乙酰半胱氨酸分析.doc

乙酰半胱氨酸颗粒. z.-检查工程方法〔列明方法编号〕放行标准限度货架期标准限度性状为可溶性细颗粒；气芳香，味酸甜〔SOP/YC005-01-01性状〕为可溶性细颗粒；气芳香，味酸甜为可溶性细颗粒；气芳香，味酸甜鉴别HPLC法〔SOP/YC005-01-01鉴别〕在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保存时间应与对照品溶液主峰的保存时间一致在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保存时间应与对照品溶液主峰的保存时间一致酸度中国药典2010年版二部附录ⅥH〔SOP/YC005-01-01酸度〕2.0～3.02.0～3.0枯燥失重中国药典2010年版二部附录ⅧL〔SOP/YC005-01-01枯燥失重〕不得过2.0%不得过2.0%溶化性中国药典2010年版二部附录ⅠN颗粒剂-溶化性〔SOP/YC005-01-01溶化性〕全部溶化或轻微浑浊，不得有异物全部溶化或轻微浑浊，不得有异物装量差异中国药典2010年版二部附录ⅠN颗粒剂-装量差异〔SOP/YC005-01-01装量差异〕符合规定符合规定有关物质HPLC法〔SOP/YC005-01-01有关物质〕L-胱氨酸〔杂质A〕、L-半胱氨酸〔杂质B〕、N,S-二乙酰-L-半胱氨酸〔杂质D〕的量均不超过0.5%，N,N’-二乙酰-L-胱氨酸〔杂质C〕的量不超过0.5%，杂质总量不得过1.0%L-胱氨酸〔杂质A〕、L-半胱氨酸〔杂质B〕、N,S-二乙酰-L-半胱氨酸〔杂质D〕的量均不超过0.5%，N,N’-二乙酰-L-胱氨酸〔杂质C〕的量不超过1.0%，杂质总量不得过1.5%微生物限度中国药典2010年版二部附录Ⅺ J微生物限度检查法〔SOP/YC005-01-01微生物限度检查〕细菌数≤1000个/g，霉菌和酵母菌数≤100个/g，大肠埃希菌不得检出细菌数≤1000个/g，霉菌和酵母菌数≤100个/g，大肠埃希菌不得检出含量HPLC法〔SOP/YC005-01-01含量测定〕95.0%～105.0%90.0%～110.0%1性状本品应为可溶性细颗粒；气芳香，味酸甜。

1.2鉴别(1)取本品适量〔约相当于乙酰半胱氨酸0.2g〕，加水20ml溶解，用1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至6.5，并用水稀释至40ml,作为供试品溶液；另取乙酰半胱氨酸对照品0.2g，同法制备作为对照品溶液照薄层色谱法〔附录ⅴB〕试验，吸取上述两种溶液各5µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水〔4:1:5〕混合并平衡10分钟的上层液为展开剂，展开后，取出，在热气流下吹干，再于碘蒸气中显色，供试品溶液所显主斑点的位置和颜色应与对照品溶液的主斑点一样〔2〕HPLC法：在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保存时间应与对照品溶液主峰的保存时间一致以上〔1〕、〔2〕两项可选做一项1.3 检查酸度检查方法：取本品，加水制成10%的溶液，依法测定〔2010年版二部附录ⅥH〕，pH值应为2.0～3.0枯燥失重检查方法：取本品，在70℃枯燥4小时，减失重量不得过2.0%〔2010年版二部附录ⅧL〕溶化性检查方法：取供试品10g,加热水200ml，搅拌5分钟，可溶颗粒应全部溶化或轻微浑浊，但不得有异物装量差异检查方法：应符合规定〔2010年版二部附录ⅠN颗粒剂-装量差异〕。

有关物质检查方法：HPLC法色谱条件：色谱柱：C18 流动相：硫酸铵缓冲液〔取硫酸铵5.00g、庚烷磺酸钠4.04g，用水稀释至1000ml，用7mol/L的盐酸溶液调节pH值至2.0〕：甲醇〔93：7〕柱温：30℃检测波长：205nm流速：1.0ml/min 进样体积：10µl理论塔板数：按乙酰半胱氨酸峰计算不低于1000测定法：取含量测定项下的细粉适量〔约相当于乙酰半胱氨酸25mg〕，精细称定，置50ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液；精细量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为自身对照溶液；另取胱氨酸〔杂A〕对照品和半胱氨酸〔杂B〕对照品适量，精细称定，〔杂A需加1M盐酸使溶解〕，加流动相分别溶解稀释制成每1ml中约含有2.5μg的溶液，摇匀，作为杂质A，杂质B对照溶液；取自身对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰的峰高约为满量程的20%；精细量取杂A与杂B对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图；再精细量取供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分保存时间的5倍。

