植物胚胎培养.ppt

植物胚胎培养包括幼胚培养、成熟植物胚胎培养包括幼胚培养、成熟胚培养、胚珠培养、子房培养、胚乳培胚培养、胚珠培养、子房培养、胚乳培养和养和试试管受精等内容管受精等内容     植物胚胎培养植物胚胎培养.植物胚胎结构.一、胚胎培养概念一、胚胎培养概念1、胚胎培养、胚胎培养 指使胚或具胚器官在离体无菌条件指使胚或具胚器官在离体无菌条件下下发发育成幼苗的技育成幼苗的技术术 广广义义胚胎培养研究胚胎培养研究还还包括胚乳培养包括胚乳培养和和试试管受精等技管受精等技术术胚电镜扫描图片2、胚培养、胚培养 指在无菌条件下将胚从胚珠或种子中指在无菌条件下将胚从胚珠或种子中分离出来，置于培养基上分离出来，置于培养基上进进行离体培养的行离体培养的方法双子叶植物胚 .3、胚乳培养、胚乳培养 指指处处于于细细胞期的胚乳胞期的胚乳组织组织的离的离体培养4、胚珠培养、胚珠培养          指未受精或受精后的胚珠离体指未受精或受精后的胚珠离体培养不同植物的胚珠形态结构.倒生胚珠 .5、子房培养、子房培养 指授粉和未授粉的子房培养。

它指授粉和未授粉的子房培养它对对于于研究果研究果实发实发育的生理、离体受精等有重要育的生理、离体受精等有重要意意义义6、、试试管受精管受精 指在无菌条件下培养离体的未受精子指在无菌条件下培养离体的未受精子房或胚珠和花粉，使花粉萌房或胚珠和花粉，使花粉萌发产发产生的花粉生的花粉进进入胚珠而完成受精入胚珠而完成受精过过程二、胚胎培养的二、胚胎培养的应应用用1、克服、克服远缘杂远缘杂交的不育性，交的不育性，获获稀有稀有杂杂种植物种植物2、打破种子休眠，提早、打破种子休眠，提早结实结实，，缩缩短育种年限短育种年限3、使生活力低下或无生活力的种子萌、使生活力低下或无生活力的种子萌发发4、使柑橘、使柑橘类类植物合子胚正常植物合子胚正常发发育育5、、测测定种子生活力定种子生活力6、、获获三倍体或三倍体或单单倍体植株倍体植株7、快速繁殖特殊植物、快速繁殖特殊植物8、用于理、用于理论论研究研究.       指在无菌条件下将胚从胚珠或种子中分离指在无菌条件下将胚从胚珠或种子中分离出来，置于培养基上出来，置于培养基上进进行离体培养的方法行离体培养的方法三、胚的培养三、胚的培养.植物胚结构.胚电镜扫描图片.双子叶植物胚 ..图示为胚珠和胚囊的发育过程 孢孢原原细细胞胞减数分裂减数分裂（大（大孢孢子母子母细细胞）胞）中央中央细细胞胞.幼胚培养幼胚培养成熟胚培养成熟胚培养 据培养目的不同据培养目的不同剥取的离体胚剥取的离体胚发发育育时时期的不同期的不同胚培养胚培养成熟胚培养一般成熟胚培养一般较较易易获获得成功得成功.（一）幼胚培养（一）幼胚培养 幼胚完全是异养的，离体条件下培养要求幼胚完全是异养的，离体条件下培养要求培养基成分复培养基成分复杂杂，培养不易成功。

培养不易成功 幼胚培养的关幼胚培养的关键键技技术术：： 取材取材时时期期 幼胚剥离幼胚剥离 培养条件的控制（是否需要特殊培养条件的控制（是否需要特殊处处理）理）. 幼胚培养幼胚培养时时，其，其发发育育过过程有以下几种程有以下几种发发育方式：育方式： a、胚性、胚性发发育，此种方式不能萌育，此种方式不能萌发发成苗成苗 b、早熟萌、早熟萌发发，，长长成的苗十分瘦弱成的苗十分瘦弱 c、、产产生愈生愈伤组织伤组织，再由愈，再由愈伤组织伤组织分化形分化形成胚或不定芽成胚或不定芽.(1)(1)、胚性、胚性发发育育(embryonal development) (embryonal development) 幼胚接种幼胚接种到培养基上以后，仍然按照在活体内的到培养基上以后，仍然按照在活体内的发发育方式育方式发发育，最后形成成熟胚育，最后形成成熟胚( (有有时时甚至可能甚至可能类类似种子似种子) )，然，然后再按种子萌后再按种子萌发发途径出苗形成完整植株，途径出苗形成完整植株，这这种途径种途径发发育的幼胚一般一个幼胚将来就是一个植株。

