第五章巴比妥类药物分析ppt课件.ppt

第第 五五 章章 巴比妥类药物分析巴比妥类药物分析〔〔Analysis of Barbitals Drugs〕〕Contents化学构造分析化学构造分析1构造与鉴别构造与鉴别2特殊杂质检查特殊杂质检查3 含量测定含量测定4 巴巴比比妥妥类类药药物物是是一一类类临临床床常常用用的的催催眠眠镇镇静静药药由由于于这这类类药药物物运运用用广广泛泛，，容容易易因因不不合合理理运运用用而而引引起起中中毒毒，，因因此此，，需需求求对对本本类类药药物物的的原原料料、、制制剂剂进进展展分分析析，，有有时时也也需需求求对对生生物物样样品中微量巴比妥类药物进展分析品中微量巴比妥类药物进展分析第一节第一节 结结 构构 与与 性性 质质(The structure and properties)一、根本构造一、根本构造5,5—取代的巴比妥类药物取代的巴比妥类药物1,5,5—取代的巴比妥类药物取代的巴比妥类药物5,5—取代的硫代巴比妥类药物取代的硫代巴比妥类药物巴比妥类药物的根本构造通式巴比妥类药物的根本构造通式5,5—取代的巴比妥类药物取代的巴比妥类药物5BarbitalPhenylbarbitalSecobarbital戊巴比妥戊巴比妥环己烯巴比妥环己烯巴比妥1,5,5-取代的巴比妥类药物取代的巴比妥类药物 己琐巴比妥己琐巴比妥15硫代巴比妥类药物硫代巴比妥类药物1. 环状母核部分环状母核部分 环状丙二酰脲、环状丙二酰脲、1,3-1,3-二酰亚胺基团决二酰亚胺基团决议巴比妥类药物的特性议巴比妥类药物的特性 2. 取代基部分取代基部分区别各种巴比妥类药物区别各种巴比妥类药物 二、主要性质二、主要性质〔一〕物理性质〔一〕物理性质 1. 白白色色结结晶晶或或结结晶晶性性粉粉未未，，具具有有固固定定的的熔熔点。

点2. 游离巴比妥类药物微溶或极微溶于水，易游离巴比妥类药物微溶或极微溶于水，易溶于乙醇及有机溶剂；其钠盐那么易溶于水，溶于乙醇及有机溶剂；其钠盐那么易溶于水，而不溶于有机溶剂而不溶于有机溶剂〔二〕〔二〕 化学性质化学性质1. 1. 弱酸性弱酸性 巴巴比比妥妥类类药药物物分分子子构构造造中中都都有有1,3-二二酰酰亚亚胺胺基基团团，，能能发发生生酮酮式式和和烯烯醇醇式式的的互互变变异异构构，，在在水水溶溶液液中中可可以以发发生生二二级级电电离离因因此此，，本本类类药药物物的的水水溶溶液液显显弱弱酸酸性性〔〔pKa为为7.3-8.4〕，可与强碱构成水溶性的盐类〕，可与强碱构成水溶性的盐类 与强碱的成盐反响：与强碱的成盐反响：+ NaOH△△+ H2O2. 与重金属离子反响与重金属离子反响〔〔1〕〕 与银盐的反响与银盐的反响 5,5—取代的巴比妥类药物取代的巴比妥类药物+ AgNO3Na2CO3可溶性一银盐可溶性一银盐AgNO3二银盐白色沉淀二银盐白色沉淀↓1,5,5—取代的巴比妥类药物取代的巴比妥类药物+ AgNO3Na2CO3可溶性一银盐可溶性一银盐问题：如何区分问题：如何区分5,5—取代的巴比妥类药物取代的巴比妥类药物和和1,5,5—取代的巴比妥类药物？取代的巴比妥类药物？〔〔2〕与铜盐的反响〕与铜盐的反响 巴比妥类巴比妥类药物药物＋铜吡啶溶液＋铜吡啶溶液吡啶吡啶紫色或紫色紫色或紫色沉淀沉淀↓硫喷妥钠硫喷妥钠＋铜吡啶溶液＋铜吡啶溶液吡啶吡啶绿色绿色问题：如何鉴别巴比妥和硫喷妥钠？问题：如何鉴别巴比妥和硫喷妥钠？有色配位有色配位化合物化合物〔〔3〕与钴盐的反响〕与钴盐的反响巴比妥类药物巴比妥类药物 ＋＋ 钴盐钴盐碱性碱性紫色紫色反响条件：反响条件：无水：无水：碱性：碱性： 异丙胺异丙胺所用试剂均应不含水分所用试剂均应不含水分〔〔4 4〕与汞盐的反响〕与汞盐的反响巴比妥类药物巴比妥类药物＋＋ 汞盐汞盐白色沉淀白色沉淀↓可溶于氨试液可溶于氨试液3. 3. 水解反响水解反响 巴比妥类药物巴比妥类药物＋＋NaOHNaOHNH3↑4. 与香草醛〔与香草醛〔3-甲氧基甲氧基-4-羟基苯甲醛羟基苯甲醛 〕的反响〕的反响 巴比妥类药物巴比妥类药物＋香草醛＋香草醛浓硫酸浓硫酸棕红色棕红色5. 紫外吸收光谱特征巴比妥类药物的紫外吸收光谱巴比妥类药物的紫外吸收光谱A.H2SO4溶液溶液(0.05mol/L)B.pH9.9缓冲溶缓冲溶液液C.NaOH溶液溶液(0.1mol/L) (pH 13) 巴巴比比妥妥类类药药物物的的紫紫外外吸吸收收光光谱谱特特征征和和其其电离的程度有关。

