FoxM1剪接异构体在上皮性卵巢癌中的表达及相关功能研究.doc

FoxM1 剪接异构体在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义研究[摘要] 目的：观察 FoxM1 剪接异构体在女性上皮性卵巢癌中的表达特征，并探讨其应用价值方法：恶性组 50 例，为经手术治疗及术中获取病灶组织病理检测确诊的上皮性卵巢癌患者；良性组 50 例，为影像学及病理诊断为卵巢良性肿瘤者；健康组 50 例，为其它妇科疾病入院但经临床症状、影像学检查等未见卵巢异常者均取卵巢病理组织切片免疫组化染色，免疫荧光法检测 FoxM1 表达阳性情况结果：恶性、良性和健康组卵巢组织FoxM1 的表达阳性率比较差异具有统计学意义（X 2=62.632，P<0.01） ，两两比较，恶性组显著高于良性组及健康组（X 2=27.473，60.864，P<0.01） ，良性组显著高于健康组（X 2=10.187， P<0.01） 不同临床分期的上皮性卵巢癌样本 FoxM1 的表达差异具有显著性，I、II 期病变 FoxM1 阳性率显著低于 III、IV 期（X 2=5.882，P<0.05 ） 但浆液性乳头状囊腺癌 FoxM1 阳性率与非浆液性乳头状囊腺癌比较差异无显著性（X 2=0.039，P<0.01） 。

恶性肿瘤患者随着 FoxM1 表达增强，患者的 3 年生存率（OS）和无进展生存率（PFS）逐渐下降结论：FoxM1 剪接异构体在上皮性卵巢癌中呈现为高表达，且随着临床分期的增高FoxM1 的阳性率提高，随 FoxM1 表达增高恶性肿瘤患者的生存率下降，FoxM1 可能参与卵巢癌的发生与进展过程，其机制可能与 FoxM1 的细胞周期调控作用有关[关键词] FoxM1 剪接异构体，上皮性卵巢癌，基因表达，细胞周期The expression and clinical significance study of FoxM1 isoforms in epithelial ovarian cancer[Abstract] Objective: To observe expression features of FoxM1 isoform in women with epithelial ovarian cancer, and to explore its value. Methods: 50 cases of malignant group, were the patients treated by surgery and got intraoperative detection of pathological lesions diagnosed epithelial ovarian cancer; 50 cases of benign group, were patients of diagnostic imaging and pathological ovarian benign tumor; 50 cases of healthy group, were patients admission but for other gynecological diseases by clinical symptoms, imaging studies, such as no ovarian abnormalities. Ovarian pathology tissue sections were taken immunohistochemistry, FoxM1 expression positive situation was detected by immunofluorescence. Results: The difference of FoxM1 ovarian tissue expression rate of malignant, benign and healthy group was statistically significant (X2= 62.632, P <0.01), pairwise comparison, the malignant group was significantly higher than that of benign group and the healthy group (X2=27.473, 60.864, P<0.01), the benign group was significantly higher than the healthy group (X2 = 10.187, P<0.01). The difference of expression in epithelial ovarian cancer samples FoxM1 of different clinical stages was significant, the FoxM1 positive rate of I, II lesionswas significantly lower than the III, IV stage (X2=5.882, P<0.05). But the difference of FoxM1 positive rate of serous cystadenocarcinoma and non-serous cystadenocarcinoma was not statistically significant (X2=0.039, P<0.01). FoxM1 cancer patients with increased expression of the patient's 3-year survival (OS) and progression-free survival (PFS) declined. Conclusion: FoxM1 isoforms appear as high in epithelial ovarian cancer expression, and FoxM1 positive rate increased with increased clinical stage, the survival rate of cancer patients with increased expression FoxM1 decline, FoxM1 may be involved in the occurrence and progression of ovarian cancer, which may be related to cell cycle regulation of FoxM1 concerned.[Keywords] FoxM1 isoform, Epithelial ovarian cancer, Gene expression, Cell cycle女性生殖系统恶性肿瘤中，卵巢癌发病率较高，近些年来受到临床重视。