育的幼胚一般一个幼胚将来就是一个植株幼胚离体培养的生幼胚离体培养的生长发长发育方式育方式. (2) (2)、早熟萌、早熟萌、早熟萌、早熟萌发发发发(early mature sprouting) (early mature sprouting) 幼胚接种后，离体幼胚接种后，离体幼胚接种后，离体幼胚接种后，离体胚不胚不胚不胚不继续继续继续继续胚性生胚性生胚性生胚性生长长长长，而是在培养基上迅速萌，而是在培养基上迅速萌，而是在培养基上迅速萌，而是在培养基上迅速萌发发发发成幼苗，通成幼苗，通成幼苗，通成幼苗，通常称之常称之常称之常称之为为为为早熟萌早熟萌早熟萌早熟萌发发发发在大多数情况下，一个幼胚萌在大多数情况下，一个幼胚萌在大多数情况下，一个幼胚萌在大多数情况下，一个幼胚萌发发发发成一成一成一成一个植株，但有个植株，但有个植株，但有个植株，但有时时时时会由于会由于会由于会由于细细细细胞分裂胞分裂胞分裂胞分裂产产产产生大量的胚性生大量的胚性生大量的胚性生大量的胚性细细细细胞，以胞，以胞，以胞，以后形成后形成后形成后形成许许许许多胚状体，从而可以形成多胚状体，从而可以形成多胚状体，从而可以形成多胚状体，从而可以形成许许许许多植株，多植株，多植株，多植株，这这这这种种种种现现现现象就象就象就象就是所是所是所是所谓谓谓谓的的的的丛丛丛丛生胚生胚生胚生胚现现现现象。

象 (3) (3)、愈、愈、愈、愈伤组织伤组织伤组织伤组织(callus) (callus) 在在在在许许许许多情况下，幼胚在离体培养中多情况下，幼胚在离体培养中多情况下，幼胚在离体培养中多情况下，幼胚在离体培养中首先首先首先首先发发发发生生生生细细细细胞增殖，形成愈胞增殖，形成愈胞增殖，形成愈胞增殖，形成愈伤组织伤组织伤组织伤组织一般来讲讲讲讲由胚形成的由胚形成的由胚形成的由胚形成的愈愈愈愈伤组织伤组织伤组织伤组织大多大多大多大多为为为为胚性愈胚性愈胚性愈胚性愈伤组织伤组织伤组织伤组织，，，，这这这这种胚性愈种胚性愈种胚性愈种胚性愈伤组织伤组织伤组织伤组织很容易很容易很容易很容易分化形成植株分化形成植株分化形成植株分化形成植株（二）成熟胚培养（二）成熟胚培养 成熟胚是自养的，培养基需要成熟胚是自养的，培养基需要简单简单主要目的主要目的:         ◆◆研究胚研究胚发发育育过过程的形程的形态态建成建成         ◆◆生生长调节长调节物物质质的作用的作用         ◆◆胚与胚乳相互关系和胚与胚乳相互关系和营营养要求养要求.培养方法：培养方法：A、将受精后成熟或未成熟种子或果、将受精后成熟或未成熟种子或果实实，，用用70%—75%酒精表面消毒消毒几分酒精表面消毒消毒几分钟钟B、用、用0.1%升汞溶液或升汞溶液或饱饱和漂白粉溶液消和漂白粉溶液消毒毒10min，无菌水反复冲洗，无菌水反复冲洗C、无菌操作台上，直接或在解剖、无菌操作台上，直接或在解剖镜镜下剥下剥取胚接种在培养基上取胚接种在培养基上. 胚胚龄龄 胚胚长长度度（（μμmm）） 营营养需要（培养基养需要（培养基营营养）养）早球形胚早球形胚后球形胚后球形胚心形胚心形胚鱼鱼雷胚雷胚成熟胚成熟胚 20~60 20~60 61~80 61~80 81~450 81~450 451~700 451~700700700（（最最大极限大极限））小于小于4040μμmm长长的胚所需的胚所需营营养尚不清楚养尚不清楚大量元素、微量元素、大量元素、微量元素、V VB1B1、、V VB6B6、烟酸、糖、烟酸、糖2%2%、、IAA0.1mg/L+KT0.01mg/LIAA0.1mg/L+KT0.01mg/L大量元素、微量元素、大量元素、微量元素、V VB1B1、、V VB6B6、烟酸、糖、烟酸、糖2%2%CaCa（（NONO3 3））2 2480mg/L480mg/L、、KNOKNO3 363mg/L63mg/L、、KCl 42mg/LKCl 42mg/L、、MgSOMgSO4 463mg/L63mg/L、、KHKH2 2POPO4 442mg/L42mg/L、、V VB1B1、、V VB6B6、烟、烟酸、糖酸、糖2%2%CaCa（（NONO3 3））2 2480mg/L480mg/L、、KNOKNO3 363mg/L63mg/L、、KCl 42mg/LKCl 42mg/L、、MgSOMgSO4 463mg/L63mg/L、糖、糖2%2%荠荠菜不同菜不同发发育育时时期胚培养的期胚培养的营营养需要养需要.       胚乳是由两个胚乳是由两个单单倍的极核和一个倍的极核和一个单单倍的精子倍的精子结结合而成的合而成的3倍体倍体组织组织。

