倒置荧光显微镜操作说明概要.doc

倒置荧光显微镜操作说明大纲显微镜及数码成像系统操作简要/第一部分观察方法步骤1、明场观察方法步骤2、相差观察方法步骤3、荧光观察方法步骤第二部分使用IPP拍摄图像流程(相差观察、荧光观察)第三部分使用BX2-BSW拍摄图像流程(明场观察)第一部分观察方法步骤1、明场观察方法步骤步骤涉及部件打开电源开关主开关拨到“I”选择目镜观察光路三目观察筒选择杆拨至最内聚光镜选择明场（BF）聚光镜选择钮相差移出光路放入标本于载物台载物台、标本夹选择合适物镜进入光路物镜选择钮开始观察调治瞳间距 观察筒瞳间距调治调治屈光度 目镜屈光度调治环搜寻标本 载物台控制手柄手动调焦调治光照亮度图像采集准备工作：柯勒照明光轴中心调治第一次观察须完成此调试，完成后不需要再调治，直至装卸过部件后，使用过程中请不要扭动聚光镜中心调治旋钮①聚光镜高升到最高地址②用10X物镜聚焦至清楚③视场光阑打至最小④渐渐下降聚光镜，使视场中出现清楚正多边形图像⑤调治聚光镜中心调治旋钮，使正多边形移至视场中心⑥渐渐打开视场光阑，使正多边形与视场边缘内切⑦略加大视场光阑，使它的图象恰巧与视场外切即可聚光镜高度起落旋钮视场光阑聚光镜起落旋钮聚光镜中心调治旋钮视场光阑视场光阑2、相差（PH）观察方法步骤步骤涉及部件打开电源开关主开关拨到“I”选择目镜观察光路三目观察筒选择杆拨至最内放入标本于载物台载物台、标本夹选择合适物镜进入光路物镜选择钮选择与物镜般配的相差环进入光路聚光镜选择钮PH1对应10X物镜、PH1对应20X物镜、PH2对应40X物镜开始观察调治瞳间距 观察筒瞳间距调治调治屈光度 目镜屈光度调治环搜寻标本 载物台控制手柄手动调治调治光照亮度图像采集3、荧光观察方法步骤准备工作：高压汞灯对中（第一次观察时调整，今后观察时不需调整，除非更换汞灯）步骤打开电源开关涉及部件主开关拨到“ I”选择目镜观察光路 三目观察筒选择杆拨至最内聚光镜选择明场（BF） 聚光镜选择CD+或CD-钮相差环移出光路放入标本于载物台载物台、标本夹选择合适物镜进入光路物镜选择钮标本定位卤素灯电源调至 最暗打开汞灯电源供电器开始观察图像采集调治瞳间距 观察筒瞳间距调治调治屈光度 目镜屈光度调治环搜寻标本 载物台控制手柄手动调焦机身架光重申节按钮主开关拨到“I”选择合适的荧光激发块打开光闸选择合适的物镜 物镜选择按钮采用合适的ND滤色片 荧光反射照明器上 ND片插槽调治汞灯透镜聚焦旋钮使视场亮度均一 汞灯透镜聚焦旋钮调治视场光阑和孔径光阑改进反差 视场光阑/孔径光阑准备工作：高压汞灯对中（第一次观察时调整，今后观察时不需调整，除非更换汞灯）调整完成后，请不要触动对中部件，如汞灯对中旋钮，视场光阑对中钮等。

