9月18日细胞培养平台课.ppt

细细 胞胞 与与 组组 织织 培培 养养 技技 术术李李 呼呼 伦伦哈尔滨医科大学神经生物学教研室哈尔滨医科大学神经生物学教研室 2014.09.18前前 言言组织培养技术的应用组织培养技术的应用•基础研究基础研究•工业化生产工业化生产绵羊羊B乳腺乳腺细胞核胞核易核卵易核卵融合卵融合卵绵羊羊C子子宫多莉多莉植入植入植入植入生生产克克隆隆多多莉莉羊羊示示意意图图取出取出未受精卵未受精卵去核去核电激激体外胚胎体外胚胎发育育绵羊羊A多莉多莉克隆猴克隆猴Park IH, et al. Cell. 2008 Sep 5;134(5):877-86.病毒组织培养疫苗生产病毒组织培养疫苗生产 基因工程产品基因工程产品 层析层析 和和 超滤超滤分离、浓缩生物大分子分离、浓缩生物大分子 常用的手段常用的手段试管婴儿静止培养静止培养旋转培养旋转培养振荡培养振荡培养生物反应器生物反应器高密度培养高密度培养厌氧培养厌氧培养一、细胞培养方式一、细胞培养方式二、体二、体 外外 培培 养养 的的 分分 类类 体外培养体外培养 in vitro–细胞培养细胞培养 Cell culture –组织培养组织培养 Tissue culture –器官培养器官培养 Organ culture 体外培养种类体外培养种类细胞培养细胞培养 （（ Cell culture ）） 培养物是单细胞或培养物是单细胞或群体细胞群体细胞 模拟体内生理环模拟体内生理环境，在无菌、适当境，在无菌、适当的温度和一定的营的温度和一定的营养条件下，使之生养条件下，使之生长生存维持结构和长生存维持结构和功能的培养方法。

功能的培养方法组织培养（组织培养（Tissue culture））方法同上，使用组织块方法同上，使用组织块(0.5-1mm3)或薄片或薄片(0.2mm)器官培养（器官培养（Organ culture））应用和组织培养相似的条件，培养的是器官的原基、应用和组织培养相似的条件，培养的是器官的原基、器官的一部分或整个器官，使之在体外生存、生长器官的一部分或整个器官，使之在体外生存、生长和保持一定功能的方法和保持一定功能的方法使用器官原基或器官的一部分或整个器宫使用器官原基或器官的一部分或整个器宫三、组织与细胞培养的优缺点三、组织与细胞培养的优缺点u优点：优点：u能长时间直接观察活细胞的形态结构和生命活动；可能长时间直接观察活细胞的形态结构和生命活动；可用于细胞学、遗传学、免疫学、实验医学和肿瘤学等用于细胞学、遗传学、免疫学、实验医学和肿瘤学等多种学科多种学科的研究工作的研究工作u便于观察、记录、摄影，直接观察细胞变化便于观察、记录、摄影，直接观察细胞变化 u可供研究的可供研究的细胞种类广泛细胞种类广泛，从低等生物到高等动物，，从低等生物到高等动物，以及人类；从胚胎到成体；从正常组织到肿瘤细胞皆以及人类；从胚胎到成体；从正常组织到肿瘤细胞皆可可 u便于便于使用不同方法研究细胞使用不同方法研究细胞（相差显微镜、荧光显微（相差显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、组织化学和同位素标记等）镜、电子显微镜、组织化学和同位素标记等）–培养细胞培养细胞携带有与体内细胞同等的基因组携带有与体内细胞同等的基因组，是分子生，是分子生物学和基因工程学的研究对象和组成部分物学和基因工程学的研究对象和组成部分–可同时提供大量生物可同时提供大量生物性状性状相似的相似的实验对象，耗资少，实验对象，耗资少，经济经济–易于施加物理、化学和生物因素进行实验易于施加物理、化学和生物因素进行实验 –已成为生物制品、基因工程制品、单克隆抗体生产的已成为生物制品、基因工程制品、单克隆抗体生产的必要手段必要手段 u局限性：局限性： 组织和细胞离体以后，独立生存在人工培养环境中，组织和细胞离体以后，独立生存在人工培养环境中，与体内环境相比，仍有很大差异。