电离的程度有关 在在pH=2.0的酸性溶液中，因不电离，几乎无明显的酸性溶液中，因不电离，几乎无明显的紫外吸收的紫外吸收 在在pH=10.0的碱性溶液中，发生一级电离，于的碱性溶液中，发生一级电离，于240 nm处有最大吸收处有最大吸收 在在pH=13.0的强碱性溶液中，发生二级电离，最的强碱性溶液中，发生二级电离，最大吸收红移至大吸收红移至255 nm处硫喷妥的紫外吸收光谱硫喷妥的紫外吸收光谱HCl 溶液溶液 (0.1mol/L) NaOH 溶液溶液 (0.1mol/L)硫代巴比妥类硫代巴比妥类药物在酸性或药物在酸性或碱性溶液中，碱性溶液中，均有较明显的均有较明显的紫外吸收紫外吸收6. 特殊元素及取代基的反响特殊元素及取代基的反响 〔〔1〕不饱和烃取代基的反响〕不饱和烃取代基的反响①① 与溴试液或碘试液的反响与溴试液或碘试液的反响司可巴比妥可使溴试液或碘试液褪色司可巴比妥可使溴试液或碘试液褪色②② 与与KMnO4的反响的反响可复原紫色的可复原紫色的KMnO4为棕色的为棕色的MnO2〔〔2〕芳环取代基的反响〕芳环取代基的反响 ①① 硝化反响硝化反响 ②② 与与NaNO2—H2SO4反响反响 苯巴比妥与苯巴比妥与NaNO2—H2SO4反响生反响生成橙黄色成橙黄色→橙红色橙红色③③ 与甲醛与甲醛—H2SO4反响反响苯巴比妥与甲醛苯巴比妥与甲醛—H2SO4反响生成玫瑰红色反响生成玫瑰红色 〔〔3〕〕 硫元素的反响硫元素的反响 硫喷妥钠硫喷妥钠＋＋ Pb2＋＋NaOH白色沉淀白色沉淀↓△△PbS〔黑色〕〔黑色〕↓第二节 鉴 别 试 验(Test of identification)一、丙二酰脲类反响一、丙二酰脲类反响苯巴比妥苯巴比妥 ChP〔〔2019〕〕【鉴别】〔4〕本品显丙二酰脲类的鉴别反响〔附录Ⅲ〕附录附录Ⅲ Ⅲ 普通鉴别实验普通鉴别实验1. 与银盐的反响与银盐的反响 取供试品约0.1g，加碳酸钠试液1mL与水10mL，振摇2min，滤过，滤液中逐滴参与硝酸银试液，即白色沉淀，振摇，沉淀即溶解；继续滴加过量的硝酸银试液，沉淀不再溶解。