由它可由它可获获得无子得无子结实结实的的3倍倍体植株，体植株，进进而可将它加倍成而可将它加倍成6倍体植株倍体植株       不同胚乳不同胚乳发发育育类类型及型及发发育育时时期直接影响外植体期直接影响外植体取材取材时时期以及胚乳期以及胚乳细细胞胞产产生愈生愈伤组织频伤组织频率 胚乳培养的后代，常胚乳培养的后代，常发发生生细细胞染色体数目胞染色体数目变变化，形成多倍体、非整倍体等化，形成多倍体、非整倍体等四、胚乳培养四、胚乳培养.1、核型胚乳、核型胚乳　　◆◆被子植物中普遍的胚乳被子植物中普遍的胚乳发发育形式育形式      ◆◆初生胚乳核的第一次分裂和以后的多次分裂，初生胚乳核的第一次分裂和以后的多次分裂，都不伴随壁的形成都不伴随壁的形成      ◆◆各个胚乳核呈游离状各个胚乳核呈游离状态态分布在胚囊中分布在胚囊中      ◆◆发发育到一定育到一定阶阶段后，常在胚囊外段后，常在胚囊外围围的胚乳核的胚乳核之之间间出出现细现细胞壁胞壁    ◆◆为单为单子叶植物和具有离瓣花的双子叶植物中子叶植物和具有离瓣花的双子叶植物中普遍存在，如小麦、水稻、玉米、棉花、油菜、普遍存在，如小麦、水稻、玉米、棉花、油菜、苹果等苹果等 （一）（一）胚乳的胚乳的发发育育类类型型 ..2、、细细胞型胚乳胞型胚乳特点：特点：       ◆◆初生胚乳核的分裂开始，即初生胚乳核的分裂开始，即产产生生细细胞胞壁，形成胚乳壁，形成胚乳细细胞胞      ◆◆无游离核无游离核时时期期      大多数双子叶合瓣花植物是大多数双子叶合瓣花植物是这样这样的胚的胚乳，如番茄、烟草、芝麻等。