故实验结果与体内环境相比，仍有很大差异故实验结果不能推不能推至体内至体内，轻易做出与体内等同的结论，轻易做出与体内等同的结论四、组织与细胞培养的细胞生物学特点四、组织与细胞培养的细胞生物学特点u体体内内外外细细胞胞的的差差异异：：当当人人工工条条件件和和体体内内实实际际情情况况不不完完全全相相同同时时，，细细胞胞在在体体外外培培养养后后，，一一旦旦失失去去神神经经体体液液调调节节和和细细胞胞间间相相互互影影响响，，生生活活在在缺缺乏乏动动态态平平衡衡的的环环境境中中，，发发生生变变化化则则是是必必然然细细胞胞最最多多见见的的表表现现是是：：返返祖祖（（AtavismAtavism））现现象象，，即即失失去去原原有有组组织织结结构构和和细细胞胞形形态态、、分分化化减减弱弱、、细细胞胞趋趋单单一一化、不死性、恶性状态化、不死性、恶性状态u细胞增殖和分化：是细胞生命进化中所获得的基本属性，细胞增殖和分化：是细胞生命进化中所获得的基本属性，增殖使细胞数量增多；分化使机体结构和功能多样化，最增殖使细胞数量增多；分化使机体结构和功能多样化，最后演变成完整的有机体后演变成完整的有机体五、培养细胞的状态五、培养细胞的状态贴附型贴附型u能贴附在支持物表面生长。

大多数培养细胞呈贴附能贴附在支持物表面生长大多数培养细胞呈贴附性生长；性生长；只依赖于贴附才能生长只依赖于贴附才能生长u贴附后，易失去其原有的特征，细胞分化现象常不贴附后，易失去其原有的特征，细胞分化现象常不显著在形态上表现单一化的现象，并常反应其胚显著在形态上表现单一化的现象，并常反应其胚层起源，呈现类似层起源，呈现类似“返祖现象返祖现象”u成纤维型细胞、上皮型细胞、游走型细胞及多形型成纤维型细胞、上皮型细胞、游走型细胞及多形型细胞细胞 悬浮型悬浮型成纤维型细胞成纤维型细胞u细胞体呈梭形或不规细胞体呈梭形或不规则三角形，中央有卵则三角形，中央有卵圆形核，胞质突起，圆形核，胞质突起，生长时呈放射状生长时呈放射状 u成纤维细胞成纤维细胞 、心肌、、心肌、平滑肌、成骨细胞平滑肌、成骨细胞、、骨髓基质干细胞等骨髓基质干细胞等u上皮型细胞上皮型细胞u扁平不规则多角形，扁平不规则多角形，中有圆形核，细胞紧中有圆形核，细胞紧密相连成单层膜密相连成单层膜u消化管外皮细胞、肝消化管外皮细胞、肝、、胰、肺泡上皮胰、肺泡上皮、、血管血管内皮内皮等等  游走型细胞游走型细胞u在支持物上在支持物上散在散在生长生长，一般不连，一般不连接成片。

细胞质接成片细胞质经常伸出伪足或经常伸出伪足或突起，呈活跃的突起，呈活跃的游走或变形运动，游走或变形运动，速度快而且不规速度快而且不规则则u神经胶质细胞神经胶质细胞 多形型细胞多形型细胞u难以确定其规律和难以确定其规律和稳定的形态稳定的形态 u神经组织细胞神经组织细胞 悬浮型悬浮型u见于各种造血系统见于各种造血系统肿瘤细胞肿瘤细胞和血液细和血液细胞胞u胞体圆形，不贴于胞体圆形，不贴于支持物上，呈悬浮支持物上，呈悬浮生长生长u容易大量繁殖容易大量繁殖 六、培养细胞生长的条件六、培养细胞生长的条件u营养营养u生存环境生存环境u温度温度: : 37 ℃℃uO2uCO2: 5% CO2 +H2O ← →H2CO3 ← →H+ + HCO3- pH: 7.0-7.2 渗透压渗透压u无污染无污染u无毒无毒组织培养室的设施及条件组织培养室的设施及条件u压力蒸汽消毒器压力蒸汽消毒器：湿热消毒用途广：湿热消毒用途广u电热干燥箱电热干燥箱：干热消毒（：干热消毒（160℃160℃，，2 2小时）主要用干玻璃小时）主要用干玻璃器皿消毒器皿消毒 u滤器滤器：过滤除菌。