2. 与铜盐的反响与铜盐的反响 取供试品约50mg，加吡啶溶液〔1→10〕5mL，溶解后，加铜吡啶试液〔硫酸铜4g，水90mL溶解后，加吡啶30mL，即得〕1mL，即显紫色或生成紫色沉淀二、熔点测定及衍生物熔点测定二、熔点测定及衍生物熔点测定 1. 熔点测定 巴比妥类的钠盐＋酸 → 游离巴比妥类药物↓ → 过滤 → 洗涤 → 枯燥 →测熔点 苯巴比妥钠的鉴别苯巴比妥钠的鉴别 ChP〔〔2019〕〕 【【鉴鉴别别】】〔〔1〕〕取取本本品品约约0.5 g，，加加水水5 ml溶溶解解后后，，加加稍稍过过量量稀稀盐盐酸酸，，即即析析出出白白色色结结晶晶性性沉沉淀淀，，滤滤过过；；沉沉淀淀用用水水洗洗净净，，在在105℃枯枯燥燥后后，，依依法测定，熔点为法测定，熔点为174 ~ 178℃2. 衍生物熔点测定鉴别衍生物熔点测定鉴别丁巴比妥丁巴比妥 BP〔〔1988〕〕 取取丁丁巴巴比比妥妥0.5g，，加加1mol/L碳碳酸酸钠钠溶溶液液5m/L使使溶溶解解，，加加4.5％％〔〔W/V〕〕对对硝硝基基氯氯苄苄的的乙乙醇醇溶溶液液10mL，，在在水水浴浴上上加加热热回回流流30min，，放放置置1h后后，，滤滤过过，，所所得得沉沉淀淀用用96％％的的乙乙醇醇进进展展重重结结晶晶后后，，在在100～～105℃枯枯燥燥，，测测定定衍衍生物的熔点，应为生物的熔点，应为150℃左右。

左右 三、钠盐的鉴别反响三、钠盐的鉴别反响苯巴比妥钠苯巴比妥钠 ChP〔〔2019〕〕【【鉴鉴别别】】〔〔3〕〕本本品品显显钠钠盐盐的的鉴鉴别别反反响响〔〔附录附录Ⅲ〕附录附录Ⅲ Ⅲ 普通鉴别实验普通鉴别实验钠盐的鉴别反响钠盐的鉴别反响1. 焰色反响焰色反响 取取铂铂丝丝，，用用盐盐酸酸潮潮湿湿后后，，蘸蘸取取供供试试品品，，在在无无色火焰中熄灭，火焰即显鲜黄色色火焰中熄灭，火焰即显鲜黄色2. 与醋酸氧铀锌反响与醋酸氧铀锌反响 取取供供试试品品的的中中性性溶溶液液，，加加醋醋酸酸氧氧铀铀锌锌试试液液，，即生成黄色即生成黄色↓四、特殊取代基或元素的反响四、特殊取代基或元素的反响 1. 不饱和烃取代基的反响不饱和烃取代基的反响司可巴比妥钠司可巴比妥钠 ChP〔〔2019〕〕【【鉴鉴别别】】〔〔2〕〕取取本本品品0.1 g，，加加水水10 mL溶溶解解后后，，加加碘碘试试液液2mL，，所所显显棕棕黄黄色色在在5 min内消逝 2. 芳环取代基的反响芳环取代基的反响苯巴比妥苯巴比妥 ChP〔〔2019〕〕【【鉴鉴别别】】〔〔1〕〕取取本本品品约约10 mg，，加加硫硫酸酸2滴滴与与亚亚硝硝酸酸钠钠约约5 mg，，混混合合，，即即显显橙橙黄黄色色，，随即转橙红色随即转橙红色——与亚硝酸钠与亚硝酸钠—硫酸的反响硫酸的反响〔〔2〕〕取取本本品品约约50 mg，，置置试试管管中中，，加加甲甲醛醛试试液液1 mL，，加加热热煮煮沸沸，，冷冷却却，，沿沿管管壁壁渐渐渐渐加加硫硫酸酸0.5 mL，，使使成成两两液液层层，，置置水水浴中加热。