汞灯供电器开关打到“I”汞灯供电器主开关：拨到“I”，待弧光牢固后进行调治选择目镜察光路光路选择杆标本放于载物台中载物台选择蓝色荧光激发块进行调节，打开光闸，光路经过10X物镜转入光路，标本聚焦清楚调治瞳间距调治屈光度取下物镜或使空物镜孔进光路视场光阑拉出至最小 ，此时对中标本表面出现 2个斑点使两斑点最清楚使两斑点重合（先水平后重合）10X物镜转入光路，向对中标本聚焦清楚，视场光阑推进至最大调治视场亮度均匀一致（亮度最大）对中视场光阑视场光阑拉出至最小调整正多边形至视野中央完成高压汞灯对中荧光激发块选择按钮载物台控制手柄物镜选择钮手动调焦观察筒屈光度调治环物镜转盘视场光阑杆汞灯透镜聚焦调治旋钮汞灯中心调治旋钮物镜选择按钮视场光阑杆集光透镜聚焦旋钮视场光阑中心调治钮第二部分 使用IPP拍摄图像流程1. 在桌面点击以以下图标打开IPP2. 在菜单栏中，（采集）Acquire菜单下点击（视频/数字图像采集）Video/DigitalCapture，或点击工具栏中 ，即出现控制CCD拍照的对话框3. 有两种拍照界面可选，点击图一BasicDialog和图二Advance即可在两种模式下自由变换（以下操作将主要以图二的对话框为主）。

4. 点击图三More/Less按钮即可在基本对话框和扩展对话框间变换5. 相机有两种状态可选：，一种是预览（Preview）模式，用来观察动向图像，一般在聚焦和确定感兴趣地域时使用；另一种是拍摄（Snap）模式，用来获得图像6. 点击预览后，若是显示的图像为完好黑色，最大的可能是光路变换器没有切换到CCD，所以请把光路变换器切换到CCD7. 点击预览后，一般会有图像太亮或太暗的情况，这是因为曝光时间不合适造成的，以下面两图所示8. 自动曝光：自动曝光可以帮我们找到比较合适的曝光时间，即我们关心的样本看到比较清楚当出现一个特别暗也许特别亮的图像时，可以经过以下三种方法之一获得自动曝光时间A．点击自动曝光按钮B．先点击AutoExpArea（自动测光地域），用鼠标在预览图上选定感光地域（也许点击ResettoFullFrame恢复全图预览），尔后点击 CalcAutoExp，就可以依照设定的地域自动计算曝光时间B 方式 C 方式C．点击AutoSet，此时软件将先自动计算曝光时间，尔后提示采用一个地域做自动白平衡（一般选在图像上最亮白的地方，此部分的详细操作请参照下面的“第12步：自动白平衡”）。

9.预览时图像覆盖着一层透明膜的收效：在预览图片上点击右键，Transparency选择OFF可以关闭此功能10. 预览图像的直方图实时显示：在预览图像上点击右键，选中LiveHistogram即可显示，此功能可以帮助我们判断图像收效，但波峰在直方图中间部分时收效比较好11.若是预览图像中有很多红色的条带或比很多的红色点：这是因为我们选中了“饱和提示SaturationWarning”功能，以以下图所示，把“饱和提示”功能关闭即可12.自动白平衡：在预览图像上右击鼠标，可以选择自动白平衡（AutoWhiteBalance）,也许点击以下菜单上的“AutoWhiteBalance”，此时可以在预览图像上选定白色地域，尔后点击Calculate按钮即可实现自动白平衡以下图中的选项在图像拍摄界面点击More后即可显示）13. 手动调整曝光时间：当使用了自动曝光今后，可以经过手动调整来更加精确的获得更好的图像收效选中“AdjustExpforBinning”后，可以看到曝光时间会自动调整，此时诚然预览和拍摄曝光时间不相同，但是图像收效相同14. 预览和拍摄图像条件的锁定：很多情况下，预览和拍摄的图像收效不一致，可以锁定界面中的锁定钮使两种情况一致。

包含以下条件的锁定：A．拍摄地域的锁定：若是要改变地域，点击“ SETPVWAREA”的按钮，即可看到以下界面此时，选择SelectAreafromLivePreview即可在图像上划定感兴趣的地域；选择Resetareatofullframe即可重新把感兴趣地域划定为全图B．预览和拍摄Binning锁定:若是标本荧。