大多数培养用液，如人工合成培养基、：过滤除菌大多数培养用液，如人工合成培养基、血清、酶液等均采用滤过法除菌血清、酶液等均采用滤过法除菌 u超净工作台超净工作台：为细胞操作提供无菌环境：为细胞操作提供无菌环境u紫外灯紫外灯 ：：紫外线消毒主要用于培养室空气、操作台、紫外线消毒主要用于培养室空气、操作台、塑料培养皿和培养板等表面消毒塑料培养皿和培养板等表面消毒 七、无七、无 菌菌 操操 作作u无菌室的灭菌无菌室的灭菌u定期打扫无菌室定期打扫无菌室u实验前灭菌实验前灭菌u实验后灭菌实验后灭菌u实验人员的无菌准备实验人员的无菌准备u肥皂洗手肥皂洗手u穿隔离衣穿隔离衣u酒精棉球擦手酒精棉球擦手无菌操作中常犯的错误无菌操作中常犯的错误吸管、剪刀等碰到其他器皿吸管、剪刀等碰到其他器皿无菌操作中常犯的错误无菌操作中常犯的错误正确的拿管姿势正确的拿管姿势错误的拿管姿势错误的拿管姿势拿吸管时手碰到无菌区拿吸管时手碰到无菌区无菌操作中常犯的错误无菌操作中常犯的错误培养基浸湿吸管底部的棉花培养基浸湿吸管底部的棉花八、细八、细 胞胞 和和 组组 织织 培培 养养将取得的组织细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为培养。

将取得的组织细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为培养1 1、组织块培养、组织块培养 直接将组织块接入培养器皿底部，几个小直接将组织块接入培养器皿底部，几个小时后组织块可贴牢在底部，再加入培养基时后组织块可贴牢在底部，再加入培养基2 2、细胞培养、细胞培养 一般应在接入培养器皿之前进行一般应在接入培养器皿之前进行细胞计数细胞计数，，按要求以一定的量（以每毫升细胞数表示）接入培养器皿按要求以一定的量（以每毫升细胞数表示）接入培养器皿并直接加入培养基细胞进入培养器皿后，立即放入培养并直接加入培养基细胞进入培养器皿后，立即放入培养箱中，使细胞尽早进入生长状态箱中，使细胞尽早进入生长状态 计计 数数 细细 胞胞细胞数细胞数/ml=计数计数16格格×稀释倍数稀释倍数 ×104细胞数细胞数/ml=计数计数16格个数格个数/个数个数×稀释倍数稀释倍数×104培养细胞的观察培养细胞的观察Ø每隔一定时间观察一次每隔一定时间观察一次Ø是否生长良好是否生长良好Ø形态是否正常形态是否正常Ø有无污染有无污染Ø培养基的培养基的PH是否太酸或太碱（由酚红指示剂指示）是否太酸或太碱（由酚红指示剂指示）Ø定时检查培养温度和定时检查培养温度和CO2浓度浓度  概概 念念u原代培养原代培养 直接从体内取出的细胞、组织和器官进行的第一次直接从体内取出的细胞、组织和器官进行的第一次的培养物。

一旦已进行传代培养（的培养物一旦已进行传代培养（Subculture）的细）的细胞，便不再称为原代培养，而改称为细胞系胞，便不再称为原代培养，而改称为细胞系 u传代培养传代培养 细胞长满瓶底后要进行传代培养，将一瓶中的细胞细胞长满瓶底后要进行传代培养，将一瓶中的细胞消化悬浮后分至两到三瓶继续培养每传代一次称为消化悬浮后分至两到三瓶继续培养每传代一次称为“一代一代”二倍体细胞一般只能传几十代，而转化细二倍体细胞一般只能传几十代，而转化细胞系或细胞株则可无限地传代下去胞系或细胞株则可无限地传代下去取取 材材 理论上讲各种动物和人体内的所有组织都可以理论上讲各种动物和人体内的所有组织都可以用于培养，实际上幼体组织（尤其是胚胎组织）用于培养，实际上幼体组织（尤其是胚胎组织）比成年个体的组织容易培养，分化程度低的组织比成年个体的组织容易培养，分化程度低的组织比分化高的容易培养，肿瘤组织比正常组织容易比分化高的容易培养，肿瘤组织比正常组织容易培养 细细 胞胞 培培 养养 的的 准准 备备 工工 作作九、原九、原 代代 培培 养养组组 织织 块块 法法 新鲜取材的组织中新鲜取材的组织中 细胞仍具有分裂增殖的能细胞仍具有分裂增殖的能力。