浴中加热界面显玫瑰红色界面显玫瑰红色——与甲醛与甲醛—硫酸的反响硫酸的反响3. 硫元素的反响硫元素的反响注射用硫喷妥钠注射用硫喷妥钠 ChP〔〔2000〕〕【【鉴鉴别别】】〔〔3〕〕取取本本品品约约0.2 g，，加加氢氢氧氧化化钠钠试试液液5 mL与与醋醋酸酸铅铅试试液液2 mL，，生生成成白白色沉淀；加热后，沉淀变为黑色色沉淀；加热后，沉淀变为黑色 五、水解反响五、水解反响异戊巴比妥、巴比妥异戊巴比妥、巴比妥JP〔〔14〕〕 取异戊巴比妥或巴比妥取异戊巴比妥或巴比妥0.2 g，加氢，加氢氧化钠试液氧化钠试液10 mL，加热煮沸，那么产，加热煮沸，那么产生具氨臭的气体生具氨臭的气体六、与香草醛的反响六、与香草醛的反响戊巴比妥戊巴比妥BP〔〔2019〕〕 于瓷盘中放入戊巴比妥于瓷盘中放入戊巴比妥10 mg和香草醛和香草醛10 mg，加浓硫酸，加浓硫酸0.15 mL，混合后，放在，混合后，放在水浴上加热水浴上加热30 s，即产生棕红色放冷，加，即产生棕红色放冷，加96％的乙醇％的乙醇0.5 mL，颜色那么转变为暗蓝，颜色那么转变为暗蓝色七、紫外吸收光谱特征七、紫外吸收光谱特征紫外光谱鉴别常用的方法：紫外光谱鉴别常用的方法：1. 对照品对照法；对照品对照法；2. 规定吸收波长法；规定吸收波长法；3. 规定吸收波长和相应的吸收度法；规定吸收波长和相应的吸收度法；4.4.规定吸收波长和吸收系数法；规定吸收波长和吸收系数法；5. 规定吸收波长和吸收度比值法。

