常用培养基配制.docx

常用培养基LB培养基/升终1 X浓度胰蛋白胨10 g1.0% (w/v)酵母抽提物5 g0.5% (w/v)NaCl10 g1.0% (w/v)H2O至1升 调节pH值至7.0低盐LB培养基/升终1 X浓度 胰蛋白胨10 g1.0% (w/v)酵母抽提物5 g0.5% (w/v)NaCl10 g0.5% (w/v)H2O至1升 调节pH值至7.0Terrific Broth 培养基/升终1 X浓度胰蛋白胨12 g1.2% (w/v)酵母抽提物24 g2.4% (w/v)甘油4 g0.4% (w/v)加H2O至900 ml 灭菌，冷却至60°C后加入100 ml过滤灭菌的10X TB磷酸盐 (0.17 M KH2PO4, 0.72 M K2HPO4)SOB 培养基/升终1 X浓度胰蛋白胨20 g2.0% (w/v)酵母抽提物5 g0.5% (w/v)NaCl0.5 g0.05% (w/v)250 mM KCl10 ml2.5 mMH2O至900 ml 调节pH值至7.0，加H2O至990 ml灭菌、冷却至室温使用前加入10 ml灭菌的1 M MgCl2 溶液10 mMSOC 培养基SOB 培养基(1升)加入20 ml 过滤灭菌的1 M葡萄糖M9 基本培养基/升终1 X浓度5X M9 salts200 ml 灭菌H2O至1升 1 M MgSO41 ml1 mM20% 葡萄糖10 ml0.2 (w/v)1 M CaCl20.1 ml0.1 mM5X M9 Salts/升终1 X浓度Na2HPO4x7H2O64 g47.8 mMKH2PO415 g22 mMNaCl2.5 g8.6 mMNH45 g18.7 mM添加剂/升终1 X浓度抗生素(如果需要)氨苄青霉素 50 µg/ml氯霉素 20 µg/ml卡那霉素 30 µg/ml四环素 12 µg/ml半乳糖苷(如果需要)X-Gal 20 µg/mlIPTG 0.1 mM培养基含有琼脂或琼脂糖 琼脂(平板)15 g1.5% (w/v)琼脂(软性琼脂)7 g0.7% (w/v)琼脂糖(平板)15 g1.5% (w/v)琼脂糖(软性琼脂糖)7 g0.7% (w/v)参考文献 1. Atlas, R.M., Handbook of Microbiological Media, second edition, Ed. Parks, L.C., CRC Press, N.Y., 1997. 2. Sambrook, J., et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, A1.2-A2.12, 2001. 常用储存液10 M 醋酸铵醋酸铵385.4 gH2O至500 ml1 M CaCl2CaCl2x6H2O219.1 gH2O至1升100X Denhardt 溶液终浓度Ficoll 40010 g0.02% (w/v)聚乙烯吡咯烷酮10 g0.02% (w/v)牛血清白蛋白10 g0.02% (w/v)H2O至500 ml 过滤灭菌后分装(25 ml)，-20°C 保存0.5 M EDTA (乙二胺四乙酸) (pH 8.0)Na2EDTAx2H2O186.1 gH2O至700 ml10 M NaOH (~50 ml)调节pH值至8.0H2O至1升10 mg/ml 溴化乙锭溴化乙锭0.2 gH2O至 20 ml充分混匀后4°C黑暗保存警告: 溴化乙锭是一种突变剂。

使用溴化乙锭溶液时需带手套；称量其粉末时需带面具1 M KClKCl74.6 gH2O至1升1 M MgCl2MgCl2x6H2O20.3 gH2O至100 ml1 M MgSO4MgSO4x7H2O24.6 gH2O至100 ml5 M NaClNaCl292.2 gH2O至1升10 M NaOHNaOH400.0 gH2O至1升1 M Tris-HCl [三羟甲基氨基甲烷盐酸盐]Tri base121.1 gH2O至800 ml用于浓缩的HCl调节至所需的pH值混合后加H2O至1升3 M 醋酸钠 (pH 5.2 或 7.0) (2)醋酸钠 x 3H2O401.1 gH2O至800 ml用醋酸调节pH值至7.0或用冰醋酸调节pH值5.2H2O至1升参考文献 1. Atlas, R.M., Handbook of Microbiological Media, second edition, Ed. Parks, L.C., CRC Press, N.Y., 1997. 