乳，如番茄、烟草、芝麻等.3、沼生目型胚乳、沼生目型胚乳     ◆◆核型胚乳与核型胚乳与细细胞型胚乳的中胞型胚乳的中间类间类型型     ◆◆初生胚乳核的第一次分裂将胚囊分隔初生胚乳核的第一次分裂将胚囊分隔为为两室，其中珠孔端室比合点端室两室，其中珠孔端室比合点端室宽宽大大     ◆◆核核进进行分裂形成状行分裂形成状态态的游离核，最后的游离核，最后形成形成细细胞胞 ..（二）胚乳培养的关（二）胚乳培养的关键键A、胚乳、胚乳发发育育时时期的影响期的影响发发育早期胚乳：操作不便，育早期胚乳：操作不便，诱导诱导率低率低游离核期或游离核期或刚转刚转入入细细胞期的核型胚乳：胞期的核型胚乳：难难得得callus旺盛生旺盛生长长期胚乳：易期胚乳：易诱导产诱导产生生callus.★★ 旺盛期胚乳特征旺盛期胚乳特征          §胚已分化完成胚已分化完成          §胚乳已形成胚乳已形成细细胞胞组织组织          §充分生充分生长长，达到成熟大小，达到成熟大小          §外外观为观为半透明的固体状半透明的固体状          §富有富有弹弹性性.水稻：授粉后水稻：授粉后4 d                  黑麦草：授粉后黑麦草：授粉后8 ~ 10 d黄瓜：授粉后黄瓜：授粉后7  ~  16 d        梨：授粉后梨：授粉后20 d大麦：授粉后大麦：授粉后10 ~ 20 d        玉米和小麦：授粉后玉米和小麦：授粉后8 ~ 12 d一些草本植物胚乳培养的适宜取材一些草本植物胚乳培养的适宜取材时时期期一般情况下：接近成熟或完全成熟的胚乳一般情况下：接近成熟或完全成熟的胚乳callus诱导诱导率很低，率很低，甚至无甚至无callus木本植物，如：桑寄生科、檀香科植物，其成熟胚乳和木本植物，如：桑寄生科、檀香科植物，其成熟胚乳和诱导诱导产产生生callus.B、培养基和激素的影响、培养基和激素的影响培养基：培养基：MS、、B5、、MT、、White、、LS等等            水解酪蛋白、酵母提取物也很必要水解酪蛋白、酵母提取物也很必要 激素：要求特殊激素：要求特殊           大麦胚乳只有在添加大麦胚乳只有在添加2，，4-D的培养基上才能生的培养基上才能生长长           猕猕猴桃胚乳培养中，玉米素最好猴桃胚乳培养中，玉米素最好           枣枣的胚乳培养中，激素似乎无特殊要求的胚乳培养中，激素似乎无特殊要求.C、其他因素的影响、其他因素的影响蔗糖蔗糖浓浓度：度：3%  ~  5%温度：温度：25℃℃pH值值：如：如  玉米玉米 6.1 ~ 7.0 ；； 苹果苹果 6.0 ~ 6.2等等.（三）（三） 培养方法：培养方法：A、取授粉、取授粉4-8d后的幼果，常后的幼果，常规规消毒消毒B、无菌条件下切开果、无菌条件下切开果实实，取出种子，分离出胚乳，取出种子，分离出胚乳C、接种在培养基上，在、接种在培养基上，在25-27℃和黑暗条件或散射和黑暗条件或散射光下培养形成愈光下培养形成愈伤组织伤组织D、、转转到分化培养基上，待愈到分化培养基上，待愈伤组织长伤组织长出芽后，切下出芽后，切下不定芽不定芽E、插入生根培养基中，光下培养、插入生根培养基中，光下培养10-15d，切口，切口处长处长出白色的不定根出白色的不定根.※※两种植物胚乳培养的方法两种植物胚乳培养的方法A、枸杞、枸杞开花开花20d的枸杞胚乳的枸杞胚乳                  MS + 2，，4-D  0.2mg/L生根生根           MS         分化出苗分化出苗            MS + BA 0.2mg/L               不同倍性的胚乳植株不同倍性的胚乳植株callus.B、葡萄、葡萄    取出种子取出种子                      切去合点部分切去合点部分                                                         接种接种White + CM10% + 2，，4-D 2.0 + CH 500 +KT 1.0 + 蔗糖蔗糖 3%~4%琼琼脂脂8%                 1个月，胚乳愈个月，胚乳愈伤组织长伤组织长大，胚解体大，胚解体. 未授粉胚珠和子房培养是离体受精的基未授粉胚珠和子房培养是离体受精的基础础，，可可诱发诱发大大孢孢子子发发育成育成单单倍体植株，且孤雌倍体植株，且孤雌产产生生的的单单倍体植株倍体植株获获得率得率较较孤雄生殖高。

