蔬菜中硝酸盐和亚硝酸盐含量的测定.doc

蔬菜中硝酸盐和亚硝酸盐含量的测定摘要:蔬菜中的硝酸盐和亚硝酸盐是一种对人体有害的化学物质，其含量比其他植物都高，人体摄入它会引起多种疾病．本实验采用分光光度发分别对拜城县恰玛古，柯坪县恰玛古,伊宁市恰玛古,大白菜,黄萝卜，黄瓜中亚硝酸盐及硝酸盐含量进行测定成果表白：（1）亚硝酸盐:六种蔬菜中亚硝酸盐含量有明显的差别，测定成果是:大白菜０.7919mg/g,黄萝卜0.6930mｇ/g,黄瓜0．５７6３mｇ/ｇ，拜城恰玛古０.５528ｍg／ｇ，伊宁恰玛古1.１2９４ mg/g，柯坪恰玛古0.517４mｇ/g2)硝酸盐：大白菜1.6０９8mg/g,黄萝卜0.0598mg/g，黄瓜0．74２1mg/g，拜城恰玛古０．２６08mg／ｇ，伊宁恰玛古2．5３０8mg/g,柯坪恰玛古0.03１7mｇ/ｇ，蔬菜中亚硝酸盐含量的回收率88．8０%核心词：硝酸盐；亚硝酸盐；蔬菜;测定措施;ﻩ前言：蔬菜特别是叶菜类蔬菜,是一种易于富集硝酸盐的植物人体摄入的硝酸盐81.2％来自蔬菜［1]硝酸盐自身毒性不大,对人畜无直接的危害,但含量过高对人体也许导致危害，由于在微生物的作用下极易还原为亚硝酸盐亚硝酸盐是一种有毒物质,可直接使动物中毒！导致亚铁血红蛋白症，严重可致死亡[2]。

亚硝酸盐，一类无机化合物的总称重要指亚硝酸钠.亚硝酸钠为白色至淡黄色粉末或颗粒状，味微咸,易溶于水外观及滋味都与食盐相似，并在工业、建筑业中广为使用,肉类制品中也容许作为发色剂限量使用由亚硝酸盐引起食物中毒的机率较高食入０.３～０．5克的亚硝酸盐即可引起中毒甚至死亡[3]硝酸盐，亚硝酸盐广泛存在于人类环境中，其对人类健康和生态环境的危害,日益受到人们的普遍关注硝酸盐在细菌的作用下可还原成亚硝酸盐,使血液的载氧能力下降,从而导致高铁血红蛋白症联合国世界卫生组织和粮农组织[4]早在１973　年就制定了食品中硝酸盐的限量原则,以ADＩ值为基本，提出蔬菜可食部分中硝酸盐含量的卫生原则为43２mｇ／kg （鲜样),亚硝酸盐成人每人每日容许量为7．8mg蔬菜中硝酸盐和亚硝酸盐含量的高下已成为衡量蔬菜安全与否的一项重要指标,因此迅速精确地测定蔬菜中硝酸盐和亚硝酸盐的含量极为重要[５]亚硝酸盐（NO2－)是氮循环的中间产物，不稳定，广泛存在于水体、土壤和各类食品中根据水环境条件，可被氧化成硝酸盐,也可被还原为氨亚硝酸盐可使人体正常的血红蛋白(低铁血红蛋白）氧化成为高铁血红蛋白，发生高铁血红蛋白症，失去血红蛋白在人体内输送氧的能力，导致浮现组织缺氧症状。

