SDS-PAGE所有详细试剂配方.doc

SDS-PAGE30%聚丙烯酰胺溶液 ——30% （w/v） Acrylamide【组分浓度】各种组分名称配制不同体积所需各成分的体积 （mL）或质量（g）30%Acr-Bis(29:1)1000ml100ml29%Acrylamide(丙烯酰胺)290g29g1%BIS（ N,N'-亚甲丙烯酰胺）10g1g【配制方法】将29克丙烯酰胺和1克N,N'-亚甲丙烯酰胺溶于总体积为 60ml温热（37 C左右）的去离子水中，充 分搅拌溶解，补加水至终体积为 100ml0.45叩 微孔滤膜过滤除菌和杂质， 储于棕色瓶，4 'C避光（用铝箔纸包扎起来）保存严格核实 PH不得超过7.0，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的使用期不 得超过两个月，隔几个月须重新配制如有沉淀，可以过滤保存条件】4 C避光（用铝箔纸包扎起来）保存【注意事项】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可通过皮肤吸收， 其作用具有累积性称量丙烯酰胺和N,N'-亚甲丙烯酰胺时应戴手套和面具可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能含有少量未聚合材料1MTris-HCL ( pH6.8)(浓缩胶 buffer)【组分浓度】1MTris-HCL名称用量备注Tris12.1g去离子水80ml浓盐酸9ml（36%的浓盐酸）预实验已确定去离子水加入去离子水定容至 100ml后，室温保存【配制方法】称量121.1gTris碱溶于800mL的去离子水，充分搅拌溶解，加 >0.7mL的浓HCL调节所需要的pH 值（7.4-大约0.7mL，7.6-大约0.6mL , 8.0-大约0.42mL ），将溶液定容至1L,高温高压灭菌后，室温保 存。

应使溶液冷却至室温后再调定 pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大， 温度每升高1 C，溶液的pH值大约降低0.03个单位保存条件】室温保存注意事项】对人体有刺激性，请注意适当防护1.5MTris-HCL (pH8.8)(分离胶 buffer)【组分浓度】1.5MTris-HCL名称用量备注Tris18.17g去离子水80ml浓盐酸3ml（36%的浓盐酸）预实验已确定去离子水加入去离子水定容至 100ml后，室温保存【配制方法】1L称量181.7gTris碱溶于800mL的去离子水，充分搅拌溶解，加浓 HCL调节所需要的pH值=8.8，将溶液定容至 1L ,高温高压灭菌后， 室温保存1.5mmol/LTris-HCL(pH8.8):18.15gTris 和 48ml1mol/LHCL 混合，加水稀释到100ml终体积过滤后4°c保存)【保存条件】室温保存【注意事项】应使溶液冷却至室温后再调定 pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大， 温度每升高「C，溶液的pH值大约降低0.03个单位10%十二烷基硫酸钠SDS溶液-----10%(w/v)SDS【组分浓度】10%(w/v)SDS名称用量备注SDS10g去离子水80ml加入去离子水定容至 100ml后，室温保存【配制方法】称取2g高纯度的SDS置于100〜200ml烧杯中，加入约16ml的去离子水，68 C加热溶解，滴加浓盐 酸调节PH至7.2，定容至20ml后，室温保存【保存条件】室温保存【注意事项】对人体有害，请注意防护。

10%过硫酸铵溶液-----10%(w/v)AP【组分浓度】10%(w/v)过硫酸铵名称用量备注过硫酸铵0.1g去离子水1ml现配现用【配制方法】称取0.1g过硫酸铵置于1.5ml离心管，加1mL去离子水吹打溶解，4 C保存【保存条件】4 C保存【注意事项】10%过硫酸铵溶液在4 C保存时，可使用 2周左右，超过期限会失去催化作用5XTris-甘氨酸电泳缓冲液-----5 Tfe-Glycine buffer (SDS-PAGE电泳缓冲液)【组分浓度】各种组分名称配制不同体积所需各成分的体积 (mL)或质量(g)1000ml500ml0.125M Tris15.1g1.25M glycine(甘氨酸)94.0g0.5%(W/V)SDS5.0g【配制方法】称取15.1gTris，94.0g甘氨酸(glycine )，5.0gSDS，用800ml蒸馏水或去离子水溶解，充分搅拌溶解，定容至1000ml，室温保存得0.125mol/L Tris-1.25 mol/L甘氨酸电极缓冲液临用前稀释 5倍保存条件】室温保存，两年有效注意事项】配制好的电泳液使用时间不宜超过两周电泳缓冲液可以回收，回收后可再使用 1-2次，但为了取得最佳的电泳效果，应使用新电泳液5 >SDS-PAGE 加样缓冲液-----5 S0S-PAGE Loading Buffer 【组分浓度】0.25MTris-HCL(pH6.8);10%(W/V)SDS ;0.5%(W/V) BPB(溴酚蓝);50%(V/V)甘油；5%(W/V) B -巯基乙醇(2-ME)各种组分名称配制不同体积所需各成分的体积 (mL)或质量(g)5ml3ml1MTris-HCL(pH6.8)1.25mlSDS0.5gBPB(溴酚蓝)25mg甘油2.5ml(0.5mL/份)分装，室温保存，使用前加 25 gL2-ME/小份，保存一个月左右。

性巯基乙醇(2-ME)0.25ml【配制方法】量取 1.25mL 1MTris-HCL ( pH6.8 )，0.5g SDS，25mg BPB，2.5mL 甘油，置于 10mL 塑料离心管 中，加去离子水溶解后，定容至 5mL，小份(0.5mL/份)分装，于室温保存使用前将 25 勺2-ME加 入到每小份中加入 2-ME的Loading Buffer可在室温下保存一个月左右保存条件】-20 'C保存，至少一年有效注意事项】SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X)中含少量DTT和巯基乙醇，有轻微刺激性气味，必须完全溶解后再使用 摘自Takara商品目录--实验室常规试剂配制方法TEMED原液直接使用 考马斯亮蓝R-250染色液【组分浓度】0.1%(w/v)考马斯亮蓝R-250，25%(v/v)异丙醇，10%(v/v)冰醋酸各种组分名称配制不同体积所需各成分的体积 (mL)或质量(g)1000ml400ml备注考马斯亮蓝R-2501.0g0.4g异丙醇250ml100ml搅拌溶解，可用甲醇替代冰醋酸100ml40ml搅拌均匀去离子水650ml260ml搅拌均匀，滤纸除去颗粒物，室温保存考马斯亮蓝染色脱色液名称用量备注【组分浓度】10%(v/v)醋酸，5%(v/v)乙醇名称 备注冰醋酸100ml乙醇50ml去离子水850ml充分混匀后使用#。