孤雄生殖高 胚珠培养中，已授粉具有球形胚或更后期胚珠培养中，已授粉具有球形胚或更后期的胚珠易培养成种子，且培养基及添加成分相的胚珠易培养成种子，且培养基及添加成分相对对要求不高而受精不久的胚珠要求不高而受精不久的胚珠则则需要成分复需要成分复杂杂的培养基，培养的培养基，培养难难度大 五、胚珠和子房培养五、胚珠和子房培养.1、胚珠培养的意、胚珠培养的意义义              有利于合子和早期原胚的培养有利于合子和早期原胚的培养              胚分化不全的种子的胚培养胚分化不全的种子的胚培养              获获得得杂杂交后代和交后代和优优良品种良品种              离体授粉的需要离体授粉的需要              获获得无病毒苗得无病毒苗（一）（一）   胚珠培养胚珠培养.2、胚珠培养的方法、胚珠培养的方法长长度小于度小于3mm的胚珠，的胚珠，难难与直接解剖，可先接与直接解剖，可先接种于液体培养基中，根种于液体培养基中，根据培养情况采取相据培养情况采取相应应培培养条件（二）（二） 子房培养子房培养1、子房培养的意、子房培养的意义义     ★★有效地挽救有效地挽救杂杂种胚的种胚的败败育育      ★★单单倍体植株的培育倍体植株的培育      ★★离体授粉的需要离体授粉的需要      ★★离体条件形成果离体条件形成果实实      ★★花被功能研究花被功能研究.2、子房培养的方法、子房培养的方法授粉前或授授粉前或授粉后的子房粉后的子房表面消毒表面消毒接种培养接种培养.       受精后的子房仍需受精后的子房仍需进进行表面消毒后再行表面消毒后再接种。

而未受精子房可将花被表面消毒后，接种而未受精子房可将花被表面消毒后，在无菌条件下直接剥取子房接种在无菌条件下直接剥取子房接种      子房培养只需子房培养只需较简单较简单的培养基即可形的培养基即可形成果成果实实，并含成熟种子并含成熟种子六、植物离体授粉受精六、植物离体授粉受精离体受精（离体受精（IVF））        指在离体指在离体环环境中完成境中完成被子植物被子植物的精、的精、卵融合而且利用受精所卵融合而且利用受精所产产生的生的“离体合子离体合子”培养再生植株，做到整个受精与胚胎培养再生植株，做到整个受精与胚胎发发育育过过程完全在离体条件下完成程完全在离体条件下完成90年代）年代）.离体受精技离体受精技术术的突破的技的突破的技术术前提：前提： a、雌配子和雄配子分离技、雌配子和雄配子分离技术术 b、、单对单对原生原生质质体融合技体融合技术术 c、微培养技、微培养技术术（（将商品生将商品生产产的微室的微室置入置入饲饲养养细细胞的小培养皿中，培养物接胞的小培养皿中，培养物接微室内，通微室内，通过过室底部微孔室底部微孔滤滤膜吸取周膜吸取周围围饲饲养养细细胞胞释释放的活性物放的活性物质质，促，促进进其其发发育）育）.       开花前数天套袋，开花前一天或当天取开花前数天套袋，开花前一天或当天取花蕾或花花蕾或花药药，表面消毒后，无菌条件下收集，表面消毒后，无菌条件下收集花粉。