此外,在人的肠胃中，亚硝酸盐还可与仲胺类物质反映,生成具有致癌性的亚硝胺类物质因此,亚硝酸盐成为水质、食品等的重要监测项目之一[6］用分光光度法测定蔬菜中亚硝酸盐含量时,为了消除蛋白质对测定成果的干扰，往往通过沉淀的措施来清除蛋白质[7]在GB《中华人民共和国国标—食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定（GＢ/T5０09.33—1996)中的格里斯试剂比色法》中,“样品解决”的重要目的就是通过沉淀来清除蛋白质，获测定所需的澄清滤液[8]样品解决时所加的氢氧化钠溶液,亚铁氰化钾，乙酸锌溶液和水浴加热的作用是使蛋白质变性而易沉淀[9]本文根据测定亚硝酸盐的原则措施于5４０　nm处测定生成的偶氮化合物的吸光度,从而建立了一种简朴、迅速、敏捷度较高的测定痕量亚硝酸盐的措施1.1实验部分1.1．1实验原理弱碱性条件下,用饱和四硼酸钠、亚铁氰化钾、乙酸锌沉淀除去蛋白质，氢氧化铝悬浮液脱色，减压抽滤;在酸性条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸酰胺起重氮化作用,再与萘乙二胺盐酸盐和对氨基苯磺酸反映，生成紫红色偶氮染料，于波长5４０nｍ 处测量蔬菜中亚硝酸盐的含量1．1.2仪器与试剂1.１.2.1 实验仪器:搅汁机；恒温水浴锅;７２２型分光光度计;电子天平;冰箱供试蔬菜为：大白菜,黄萝卜,黄瓜,拜城恰玛古,伊宁恰玛古，柯坪恰玛古。

1.1.2.2实验试剂重要试剂有１0．6%亚铁氰化钾溶液；2２%乙酸锌溶液;饱和四硼酸钠溶液;磺胺；萘乙二胺盐酸盐；盐酸；镉粒;氨缓冲溶液；活性碳；硝酸钾;亚硝酸钠原则使用液;1.1. 3试剂的配制：①10．6 %亚铁氰化钾溶液:称取1０6g(10.6ｇ) 亚铁氰化钾[K4Fe(CＮ) 6·3H2O］ ,溶于水后,稀释至１００0ｍｌ(100ml)②22%乙酸锌溶液:称取２２0g(22g）乙酸锌［Ｚn （CH2ＣＯO）2 ·2H2O] ,加30ml冰乙酸和适量水溶解,并用水稀释至1０00ｍl(10０ml）③饱和四硼酸钠溶液:称取２５g（5g)四硼酸钠(Ｎa2B4O7·10H2O),溶于５00ml(１00ml)热水中，冷却后备用④对氨基苯磺酸溶液:称取0.8ｇ对氨基苯磺酸,溶于１2　%乙酸溶液15０ｍl中(低温加热并搅拌加速溶解)，冷却后避光保存⑤α—萘胺溶液:称取0.２gα—萘胺溶于数滴冰乙酸中,再加12％乙酸溶液１5０ml,混匀，避光保存⑥对氨基苯磺酸和α—萘胺混合液:测定前，将对氨基苯磺酸溶液与α—萘胺溶液两种溶液等体积混合摇匀,备用⑦亚硝酸钠原则储藏溶液:精密称取0.2９99g于硅胶干燥器中干燥24h的亚硝酸钠,加水溶解移入1000ｍl容量瓶中,加2ml氯仿作为保护剂,并稀释至刻度。

此溶液每毫升相称于0.2 mg亚硝酸根⑧亚硝酸钠原则使用液:临用前，吸取亚硝酸钠原则储藏溶液5.００ ml ,置于100ｍl容量瓶中，加水稀释至刻度,此溶液每毫升相称于10μｇ亚硝酸钠⑨氢氧化铝悬浮液:称取１25ｇ(12．５g）硫酸铝溶于1000ml(1００ml)蒸馏水中,慢慢加入浓氨水,使铝离子沉淀完全,放置澄清后倾去上层清液,加蒸馏水反复洗涤,直至清液加氯化钡溶液（检查硫酸根)和硝酸银溶液(检查氯离子)无浑浊现象为止,最后向氢氧化铝胶体沉淀中加300ｍl蒸馏水,使用时振摇均匀１.1．3 　原则曲线的绘制精确吸取1０μg/ml亚硝酸钠原则使用液０，1.0,2.0，3.0,4.０,5.０ｍl依次加入到５0ｍL容量瓶,再分别加人3~４滴HＣl（1∶1)混匀,2ml对氨基苯磺酸—α—萘胺混合液混匀,静置15 ｍin，用3ｃm比色杯,于波长54０ｎｍ处测吸光度,绘制原则曲线，成果见表２-2,图2-21.1.4样品解决与测定(表1-1）测定亚硝酸盐含量的取样量（g)　大白菜黄萝卜黄瓜拜城恰玛古伊宁恰玛古柯坪恰玛古第一次20．0０420.0682０．07820.０1220．0320.01５第二次2０.07720.０５920.08９20．0092０.03320.027第三次20.0１５２０.00３20.0１7２0.０382０.070２0.030把样品洗净,匀浆,称取20ｇ匀浆液于烧杯中,加６０mｌ热水(65℃—７5℃)，用ＮａOＨ溶液调节至偏碱性，再用水将样品所有转移至5０mｌ 溶液瓶中，置于６0℃水浴加热10min，取出冷却，加水至刻度,混匀,静置30min,上清液经乙酸锌和活性炭混合过滤,收集滤液备用。