规定吸收波长和吸收度比值法八、红外光谱法八、红外光谱法司可巴比妥钠司可巴比妥钠 ChP〔〔2019〕〕【鉴别】〔3〕本品的红外光吸收图谱与对照的图谱〔光谱集图〕一致 九、色谱行为特征九、色谱行为特征TLC、、GC、、HPLC TLC：： 生物样品分析生物样品分析 普普通通采采用用对对照照品品〔〔或或规规范范品品〕〕比比较较法法，，要要求求供供试试品品斑斑点点的的Rf值值应应与与对对照照品品斑斑点点一致十、显微结晶鉴别十、显微结晶鉴别——特征鉴别反响特征鉴别反响1 1．药物本身的晶形．药物本身的晶形例如：例如：巴比妥：巴比妥：长方形长方形苯巴比妥：苯巴比妥：球形球形→花瓣状花瓣状2 2．反响产物的晶形．反响产物的晶形巴比妥巴比妥 ＋＋ 铜吡啶试液铜吡啶试液十字形紫十字形紫色结晶色结晶苯巴比妥＋铜吡啶试液苯巴比妥＋铜吡啶试液细小不规那细小不规那么或似菱形么或似菱形的浅紫色结的浅紫色结晶晶 第三节 特殊杂质检查 (The relative substance test)•一一. 苯巴比妥的特殊杂质检查苯巴比妥的特殊杂质检查• 1. 酸度酸度• 2. 乙醇溶液的廓清度乙醇溶液的廓清度• 3. 中性或碱性物质中性或碱性物质•二二. 司可巴比妥钠的特殊杂质检查司可巴比妥钠的特殊杂质检查• 1. 溶液的廓清度溶液的廓清度• 2. 中性或碱性物质中性或碱性物质苯巴比妥中特殊杂质的由来与检查方法苯巴比妥中特殊杂质的由来与检查方法ⅢⅡⅠ苯巴比妥苯巴比妥酸度 检查方法：检查方法：取本品取本品0.20g，加水，加水10ml，煮沸搅拌，煮沸搅拌1min，放冷，，放冷，滤过后，取滤液滤过后，取滤液5ml，加甲基橙指示液，加甲基橙指示液1滴，滴，不得显红色不得显红色Ⅱ中间体中间体Ⅱ乙酰化不完全时，乙酰化不完全时，Ⅱ与尿素缩合产生的杂质与尿素缩合产生的杂质乙醇溶液的廓清度检查方法 　取本品　取本品1.0g，加乙醇，加乙醇5ml，加热回流，加热回流3min，溶液应廓清，溶液应廓清 中间体中间体Ⅱ、、Ⅲ等乙醇中不溶物等乙醇中不溶物不溶于不溶于NaOH.而溶于醚而溶于醚中性或碱性杂质中性或碱性杂质分液漏斗NaOH T.S.乙醚H2O过滤枯燥滤纸蒸发皿105℃1hr<3mg取本品取本品1.0g 乙醚，乙醚，H2O洗洗3 次次 滤液滤液 蒸干蒸干 残渣残渣副产物：副产物：2-苯基丁酰脲或分解产物苯基丁酰脲或分解产物第四节第四节 含量测定含量测定(Assay) 一、酸量法一、酸量法用碱滴定液测定酸类物质的中和法称为酸用碱滴定液测定酸类物质的中和法称为酸量法。

量法用酸滴定液测定碱类物质的中和法称为碱用酸滴定液测定碱类物质的中和法称为碱量法1 12 23 3银量法银量法 Argentometry酸碱滴定法酸碱滴定法 Acid-base titration method紫外分光光度法紫外分光光度法 uv1. 1. 在水在水——醇混合溶剂中的滴定法醇混合溶剂中的滴定法弱酸性弱酸性 pKa7.3～～8.4 异戊巴异戊巴比妥比妥水水——醇醇溶解溶解麝香草酚酞麝香草酚酞NaOH淡蓝色淡蓝色异戊巴比妥的含量测定：异戊巴比妥的含量测定： 取取本本品品约约0.5 g，，精精细细称称定定，，加加乙乙醇醇20 m1溶溶解解后后，，加加麝麝香香草草酚酚酞酞指指示示液液6滴滴，，用用氢氢氧氧化化钠钠滴滴定定液液〔〔0.1 mo1/L〕〕滴滴定定，，并并将将滴滴定定结结果果用用空空白白实实验验校校正正，，即即得得每每l mL氢氢氧氧化化钠钠滴滴定定液液〔〔0.1 mol/L〕〕相相当于当于22.63 mg的的C11H18N2O3  原料药：直接滴定法〔空白校正〕 T——滴定度，每滴定度，每1mL滴定液相当于被测组分的滴定液相当于被测组分的mg数数 V——滴定时，供试品耗费滴定液的体积〔滴定时，供试品耗费滴定液的体积〔mL〕〕 V0——滴定时，空白耗费滴定液的体积〔滴定时，空白耗费滴定液的体积〔mL〕〕F——浓度校正因子浓度校正因子 ms——供试品的质量供试品的质量 2. 非水溶液滴定法非水溶液滴定法溶溶 剂：剂： 二甲基甲酰胺二甲基甲酰胺滴定剂：滴定剂： 甲醇钠〔钾〕甲醇钠〔钾〕 指示剂：麝香草酚蓝麝香草酚蓝二、银量法二、银量法1. 原原 理理 ：：反响摩尔比〔反响摩尔比〔1∶ ∶1〕〕溶剂系统：溶剂系统：甲醇甲醇+3%无水碳酸钠无水碳酸钠终点指示：终点指示：电位法指示电位法指示本身指示本身指示Ag电极为指示电极电极为指示电极饱和甘汞电极为参饱和甘汞电极为参比电极比电极2. 测定方法与计算测定方法与计算例如：苯巴比妥例如：苯巴比妥 取本品约取本品约0.2 g，精细称定，加甲醇，精细称定，加甲醇40 mL使溶使溶解，再加新制的解，再加新制的3％无水碳酸钠溶液％无水碳酸钠溶液15 mL，照电，照电位滴定法，用硝酸银滴定液〔位滴定法，用硝酸银滴定液〔0.1 mol/L〕滴定。