花粉        采用直接引入法、注射法采用直接引入法、注射法进进行子房行子房试试管管授粉，或者是采用哺育法、接近法授粉，或者是采用哺育法、接近法进进行胚珠行胚珠试试管授粉1、离体受精方法、离体受精方法.胚珠胚珠花粉花粉试试管内管内授粉授粉10d后后胚珠胚珠培养培养3周后周后离体受精及植株再生离体受精及植株再生过过程程.2、技、技术术关关键键A、花粉的采集和、花粉的采集和灭灭菌菌    ★★确定开花、花确定开花、花药药分裂、授粉、花粉管分裂、授粉、花粉管进进入入胚珠和受精作用胚珠和受精作用时间时间    ★★去雄后将花蕾套袋隔离去雄后将花蕾套袋隔离    ★★采集花粉粒采集花粉粒    ★★消毒消毒    ★★无菌条件分裂花粉无菌条件分裂花粉    ★★授粉授粉.B、外植体、外植体选择选择★★开花前套袋、去雄开花前套袋、去雄★★开花后开花后1 ~ 2d，采集花蕾，放入无菌室培养准，采集花蕾，放入无菌室培养准备备★★切去柱切去柱头头，防止不授粉，防止不授粉★★胚珠剥离胚珠剥离时间时间（开花后（开花后1 ~ 2d效果好）效果好）.C、适合的培养基、适合的培养基离体受精的主要离体受精的主要过过程程⊙⊙花粉的萌花粉的萌发发和花粉管的生和花粉管的生长长，受精，受精⊙⊙受精胚珠受精胚珠发发育育为为成熟的种子，存在生活力的胚成熟的种子，存在生活力的胚培养基培养基应应促促进进受精后的胚珠正常受精后的胚珠正常发发育育.离体受精胚珠培养的改良离体受精胚珠培养的改良Nitsch（（1951）培养基配方）培养基配方成分成分成分成分数量数量数量数量（（（（mg/Lmg/L））））成分成分成分成分数量数量数量数量（（（（mg/Lmg/L））））成分成分成分成分数量数量数量数量（（（（mg/Lmg/L））））CaCa（（（（NONO3 3））））2 2 4H 4H2 2OO500500ZnSOZnSO4 4 7H 7H2 2OO0.50.5V VB1B10.250.25KNOKNO3 3125125MnSOMnSO4 4 4H 4H2 2OO3.03.0V VB6B60.250.25KHKH2 2POPO4 4125125HH3 3BOBO3 30.50.5烟酸烟酸烟酸烟酸1.251.25MgSOMgSO4 4 7H7H2 2OO125125FeCFeC6 6OO5 5HH7 7 5H5H2 2OO10.010.0蔗糖蔗糖蔗糖蔗糖50 00050 000CuSOCuSO4 4 5H5H2 2OO0.0250.025GlyGly7.57.5琼琼琼琼脂脂脂脂7 0007 000NaNa2 2MoOMoO4 40.0250.025泛酸泛酸泛酸泛酸钙钙钙钙0.250.25蔗糖蔗糖浓浓度是度是4% ~ 5%，水解酪蛋白，水解酪蛋白为为500mg/L，利于花粉萌，利于花粉萌发发和种子和种子发发育育.3、离体受精障碍、离体受精障碍★★花粉在柱花粉在柱头头上不萌上不萌发发★★花粉管不能花粉管不能进进入胚珠入胚珠★★花粉在花柱中破裂花粉在花柱中破裂★★受精后，胚和胚乳之受精后，胚和胚乳之间间的不的不亲亲和性和性★★受精后，胚乳受精后，胚乳发发育不良育不良★★杂杂种胚不能种胚不能发发育成熟育成熟.4、、离体受精的离体受精的细细胞学研究胞学研究现现状状（（（（1 1））））   配子配子配子配子识别识别识别识别————判判判判别别别别糖蛋白的作用糖蛋白的作用糖蛋白的作用糖蛋白的作用              利用分离的雌、雄配子利用分离的雌、雄配子利用分离的雌、雄配子利用分离的雌、雄配子对对对对其其其其细细细细胞膜特征，如表面膜蛋白胞膜特征，如表面膜蛋白胞膜特征，如表面膜蛋白胞膜特征，如表面膜蛋白特特特特别别别别是糖蛋白的分布等直接是糖蛋白的分布等直接是糖蛋白的分布等直接是糖蛋白的分布等直接进进进进行分析，行分析，行分析，行分析，这这这这可以帮助判断可以帮助判断可以帮助判断可以帮助判断糖蛋白在被子植物中是否和在糖蛋白在被子植物中是否和在糖蛋白在被子植物中是否和在糖蛋白在被子植物中是否和在动动动动物及低等植物中一物及低等植物中一物及低等植物中一物及低等植物中一样样样样是是是是配子配子配子配子识别识别识别识别必不可少的；必不可少的；必不可少的；必不可少的；.     （（（（2 2））））   膜融合膜融合膜融合膜融合————多精入卵多精入卵多精入卵多精入卵问题问题问题问题的探的探的探的探讨讨讨讨                                       膜膜膜膜融融融融合合合合的的的的方方方方式式式式，，，，在在在在不不不不同同同同的的的的离离离离体体体体受受受受精精精精系系系系统统统统中中中中融融融融合合合合的的的的原原原原理理理理是是是是      不不不不同同同同的的的的，，，，一一一一种种种种是是是是精精精精细细细细胞胞胞胞质质质质很很很很快快快快进进进进入入入入卵卵卵卵细细细细胞胞胞胞，，，，精精精精细细细细胞胞胞胞膜膜膜膜作作作作      为为为为其其其其中中中中的的的的一一一一部部部部分分分分参参参参与与与与了了了了受受受受精精精精卵卵卵卵细细细细胞胞胞胞膜膜膜膜的的的的重重重重组组组组。