2. Sambrook, J., et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, A1.2-A2.12, 2001. 常用缓冲液10X 磷酸盐缓冲液(储存液) (PBS)/升终1 X浓度NaCl80.0 g137 mMKCl2.0 g2.7 mMNa2HPO414.4 g100 mMKH2PO42.7 g2 mMH2O至800 ml HCl至pH 7.4 H2O至1升 20X SSC/升终1 X浓度NaCl175.3 g150 mMNa3citrate x H2O88.2 g15 mMH2O至800 ml 1M HCl调节pH值至7.0H2O至1升 20X SSPE/升终1 X浓度NaCl175.3 g150 mMNaH2PO4xH2O27.6 g10 mMNa2EDTA7.4 g10 mMH2O至800 ml 10 M NaOH调节pH值至7.4H2O至1升 5X Tris-甘氨酸, Native电泳缓冲液/升终1 X浓度Tri 碱15.1 g25 mM甘氨酸72.0 g192 mMH2O至1升 稀释溶液的pH至8.35X Tris-甘氨酸-SDS电泳缓冲液/升终1 X浓度Tri 碱15.1 g25 mM甘氨酸72.0 g192 mMSDS5.0 g0.1% (w/v)H2O至1升 稀释溶液的pH至8.35X Tris-三(羟甲基)甲基甘氨酸-SDS电泳缓冲液/升终1 X浓度Tri 碱121.1 g0.1 MTricine179.2 g0.1 MSDS10.0 g0.1% (w/v)H2O至1升 稀释溶液的pH至8.350X TAE (Tris-醋酸-EDTA)电泳缓冲液/升终1 X浓度Tri 碱242.0 g40 mM冰醋酸57.1 ml20 mM0.5 M EDTA (pH 8.0)100 ml2% mMH2O至1升 稀释溶液的pH大约为~8.510X TBE (Tris-硼酸-EDTA)电泳缓冲液/升终1 X浓度Tri 碱108.0 g90 mM硼酸55.0 g90 mM0.5 M EDTA (pH 8.0)40 ml2% mMH2O至1升 10X TPE (Tris-磷酸-EDTA)电泳缓冲液/升终1 X浓度Tri 碱108.0 g90 mM磷酸(85%)15.5 ml23 mM0.5 M EDTA (pH 8.0)40 ml2% mMH2O至1升 TE (Tris-EDTA) 缓冲液pH 7.4, 7.6或8.0/升终1 X浓度1 M Tri, pH 7.4, 7.6, 8.010.0 ml10 mM0.5 M EDTA (pH 8.0)2.0 ml1 mMH2O至1升 参考文献 1. Atlas, R.M., Handbook of Microbiological Media, second edition, Ed. Parks, L.C., CRC Press, N.Y., 1997. 2. Sambrook, J., et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, A1.2-A2.12, 2001. 常用缩写A腺嘌呤或腺苷；丙氨酸单字母代码A260260 nm吸光值ACESN-(2-乙酰氨基)-2-氨基乙磺酸Ad-2腺病毒-2ADAN-(2-乙酰氨基)-2-亚氨基二乙酸ADP腺苷5’-二磷酸AMP腺苷单磷酸AMV 禽成髓细胞瘤病毒AP碱性磷酸酶APS 过硫酸铵aRNA 反义RNAATP腺苷5’-三磷酸BCIP5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸BESN,N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸BGG 牛血清球蛋白BICINEN,N-双(2-羟乙基)甘氨酸Bio-dNTP生物素-脱氧核苷三磷酸BMEbeta-巯基乙醇；2-巯基乙醇bp碱基对Bq贝可BSA牛血清白蛋白B/W蓝/白克隆C胞嘧啶或胞苷；半胱氨酸单字母代码CA酪蛋白氨基酸CAPS N-环已胺-3-丙磺酸cDNA互补脱氧核糖核酸CEU 粘性末端连接单位Ci居里CIAP小牛肠碱性磷酸酶CMP c胞苷单磷酸cpm次/分钟CTP胞苷5’-三磷酸Da道尔顿dAMP脱氧腺苷单磷酸dATP脱氧腺苷三磷酸dCTP脱氧胞苷三磷酸ddATP双脱氧腺苷三磷酸ddCTP双脱氧胞苷三磷酸ddGTP双脱氧鸟苷三磷酸ddNTP双脱氧核苷三磷酸ddTTP 双脱氧胸苷三磷酸DE-81Whatman®二乙基胺基乙基纤维素纸DEPC焦碳酸二乙酯DIG地高辛dITP 脱氧肌苷三磷酸dGTP脱氧鸟苷三磷酸DMSO二甲亚砜。