〕滴定每每1 mL硝酸银滴定液〔硝酸银滴定液〔0.1 mo1/L〕相当于〕相当于23.22 mg的的C12H12N2O3原料药：直接滴定法原料药：直接滴定法 ChP〔〔2019〕〕3. 本卷须知本卷须知〔〔1 1〕无水碳酸钠应新颖配制〕无水碳酸钠应新颖配制〔〔2〕〕AgNO3滴定液应新颖配制滴定液应新颖配制〔〔3〕银电极运用前应进展处置〕银电极运用前应进展处置三、溴量法三、溴量法1. 原理原理 凡取代基中含有双键的巴比妥类药物，凡取代基中含有双键的巴比妥类药物，其不饱和键可与溴定量地发生加成反响，故其不饱和键可与溴定量地发生加成反响，故可采用溴量法进展测定可采用溴量法进展测定如司可巴比妥钠及其胶囊的测定原理为：如司可巴比妥钠及其胶囊的测定原理为：KBrO3＋5KBr＋6HCl＝3Br2＋6KCl＋3H2O Br2＋＋2KI＝＝2KBr＋＋I2I2＋＋2Na2S2O3＝＝2NaI＋＋Na2S4O6溴滴定液〔溴滴定液〔0.1 mol/L〕的配制：〕的配制： 取溴酸钾取溴酸钾3.0 g与溴化钾与溴化钾15 g，加水适量使溶解，加水适量使溶解成成1000 ml，摇匀。

摇匀反响摩尔比反响摩尔比1∶ ∶22. 测定方法与计算测定方法与计算司可巴比妥钠司可巴比妥钠 ChP〔〔2019〕〕 取本品约取本品约0.1g，精细称定，置，精细称定，置250ml碘瓶中，加水碘瓶中，加水10mL，，振摇使溶解，精细加溴滴定液〔振摇使溶解，精细加溴滴定液〔0.1mol/L〕〕25mL，再加盐，再加盐酸酸5mL，立刻密塞并振摇，立刻密塞并振摇1min，在暗处静置，在暗处静置15min后，留意后，留意微开瓶塞，加碘化钾试液微开瓶塞，加碘化钾试液10mL，立刻密塞，摇匀后，用硫，立刻密塞，摇匀后，用硫代硫酸钠滴定液〔代硫酸钠滴定液〔0.1mol/L〕滴定，至近终点时，加淀粉指〕滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消逝，并将滴定结果用空白实验校示液，继续滴定至蓝色消逝，并将滴定结果用空白实验校正每1ml溴滴定液〔溴滴定液〔0.1mo1/L〕相当于〕相当于13.01mg的的C12H17N2NaO3原料药：剩余滴定法原料药：剩余滴定法 3. 本卷须知本卷须知〔〔1〕操作中要防止溴和碘的逸失〕操作中要防止溴和碘的逸失〔〔2〕平行条件进展空白实验可减少溴和碘逸失〕平行条件进展空白实验可减少溴和碘逸失带来的误差。

