t r o lg r o u p ，a n dw a sp o s i t i v e l yc o r r e l a t e dw i t ht h ed e g r e eo fc i r r h o s i s 【1 7 】- T h es a m ec o n c l u s i o nw a sd e t e c t e da tg e n el e v e l ‘18 1 ．T h u s ，s l C A M —lh a sav a l u eo fa u x i l i a r yd i a g n o s i si nA F Pn e g a t i v eo rs u s p i c i o u sp o s i t i v ep a t i e n t s ．I tn o to n l yc a nb eu s e da sab i o l o g i c a li n d e xf o re a r l yd i a g n o s i s ，b u ta l s oh a sa ni m p o r t a n tc l i n i c a ls i g n i f i c a n c ef o ra s s e s s i n gH C Cp a t i e n t ’Sc o n d i t i o n ，c u r a t i v ee f f e c tj u d g m e n t ，r e c u r r e n c ea n dp r o g n o s i sa s s e s s m e n t ．M o r ei n t e r e s t i n gi st h a t ，I C A M - lm a yb e c o m eab r e a k t h r o u g hf o rs o m en o n ．i n v a s i v et e c h n i q u et od e t e c to r g a n —s p e c i f i ci n f l a m m a t i o n ．T h es u p e r p a r a m a g n e t i ci r o no x i d e ( S P I O ) 一b a s e dn a n o r n i c e l l et e r m e dl e u k o c y t e ．m i m e t i cn a n o p a r t i c l e ( L M N ) c a np r e f e r e n t i a l l yl o c a l i z et oc e l l sw i t hi n f l a m m a t i o n ．i n d u c e do v e r e x p r e s s i o no fI C A M 一1 ．W h i l et h en o v e lM Ⅺq u a n t i t a t i v es u s c e p t i b i l i t ym a p p i n g ( Q S。