另另另另一一一一种种种种是是是是      精精精精细细细细胞胞胞胞整整整整体体体体进进进进入入入入卵卵卵卵细细细细胞胞胞胞，，，，精精精精细细细细胞胞胞胞膜膜膜膜并并并并不不不不参参参参与与与与融融融融合合合合产产产产物物物物细细细细      胞胞胞胞膜膜膜膜的的的的形成（（（（3 3））））   胞胞胞胞质质质质融合融合融合融合————精精精精细细细细胞胞胞胞质质质质全部全部全部全部进进进进入卵入卵入卵入卵细细细细胞胞胞胞                      体内自然受精体内自然受精体内自然受精体内自然受精过过过过程中，至少部分被子植物程中，至少部分被子植物程中，至少部分被子植物程中，至少部分被子植物的精的精的精的精细细细细胞胞胞胞质质质质未能未能未能未能进进进进入卵入卵入卵入卵细细细细胞；而在离体受精胞；而在离体受精胞；而在离体受精胞；而在离体受精时时时时，，，，精精精精细细细细胞胞胞胞质则质则质则质则全部全部全部全部进进进进入卵入卵入卵入卵细细细细胞胞胞胞   （（4 4）核融合）核融合）核融合）核融合————融合融合融合融合过过过过程中的信号程中的信号程中的信号程中的信号问题问题问题问题                    核融合一般在精核融合一般在精核融合一般在精核融合一般在精——卵融合后卵融合后卵融合后卵融合后35-90min35-90min出出出出现现现现   。

烟草卵烟草卵烟草卵烟草卵细细细细胞有明胞有明胞有明胞有明显显显显的极性即液泡端和胞的极性即液泡端和胞的极性即液泡端和胞的极性即液泡端和胞质质质质端，但端，但端，但端，但无无无无论论论论精子在卵精子在卵精子在卵精子在卵细细细细胞哪一端融合，卵胞哪一端融合，卵胞哪一端融合，卵胞哪一端融合，卵细细细细胞胞胞胞质质质质都可很都可很都可很都可很快地移向精核快地移向精核快地移向精核快地移向精核处处处处将其将其将其将其纳纳纳纳入并包被入并包被入并包被入并包被   .七、影响因素七、影响因素1、胚珠（子房）的成活率及育、胚珠（子房）的成活率及育龄龄 离体胚珠（子房）培养的成活率直接离体胚珠（子房）培养的成活率直接影响影响试试管受精的成功率管受精的成功率 胚珠（子房）离体成活率的关胚珠（子房）离体成活率的关键键是培是培养基成分的养基成分的筛选筛选2、母体、母体组织组织的影响的影响 柱柱头头可影响某些植物受精，可影响某些植物受精，应应切除柱切除柱头头和花柱 而有些植物而有些植物则则需要保留，更有利于离需要保留，更有利于离体受精，如烟草体受精，如烟草。

3、花粉萌、花粉萌发发和花粉管生和花粉管生长长 离体花粉萌离体花粉萌发发率和花粉生率和花粉生长长速度直接速度直接影响影响试试管受精成功率管受精成功率。