带来的误差四、紫外分光光度法〔四、紫外分光光度法〔 UV〕〕 〔一〕直接紫外分光光度法〔一〕直接紫外分光光度法 本本法法是是将将样样品品溶溶解解后后，，根根据据溶溶液液的的pH值值选选用用其其相相应应的的max处处进进展直接测定展直接测定单组分定量方法：单组分定量方法：1. 吸收系数法吸收系数法2. 规范曲线法规范曲线法 3. 对照法对照法 USP〔〔24〕测定硫喷妥钠的方法为：〕测定硫喷妥钠的方法为： 取取硫硫喷喷妥妥钠钠约约100 mg，，精精细细称称定定，，置置于于200 mL量量瓶瓶中中，，加加氢氢氧氧化化钠钠溶溶液液〔〔1→250〕〕使使溶溶解解，，并并稀稀释释至至刻刻度度，，摇摇匀匀精精细细量量取取该该溶溶液液5 mL移移入入500 mL量量瓶瓶中中，，加加氢氢氧氧化化钠钠溶溶液液并并稀稀释释至至刻刻度度，，摇摇匀匀另另取取硫硫喷喷妥妥对对照照品品适适量量，，精精细细称称定定，，加加氢氢氧氧化化钠钠溶溶液液溶溶解解，，并并定定量量稀稀释释至至浓浓度度约约为为5 g/mL的的对对照照品品溶溶液液随随即即以以1 cm吸吸收收池池，，于于大大约约304 nm波波优优点点分分别别测测定定以以上上两两种种溶溶液液的吸收度，以氢氧化钠溶液作空白。

的吸收度，以氢氧化钠溶液作空白〔二〕经提取分别后的紫外分光光度法〔二〕经提取分别后的紫外分光光度法 多组分混合物不经分别的定量方法多组分混合物不经分别的定量方法 ——计算分光光度法计算分光光度法解方程组法解方程组法双波长分光光度法双波长分光光度法差示分光光度法差示分光光度法导数光谱法导数光谱法三波长法三波长法〔三〕差示分光光度法〔〔三〕差示分光光度法〔 A法〕法〕1. 测定方法测定方法 取取两两份份相相等等的的供供试试溶溶液液，，分分别别制制成成两两种种不不同同的的化化学学环环境境〔〔如如在在其其一一中中加加酸酸、、碱碱或或缓缓冲冲液液改改动动溶溶液液的的pH，，或或在在其其一一中中加加能能与与供供试试品品发发生生某某种种化化学学反反响响的的试试剂剂〕〕，，然然后后将将两两者者分分别别稀稀释释至至同同样样浓浓度度，，一一份份置置样样品品池池中中，，另另一一份份置置参参比比池池中中，，于于适适当当波波优优点点，，测测其其吸吸收收度度的的差差值值〔〔 A值〕2. 必要条件必要条件〔〔1 1〕〕供供试试品品在在不不同同的的化化学学环环境境中中以以不不同同的的分分子子方方式式存存在在，，它它们们的的吸吸收收光光谱谱有有显显著著的差别。

的差别〔〔2〕干扰物的吸收不受测定时化学环境的〕干扰物的吸收不受测定时化学环境的影响，光谱行为不变影响，光谱行为不变 3. 定量根据定量根据 供试品在两种不同的化学环境供试品在两种不同的化学环境中分别以中分别以x、、y 表示，干扰物用表示，干扰物用 z 表示表示即，吸收度差值〔即，吸收度差值〔 A〕仅与待测组分的浓〕仅与待测组分的浓度有关，而与干扰组分无关，即干扰组分度有关，而与干扰组分无关，即干扰组分的干扰被消除的干扰被消除 可用对照法或规范曲线法定量可用对照法或规范曲线法定量4. 特点特点 保管了通常的分光光度法简易保管了通常的分光光度法简易快速、直接读数的优点，又无需事快速、直接读数的优点，又无需事先分别，并能消除干扰先分别，并能消除干扰5. 运用运用 〔〔1〕于波长〕于波长240 nm处，测定处，测定pH10和和pH2两种溶液的吸收度之两种溶液的吸收度之差差 〔〔2〕于波长〕于波长260 nm处，测定处，测定pH10和强碱溶液的吸收度之差和强碱溶液的吸收度之差 •〔四〕高效液相色谱法〔四〕高效液相色谱法• 1．色谱条件．色谱条件• 2．样品预处置．样品预处置• 3．线性范围和最底检测限．线性范围和最底检测限。