将组织切成小块培养在模拟体内的环境中，力将组织切成小块培养在模拟体内的环境中，小块组织的细胞可以游离出来，从培养液中吸取小块组织的细胞可以游离出来，从培养液中吸取营养，继续分裂生长营养，继续分裂生长 组织块培养法适用范围广，常用于肝脏、皮组织块培养法适用范围广，常用于肝脏、皮肤、角膜、骨骼、韧带、血管、神经、心脏等器肤、角膜、骨骼、韧带、血管、神经、心脏等器官和组织的培养官和组织的培养培培 养养 要要 点点u材料新鲜材料新鲜u严格无菌操作严格无菌操作u剔除脂肪等附着组织剔除脂肪等附着组织u组织块剪小（直径组织块剪小（直径﹤﹤1mm1mm））u摆放开（间距摆放开（间距﹥﹥5mm5mm））常常 犯犯 的的 错错 误误u操作中不换器械操作中不换器械u冲洗次数不够冲洗次数不够u组织碎片太大组织碎片太大u组织块摆放太密组织块摆放太密u培养液加入太多培养液加入太多消消 化化 培培 养养 法法u消化培养法所用的酶有多种，目前应用最广的是胰蛋白酶消化培养法所用的酶有多种，目前应用最广的是胰蛋白酶它是一种内切酶，可专一水解有精胺酸或赖氨酸的羧基形它是一种内切酶，可专一水解有精胺酸或赖氨酸的羧基形成的肽键。

从而消除妨碍细胞生长的细胞间质，包括基质、成的肽键从而消除妨碍细胞生长的细胞间质，包括基质、纤维等，使细胞分散，易于贴壁并从外界吸收养分和排除纤维等，使细胞分散，易于贴壁并从外界吸收养分和排除代谢物代谢物 u消化法适用于组织量大的原代培养胰蛋白酶液适用于消消化法适用于组织量大的原代培养胰蛋白酶液适用于消化间质少的组织，如羊膜、胚胎、上皮、肝和肾等组织及化间质少的组织，如羊膜、胚胎、上皮、肝和肾等组织及传代细胞传代细胞培培 养养 要要 点点u组织剪碎至组织剪碎至1mm1mm3 3左右左右u合适的胰蛋白酶浓度（通常为合适的胰蛋白酶浓度（通常为0.25%0.25%））u合适的消化时间：消化时，待组织块变得较疏松，颜色略合适的消化时间：消化时，待组织块变得较疏松，颜色略白为止（通常为白为止（通常为37℃37℃，，2020～～4040分钟）分钟）常常 犯犯 的的 错错 误误 水浴锅未预热水浴锅未预热组织块太大组织块太大胰蛋白酶消化不足或过度胰蛋白酶消化不足或过度吹打用力过重吹打用力过重常常 犯犯 的的 错错 误误 十、传十、传 代代 细细 胞胞 培培 养养 细胞在原培养瓶内分离稀释后传到新的培养瓶的操作细胞在原培养瓶内分离稀释后传到新的培养瓶的操作叫传代。

为获得稳定的细胞株，或大量的同种细胞，当培叫传代为获得稳定的细胞株，或大量的同种细胞，当培养细胞形成致密的单层后需进行传代培养养细胞形成致密的单层后需进行传代培养细细 胞胞 传传 代代 方方 法法 根据细胞生长的特点，传代方法有根据细胞生长的特点，传代方法有3 3种种u悬浮生长细胞传代悬浮生长细胞传代 离心法传代：离心（离心法传代：离心（10001000转转/ /分分）去上清，沉淀物加）去上清，沉淀物加新培养液后再混匀传代新培养液后再混匀传代 直接传代法：悬浮细胞沉淀在瓶壁时，将上清培养直接传代法：悬浮细胞沉淀在瓶壁时，将上清培养液去除液去除l/2l/2～～2/32/3，然后用吸管直接吹打形成细胞悬液，然后用吸管直接吹打形成细胞悬液再传代再传代u半悬浮生长细胞传代半悬浮生长细胞传代 此类细胞部分呈现贴壁生长现象，但贴壁不牢，可此类细胞部分呈现贴壁生长现象，但贴壁不牢，可用直接吹打法使细胞从瓶壁脱落下来，进行传代用直接吹打法使细胞从瓶壁脱落下来，进行传代u贴壁生长细胞传代贴壁生长细胞传代 采用酶消化法传代常用的消化液有采用酶消化法传代。

