紫外分光光度法测定未知样含量 含方案公式标准误吸收光谱图.docx

紫外分光光度法测定未知样含量（含方案、公式、标准误吸收光谱图1 •仪器1」紫外可见分光光度计（T6型）；1.2石英吸收池（lcm）： 2只；1.3比色管（50mL） 10支；1.4吸量管5mL： 2支2 •试剂2」苯甲酸标准溶液（0.1mg/mL）；2.2未知液：浓度约为40〜60ug/mL3•实验操作3」吸收曲线的绘制3.1.1标准苯甲酸吸收曲线绘制在一支50mL比色管中由2.1配制成浓度为0〜10ug/mL范围内的溶液，以水定容， 并摇匀于波长200~350nm范围内每间隔10nm测定一次吸光度，在最大吸收波长附近 间隔5 nm测定_次测定吸光度，再次根据最大吸收波长，附近间隔1 nm测定一次吸光 度，绘制吸收曲线,从曲线上确定苯甲酸的最大吸收波长（作为定量测定波长）附图：苯甲酸的吸收曲线3」.2标准水杨酸吸收曲线绘制在一支50mL比色管中由2」配制成浓度为0〜10ug/mL范围内的溶液，以水定容， 并摇匀于波长200〜350nm范围内每间隔10nm测定一次吸光度，在最大吸收波长附近 间隔5 nm测定_次吸光度，再次根据最大吸收波长附近，间隔1 nm测定一次吸光度， 绘制吸收曲线，从曲线上确定水杨酸的最大吸收波长（作为定量测定波长）。

附图：水杨酸吸收曲线3」.3未知液吸收曲线的绘制准确吸取含苯甲酸的未知液若干体积（5mL）于一支50mL比色管中，以水定容并 摇匀以蒸憾水为参比，于波长200〜350nm范围内每间隔10nm测定一次吸光度，在最 大吸收波长附近间隔5 nm测定一次吸光度，再次根据最大吸收波长，附近间隔lmn测 定一次吸光度，绘制吸收曲线观察3.1.1和3.1.2各自所得吸收曲线有什么相同之处？ 这说明了什么问题？对于一个未知样品如何利用分光光度法进行定性？）附图：未知液的吸收曲线3.2吸收池配套性检查石英吸收池装蒸憾水，于定量测定波长处，以一个吸收池为参比，测定并记录另一 吸收池的吸光度（其偏差应小于0.5%,可配成一套使用，否则更换）作为校正值3.3校准曲线的绘制及未知样含量的测定准确移取与未知样相同的物质的标准溶液若干体积于50mL比色管中，以水定容， 制成一系列相同体积不同浓度的标准溶液（0〜10ug/mL）,在最大吸收波长处，以水为 参比，测定各自吸光度由实验数据计算回归方程及相关系数，以浓度（p! ug-mL-1）为 横坐标，以和应的吸光度为纵坐标绘制校准曲线在相同条件下，测定样品稀释液（配制方法同3.1.2）的吸光度，代入回归方程计算 也样品稀释液的浓度。

试样平行测定三份根据未知液的稀释倍数，求出未知溶液中水杨酸的含量相关计算及公式】1 •校准曲线由试验点经最小二乘法对试验数据进行回归计算，得出一元一次线性回归方程，并 计算出该方程的相关系数然后在坐标纸上画出该回归方程的直线回归方程为： y — a bx 其中：b =」a - y - bxLxx = Z（X, - x）2 =工，一（》xY / n-,Lxy - E（厂-P （儿- 7）=为刃-工吃尸/刀；・=Z （儿-7）2 = S 川 / “；2.相关系数Y =3.相对标准偏差：按照未知稀释液的A校心计算相对标准偏差RSD 目仕厂X）2RSD = 2 x 100% = ————X100%4•未知稀释液含量：稀释后未知溶液中待测组分的浓度应由回归方程计算而得y n — 3 — 3"b ~ b ~A =兀_ y3 - <3 _ 4 ~ 5~ b ~ bXI + X2 + X3贝 1」：p = X = 3 =5•未知溶液中待测组分的含量：根据未知液的稀释倍数，可求出未知溶液中待测组 分的含量维生素C吸收曲线(lOug/mL)波长苯甲酸吸收曲线(10ug/mL)200 205 210 215 220 225 230 235 240 245 250 255 260 265 270 275 280 285 290 295 300 305 310 315 320 325 330 335 340 345 350波长水杨酸吸收曲线(lOiig/mL)波长。