供试品溶液色谱图中，如有与杂A和杂B保存时间一致的色谱峰，按外标法以峰面积计算，均不得过0.5%；杂C的峰面积 (杂C相对保存时间约为1.6)除以校正因子〔校正因子=1.21〕之后不得大于自身对照溶液的主峰面积1.0倍〔1.0%〕，杂D的峰面积 (杂D相对保存时间约为1.8-2.0)除以校正因子〔校正因子=0.78〕之后不得大于自身对照溶液的主峰面积的0.5倍〔0.5%〕，各杂质峰面积的和不得大于自身对照溶液主峰面积的1.5倍〔1.5%〕计算公式： A*×CR×V*×W×R杂A/杂B(%)＝ —————————×100%AR×M*×K式中：A*为供试品溶液相应杂质的峰面积；AR为杂质对照溶液的主峰面积；M*为供试品的称取量，mg；CR为杂质对照品的浓度，mg；R为杂质对照品自身的含量；W为平均袋重，mg；K为每袋的标示含量，mg A*杂质C(%)= ————— ×1% 1.21×AR式中：A*为杂质C的峰面积； AR为自身对照溶液的主峰面积； A*杂质D(%)= ————— ×1% 0.78×AR式中：A*为杂质D的峰面积； AR为自身对照溶液的主峰面积；A*其他单个杂质(%)＝———×1%AR式中：A*为供试品溶液其他单个杂质的峰面积；AR为自身对照溶液的主峰面积；杂质总和(%)=杂A(%)+ 杂B(%)+杂C(%)+杂D(%)+其他单个杂质的和(%)微生物限度含量测定检查方法：HPLC法色谱条件：色谱柱：C18 流动相：0.05mol/L磷酸氢二钾溶液〔用稀磷酸调节pH值3.0〕柱温：30℃检测波长：214nm流速：1.0ml/min 进样体积：20µl理论塔板数：按乙酰半胱氨酸峰计算不低于1000。

测定法：取本品10袋，将容物全量转移至500ml量瓶中，加焦亚硫酸钠溶液〔1→2000〕适量，振摇使溶解并稀释至刻度，摇匀，精细量取25ml，置100ml量瓶中，用焦亚硫酸钠溶液〔1→2000〕稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；精细量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图另取乙酰半胱氨酸对照品约50mg,精细称定，置100ml量瓶中，加焦亚硫酸钠溶液〔1→2000〕溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液，同法测定按外标法以峰面积计算，即得计算公式：A*×MR×R×V*含量〔%〕 = ————————×100%AR×VR×K式中：A*为供试品溶液的峰面积；AR为对照品溶液的峰面积；MR为对照品的称取量，g；VR为对照品稀释体积，ml；V*为供试品稀释体积，ml；R为乙酰半胱氨酸对照品的含量；K为乙酰半胱氨酸颗粒的规格，g分析方法的验证按照"化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则"、"化学药物质量标准建立的规化过程技术指导原则"、"化学药物杂质研究技术指导原则"、"化学药物残留溶剂研究技术指导原则"以及2010年版"中华人民国药典"附录中有关的指导原则提供方法学验证资料，进展方法学验证，结果如下：含量测定方法学验证结果工程验证结果专属性空白辅料根本无干扰线性和围在108.44µg/ml～1084.40µg/ml围，峰面积与浓度呈良好的线性关系，R=0.9998定量限、检测限主成分的定量限为0.856ng,峰面积的RSD%=2.75，保存时间的RSD%=0.76准确度在80%～120%浓度围，回收率为：99.21%-104.75%，平均回收率为101.74%，RSD为1.77%精细度重复性：平均值为99.95%，RSD为0.61%中间精细度：平均值为99.93%，RSD为0.06%溶液稳定性测试液在5小时稳定耐用性参数的微小调整对结果均无显著影响方法确实定参考乙酰半胱氨酸颗粒〔中国药典2010版第二部〕的含量测定方法,照高效液相色谱法〔中国药典2010年版二部附录V D〕对本品的含量测定条件进展了试验。

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.05mol/L磷酸氢二钾溶液〔用稀磷酸调节pH值3.0〕为流动相；检测波长为214nm理论板数按乙酰半胱氨酸峰计算不低于1000测定法：取本品10袋，将容物全量转移至500ml量瓶中，加焦亚硫酸钠溶液〔1→2000〕适量，振摇使溶解并稀释至刻度，摇匀，精细量取25ml，置100ml〔0.1g规格〕或200ml〔0.2g规格〕量瓶中，用焦亚硫酸钠溶液〔1→2000〕稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；精细量取20ml注入液相色谱仪，记录色谱图另取乙酰半胱氨酸对照品约50mg，精细称定，置100ml量瓶中，加焦亚硫酸钠溶液〔1→2000〕溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液，同法测定按外标法以峰面积计算，即得仪器、试剂及色谱条件仪器：岛津SPD-10AVP紫外可变波长检测器岛津LC-10ATVP高压恒流泵HW2000 色谱工作站试剂：磷酸氢二钾分析纯化学试剂水纯化水自制磷酸分析纯化学试剂焦亚硫酸钠分析纯国药集团色谱条件：色谱柱： C18柱，5μm，4.6mm×250mm；流动相：0.05mol/L磷酸氢二钾溶液〔用稀磷酸调节pH值3.0〕；检测波长：214nm；流速：1.0ml/min；检测波长确实定取乙酰半胱氨酸对照品适量，精细称定，用焦亚硫酸钠溶液〔1→2000〕稀释制成每1ml含乙酰半胱氨酸10μg的溶液；照紫外-可见分光光度法〔中国药典2010版二部附录ⅣA〕，于190nm～400nm扫描，结果发现乙酰半胱氨酸对照品为末端吸收。

参照乙酰半胱氨酸颗粒质量标准〔中国药典2010年版二部〕，选用214nm为含量的测定波长见附件5，第1页空白辅料干扰称取处方量空白辅料约0.225g，置50ml量瓶中，用焦亚硫酸钠溶液〔1→2000〕溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为空白辅料溶液取空白辅料溶液20μl注入液相色谱仪，记录谱图见附件5，第2、3页结果显示：空白辅料不干扰本品含量的测定含量测定线性试验精细称取乙酰半胱氨酸对照品27.11mg，精细称定，置25ml容量瓶中，加焦亚硫酸钠溶液〔1→2000〕溶解并稀释至刻度、摇匀，作为贮备液分别精细量取贮备液适量置适宜量瓶中，用焦亚硫酸钠。