常用的消化液有0.250.25％的胰蛋％的胰蛋白酶液白酶液贴壁生长细胞传代方法贴壁生长细胞传代方法u吸光培养瓶中的培养液吸光培养瓶中的培养液uPBSPBS洗一次洗一次u加入加入1 1～～2 ml 0.252 ml 0.25％的胰蛋白酶液％的胰蛋白酶液( (以消化液能覆盖整个瓶底以消化液能覆盖整个瓶底为准）为准）u静置静置2 2～～10 min10 min（显微镜下动态监测）（显微镜下动态监测）u吸去胰蛋白酶液，加入培养液吸去胰蛋白酶液，加入培养液u用吸管吸取瓶内培养液，反复吹打瓶壁细胞，形成细胞悬液用吸管吸取瓶内培养液，反复吹打瓶壁细胞，形成细胞悬液u吸取吸取1/101/10～～1/401/40细胞悬液，接种于新的培养瓶内细胞悬液，接种于新的培养瓶内u加适量新鲜培养液于接种了细胞悬液的新培养瓶内加适量新鲜培养液于接种了细胞悬液的新培养瓶内u将后者放入培养箱中培养将后者放入培养箱中培养Trypsin消化细胞未消化细胞未消化细胞消化的细胞消化的细胞培培 养养 要要 点点u严格的无菌操作严格的无菌操作u适度消化适度消化细胞培养中需要注意的问题细胞培养中需要注意的问题u培培养养液液和和培培养养物物的的比比例例：：一一定定浓浓度度的的培培养养液液仅仅能能支支持持一一定定数数量量的的细细胞胞生长，不能盲目增加每单位体积的生长，不能盲目增加每单位体积的细胞浓度细胞浓度uPHPH：：初培养初培养pHpH应为应为7.47.4，培养过程应不低于，培养过程应不低于7.07.0u培培养养瓶瓶内内的的空空间间：：一一般般培培养养瓶瓶内内培培养养液液与与液液面面上上的的空空间间体体积积之之比比为为1:101:10细胞培养中需要注意的问题细胞培养中需要注意的问题u容容积积、、深深度度、、表表面面面面积积：：培培养养液液体体积积与与表表面面面面积积的的比比例例为为0.20.2～～0.5ml/cm0.5ml/cm2 2。

需需高高浓浓度度氧氧的的，，在在浅浅的的培培养养液液（（2mm2mm））中中生生长长较较好好；；需需要要低低浓浓度度氧氧的的, ,在在深深的的培培养养液液（（5mm5mm））中中生生长较好u去除死细胞去除死细胞u温温度度控控制制：：动动物物细细胞胞培培养养对对温温度度波波动动的的敏敏感感性性很很大大温温度度低低于于36.5℃36.5℃，，细细胞胞生生长长缓缓慢慢；；温温度度高高于于37.5℃37.5℃，，细细胞胞存存活活力降低力降低十一、细十一、细 胞胞 冻冻 存存 和和 复复 苏苏细胞冻存的意义细胞冻存的意义 细胞低温冷冻贮存是细胞室的常规工作细胞冻存与细胞低温冷冻贮存是细胞室的常规工作细胞冻存与细胞传代保存相比可以减少人力、经费，减少污染，减少细胞传代保存相比可以减少人力、经费，减少污染，减少细胞生物学特性变化细胞生物学特性变化冻存细胞的理论基础冻存细胞的理论基础u当细胞冷到零度以下，可以产生以下变化：细胞器脱水，细胞中可溶当细胞冷到零度以下，可以产生以下变化：细胞器脱水，细胞中可溶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶。

