溃疡性结肠炎模型选择及评价指标.docx

溃疡性结肠炎模型选择及评价指标1,实验候选模型：葡聚糖硫酸钠（DSS）致动物溃疡性结肠炎模型DSS UC模型的特点:①采用自由饮用或者定量灌胃DSS溶液的方法建立模 型，实验条件和操作方法简单，损伤易复制，便于掌握和推广；②可通过改 变DSS溶液的浓度和作用时间建立急性、慢性和急慢性交替性模型，模型持续时 间长，体现了急性向慢性转化的动态过程，解决了 UC的慢性化和维持问题，这 是以前许多模型无法比拟的；③已证实DSS模型是由1型/2型辅助性T细胞（Th1/ Th2）型细胞反应介导的，其发病与TNF-a、IFN-Y和IL-10等有关，这与人类UC的 免疫学反应很相似；④不同种系动物对DSS的敏感性不同，为揭示遗传因素与UC 的关系提供了新的依据；⑤DSS UC模型的组织学特点和临床表现与人类UC极为 相似，如病变从肛门侧自下而上连续性发展，急性期可见黏膜充血水肿、散在溃 疡和中性粒细胞浸润，慢性期可见腺体萎缩、结肠缩短和巨噬细胞浸润，临床表 现主要为腹泻、体重减轻、血便等2，实验候选动物：C3HHeJ 8扭小鼠或者8018/切、鼠动物种系:DSS UC模型适用于多种动物，包括各种大鼠、小鼠、仓鼠和豚鼠 等，但各种系对DSS的易感性和病变部位存在差异，其中大鼠、小鼠的病变主 要以直肠和左半结肠为主，而仓鼠、豚鼠则以盲肠和右半结肠较为明显。

Mahler 等将3.5% DSS（分子量为Mr 36000〜46000）溶于饮用水，予9只不同种系的小鼠 饮用以诱导UC，结果临床和组织病理学表现各不相同，C3H/HeJ Bir小鼠对DSS 最敏感，病变主要位于远端结肠和回盲部；C57BL/6 J小鼠的中段和远端结肠易 发生炎症；大部分NON/LtJ小鼠对DSS不敏感；BALB/c小鼠对DSS敏感，病变 主要位于结肠远端溃疡性结肠炎是一种局限于结肠粘膜及粘膜下层的炎症过程病变多 位于乙状结肠和直肠，C3H/HeJ Bir小鼠和BALB/c小鼠对DSS致溃疡性结肠炎敏 感，且病灶部位与人类相似（乙状结肠和直肠），因此可作为实验研究理想动 物3, DSS分子量及浓度：Mr=40000，浓度=3%-5%1%〜10%DSS浓度可用于UC模型DSS诱导肠黏膜急性损伤的程度呈浓度 依赖性，已在BALB/c小鼠中得到了证实Granger等研究了摄取量的计算公 式，DSS用量（mg/g）=总饮水量（ml）x[DSS （mg）/100 ml]/小鼠初始体重（g）,指出 诱导可靠和重复性好的UC模型[以组织髓过氧化物酶（MPO）的活性和组织病理 变化为标准），DSS总摄取量的最低阈值为30mg/g体重，只要DSS的负荷量达到 30mg/g这一关键剂量，其总摄入量的差异不会影响炎症反应的严重程度。

DSS浓度是制摸成功的最关键因素，可影响造模时间和临床表现据报道， 小鼠饮用含1% DSS溶液90天后，仅出现大便隐血试验阳性Egger等应用不同浓 度的DSS（ 0%、2.5%、5%、7.5%）溶液喂养BALB/c小鼠7天，结果发现结肠腺体 损伤评分随DSS浓度的提高呈线形增加，但与DSS总摄取量无相关性，由此推断 DSS诱导黏膜损伤的程度依赖于DSS浓度，而非总摄取量但DSS浓度过高，动 物死亡率也会升高予无胸腺小鼠饮用含5% DSS溶液，与饮用1.5%、2.5% DSS 溶液（各浓度的分子量相同）组比较，其致死率明显升高目前，实验中中最常 采用3%或5%的DSS溶液进行造模4 .评价指标4.1疾病活动度 用大便情况作为疾病活动度（DAI）评价，评价细则如下见表 -1.表-1 DAI评分细则评分大便性状隐血或血便0正常阴性1软便阴性2软便隐血阳性3腹泻隐血阳性4腹泻血便4.2结肠病灶病理组织显微镜检查并评分（CMDI），评分标准如下:溃疡：分三级，0一无，1一小溃疡（小于3mm），2一大溃疡（大于3mm）炎症：0一无，1一轻度，2一重度肉芽组织：0一无，1一有病变深度：0一无，1一粘膜下层，2一肌层，3一浆膜层纤维化：0一无，1一轻度，2—重度4.3对免疫器官的影响：1）免疫器官脏器系数①脾脏，②胸腺；2）4.4免疫指标1）抗人中性粒细胞胞质抗体（P-ANCA）:蛋白水解酶（PR3）、 组织蛋白酶G（CG）。

2）抗结肠抗体（ACA），3） 免疫球蛋白IgA和IgG，局部免疫反应已证实结肠粘膜产生大量IgA和IgG，焦君良等以人体结肠粘膜为抗原，用之攻击大鼠后，大鼠结肠粘膜出现典型 溃疡，病变部位大量淋巴、单核和嗜中性细胞浸润，全部造型动物血清抗大 肠抗体阳性，免疫球蛋白IgA和IgG明显增高，淋巴细胞转化率显著降低以 上结果均支持溃疡性结肠炎的自身免疫发病学说4） 细胞免疫指标：CD4、CD8、T淋巴细胞和可溶性白细胞介素2受体（SIL-2R） 作为细胞免疫的主要指标被认为与溃疡性结肠炎的严重程度有关5） 炎症细胞因子：TNF-a、IL-1B、IL-6、IL-8、IL-4、IL-104.5其他生化指标：MPO，SOD，MDA。