亚硝酸盐测定：用移液管吸取２0ml提取液于5０ml容量瓶中,用水稀释至约30ｍｌ,加入磺胺溶液5ｍｌ,再加入盐酸溶液３ｍｌ,混匀，置于室温遮光处,加入萘乙二胺盐酸盐1ml,混匀,用水定容在波长５4０nm处测定吸光度依公式求得样品中亚硝酸盐含量,成果见表4硝酸盐测定:用移液管吸取提取液20ml于50mｌ具塞锥形瓶中，加入５mｌ蒸馏水,５ｍｌ氨缓冲液和2g镉粒,振荡，过滤得还原液吸取10ml还原液至5０mｌ容量瓶中显色环节同亚硝酸盐测定环节,依公式求得硝酸盐含量，成果见表２－3１.2.5计算样品中亚硝酸盐含量公式:C×5０ 　 　　 　 　 　　 　Ｘ=—————————— 　　 　 　 　 　 　 　　 　 　 ｍ×V2/ V1×1０00 　 式中:　 　 X——样品中亚硝酸盐的含量,mg/g;ｍ——样品质量,ｇ;　 　 C——查得样品在曲线上浓度, μg/mL V１——样品解决液总体积，mL;V2——测定用样液体积,mL2．成果与分析分光光度法测定各蔬菜中亚硝酸盐及硝酸盐含量实验中对样品三次平衡分析,测定成果见下表。

亚硝酸盐最大吸取波长的选择: 　　 　　　 　 　 　 　 　　 (表２-1）波长50051052053０5４０５50５60570580590吸光度０．06５0．08５0.102０.115０．1２１０.1１70.110.０960.0７２０.047 　（图2-1)亚硝酸盐原则液的吸取波长从表２-1,图2-1可以看出亚硝酸盐原则液的最大吸取波长为５4０nm.最大吸取波长相应的吸光度为0．1２1 亚硝酸盐原则曲线的绘制：(表2-2)亚硝酸盐原则溶液的浓度及吸光度浓度（μg／mL）0０.2０.40.60.8１吸光度(A)0０.0890.20１0.3２90．4510.584（图２-2)亚硝酸盐原则液的原则曲线亚硝酸盐及硝酸盐含量的测定（表2-３）不同蔬菜中亚硝酸盐的含量(mg／g）吸光度浓度含量平均值相对平准偏差大白菜0.0５10．11９6０．74720．791９ 3.76%0.０5７0.1２９７0．80７８0.05８0.1３14０.８２08黄萝卜０.0430.10６0０.６6０５０.6９３0 3.1８％０.0４60.11110．69２40.０4９0.11620．7261黄瓜0.03２0.08740.５4420．５７６３ 4.７９%0．0390.09930.６1７６0．0３40.0９080．５670拜城恰玛古0．03４０.０９０80.56710．５5２8 4．74%0.0３50．09250．5７780.０2９０.08230.５1３6伊宁恰玛古０.0920.1890１.17951．１29４ 2.9６%０．0870.18０51．12６50．083０.１７38１．08２2柯坪恰玛古0．0280.０8０６0.5036０.0３10.08570．53５00.51７4 2．26%０.0290.0８23０.5138（表2-４）不同蔬菜中硝酸盐的含量(mg/ｇ）总吸光度总浓度总含量硝酸盐含量平均值相对平准偏差大白菜0.2170.400７　2.50３6 1.７5641.６0987.29%０.１９30.3６00　2.2415 1.４3３8０.2１30．39３9 2．46０0 1．639１黄萝卜0．0４90.1162 0.7２3７　0.063３0．05987.8５%0.０5１０.１1９6　0.7４52　0.05280.0５５0．1264　0.７896 0.0635黄瓜０．1０80.２161　1．3454 0.８0120.７4２16.09%。