u如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶；相反如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶；相反．结晶就大，大结晶会造成细胞膜、细胞器的损伤和破裂复苏过程．结晶就大，大结晶会造成细胞膜、细胞器的损伤和破裂复苏过程应快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重结晶应快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重结晶冻存和复苏的原则冻存和复苏的原则慢慢 冻冻 快快 融融细细 胞胞 冻冻 存存 方方 法法u预先配制冻存液：预先配制冻存液： 90%90%血清血清 10%DMSO 10%DMSO （二甲基亚砜）（二甲基亚砜）u取对数生长期细胞，经胰酶消化后，加入适量冻存液，用取对数生长期细胞，经胰酶消化后，加入适量冻存液，用吸管吹打制成细胞悬液（吸管吹打制成细胞悬液（1×101×106 6～～5×105×106 6细胞细胞/ml)/ml)u加入加入1ml1ml细胞于冻存管中，密封后标记冷冻细胞名称和冷细胞于冻存管中，密封后标记冷冻细胞名称和冷冻日期冻日期慢慢 冻冻 程程 序序u标准程序标准程序u当温度在当温度在-25 ℃-25 ℃以上时，以上时，1 1～～2 ℃/min2 ℃/minu当温度达当温度达-25 ℃-25 ℃以下时，以下时，5 5～～10℃/min10℃/minu当温度达当温度达-100℃-100℃时，可迅速放入液氮中时，可迅速放入液氮中u简易程序简易程序 将将冻冻存存管管于于4℃4℃放放置置1 1小小时时，，于于-20℃-20℃放放置置1 1小小时时，， -80℃-80℃放放置置1 1小小时时/ /通通过过线线绳绳将将装装有有冷冷冻冻管管的的纱纱布布袋袋固固定定于于液液氮氮罐罐罐罐口（口（-70℃-70℃），放置），放置1 1小时，后直接投入液氮中（小时，后直接投入液氮中（-196℃-196℃））细细 胞胞 复复 苏苏 方方 法法u从从液液氮氮中中取取出出冻冻存存管管，，在在3737～～38℃38℃水水浴浴中中快快速速使其融化（使其融化（1 1分钟左右）分钟左右）u5 5分钟内用培养液稀释至原体积的分钟内用培养液稀释至原体积的1010倍以上倍以上u低速离心低速离心1010分钟分钟u去上清，加新鲜培养液培养刚复苏的细胞去上清，加新鲜培养液培养刚复苏的细胞十二、十二、 ATCC入库细胞要求入库细胞要求 培养简历：组织来源日期、物种、组织起源、性别、年龄、供体正常或异常培养简历：组织来源日期、物种、组织起源、性别、年龄、供体正常或异常健康状态、细胞已传代数等健康状态、细胞已传代数等 冻冻 存存 液：培养基和防冻液名称液：培养基和防冻液名称细胞活力：融解前后细胞接种存活率和生长特性细胞活力：融解前后细胞接种存活率和生长特性培培 养养 液：培养基种类和名称（一般要求不含抗生素）、血清来源和含量液：培养基种类和名称（一般要求不含抗生素）、血清来源和含量细胞形态：类型，如为上皮或成纤维细胞等，融解后细胞生长特性细胞形态：类型，如为上皮或成纤维细胞等，融解后细胞生长特性核核 型：二倍体或多倍体，标记染色体的有无型：二倍体或多倍体，标记染色体的有无无污染检测：包括细菌、真菌、支原体、原虫和病毒等无污染检测：包括细菌、真菌、支原体、原虫和病毒等物种检测：检测同工酶，主要为物种检测：检测同工酶，主要为G6PD和和LDH，以证明细胞有否交叉污染以及，以证明细胞有否交叉污染以及反转录酶检测反转录酶检测免疫检测：一两种血清学检测免疫检测：一两种血清学检测细胞建立者：建立者姓名；检测者姓名细胞建立者：建立者姓名；检测者姓名 中国典型培养物保藏中心中国典型培养物保藏中心 中国典型培养物保藏中心中国典型培养物保藏中心(China Center for Type (China Center for Type Culture CollectionCulture Collection，简称，简称CCTCC)CCTCC)于于19851985年由中国专利局年由中国专利局指定、经国家教委批准建立的专利培养物保藏机构，受理指定、经国家教委批准建立的专利培养物保藏机构，受理国内外用于专利程序的培养物保藏。

保藏的培养物包括细国内外用于专利程序的培养物保藏保藏的培养物包括细菌、放线菌、酵母菌、真菌菌、放线菌、酵母菌、真菌( (含酵母菌含酵母菌) )、单细胞藻类、细、单细胞藻类、细胞系，植物组织培养、植物种子、动植物病毒、噬菌体、胞系，植物组织培养、植物种子、动植物病毒、噬菌体、载体和基因文库等各类培养物载体和基因文库等各类培养物 谢谢 谢谢 ！ 。