由于卵巢癌早期无特异性症状，且目前的筛查手段尚无较好的早期诊断方法，多数患者发现病变已至晚期，延误了最佳治疗时机，患者病死率较高 [1-2]在卵巢癌的多种病理类型中，上皮性卵巢癌较为常见，约占 70%，流行病学研究显示其多发于女性绝经期以及绝经后 [3]Fox 为叉头框转录因子的统称，共同特征是都有一段翼状螺旋 DNA 结构域其成员 FoxM1 被认为在恶性肿瘤的发生与发展过程中具有重要作用，但我国相关基因学研究较少 [4]现对我院上皮性卵巢癌、卵巢良性肿瘤以及健康卵巢样本进行比较研究，观察 FoxM1 剪接异构体在女性上皮性卵巢癌中的表达特征，并探讨其应用价值1 资料与方法1．1 样本选择样本来源于我院妇产科患者，样本纳入时间为 2009 年 1 月至 2011 年 12 月样本纳入类型：（1）恶性组 50 例，为经手术治疗及术中获取病灶组织病理检测确诊的上皮性卵巢癌患者，年龄 29-75 岁，平均（ 51.3±9.6）岁，粘液性囊腺癌 8 例，浆液性乳头状囊腺癌32 例，粘液性囊腺癌 4 例，透明细胞癌 2 例，子宫内膜样腺癌 4 例；FIGO 分期：I 期 4 例，II 期 12 例，III 期 24 例，IV 期 10 例；分化程度：高分化 12 例，中分化 16 例，低分化 22例。

（2）良性组 50 例，为影像学及病理诊断为卵巢良性肿瘤者，年龄 25-72 岁，平均（47.6±8.8）岁；包括浆液性囊腺瘤 28 例，粘液性囊腺瘤 22 例 （3）健康组 50 例，为其它妇科疾病入院但经临床症状、影像学检查等未见卵巢异常者，年龄 22-68 岁，平均（45.8±9.1）岁恶性组所有病例均为首发，术前均未行放、化疗、激素等癌症治疗1．2 方法1．2．1 仪器与试剂FoxM1 抗体由美国 Santa Cruz 公司生产，SP 免疫组化试剂盒由美国 Invitrogen 公司生产，DAB 显色剂试剂盒由北京索莱宝科技有限公司提供，山羊抗兔免疫 IgG 二抗由上海合星生物科技有限公司提供，光学显微镜由日本 Nikon 公司生产，L XP100 离心机由美国Beckman Coulter 公司生产，UV754 此外分光光度计由美国 PerkinElmer 公司生产，枸橼酸那缓冲液由 21 g 枸橼酸与 29 g 枸椽酸钠配比定容获得，PBS 缓冲液由NaCl、 KCl、KH 2PO4 和 Na2HPO4 配比获得1．2．2 免疫组化取病理组织石蜡标本连续切片，60℃过夜，二甲苯脱蜡，切片依次置入浓度100%、 95%、 80%和 70%的乙醇溶液中浸泡 3 min，PBS 漂洗 3 次，枸橼酸钠缓冲液浸泡，高压修复，PBS 漂洗 3 次，加入 0.3%过氧化氢甲醇溶液，置于室温下孵育 15 min，加入山羊血清，置室温下封闭 20 min，加 FoxM1 抗体，置室温下静置 60 min，PBS 漂洗。

加山羊抗兔免疫 IgG 二抗，置室温下孵育 20 min，PBS 漂洗 3 次，DAB 显色，自来水冲洗衣终止显色SP 免疫组化染色，自来水冲洗，常规脱水、透明、封片，显微镜下观察样本由于 FoxM1 主要于细胞核和细胞质中表达，因而可见细胞核及细胞质内有棕黄色颗粒者计为阳性1．2．3FoxM1 的表达卵巢癌细胞的 FoxM1 剪接异构体表达情况采用免疫荧光法，分别将A2780、SKOV3 、OVCAR3 细胞接种于内有 10%的小牛血清的培养液中，于室温下置入 5%的二氧化碳培养箱爬片培养 48 h，PBS 冲洗，加入 4%多聚甲醛固定，PBS 冲洗，加入一抗置于 4℃环境下过夜，PBS 冲洗，加入二抗置于室温孵育 1 h，PBS 冲洗衣，显微镜下观察1．3 判定标准（1）染色强度评分：无目换染色为 0 分，染色强度高于背景且有淡黄色颗粒为 1 分，有明显浅黄色颗粒为 2 分，有较多深黄色颗粒为 3 分 （2）阳性细胞占比评分：随机取 5个高倍视野，计算阳性细胞所占比例，低于 5%者计 0 分，5%-25%者计 1 分，26%-50%者计 2 分，51%-75% 者计 3 分， 76%及以上者计 4 分。

（3）综合评分：将染色强度评分与阳性细胞占比评分相加后进行综合评分，0-1 分计为阴性（- ） ，2-3 分计为弱阳性（+） ，4-5分计为中度阳性（++） ，6-7 分计为强阳性（+++） 1．4 观察指标评价不同组别患者 FoxM1 表达情况以及不同病理分型和临床分期的 FoxM1 表达情况全部病例随访 3-5 年，对不同 FoxM1 表达的恶性肿瘤患者进行 3 年生存率（OS）和无进展生存率（PFS） 1．5 统计学方法统计学处理采用软件 SPSS21.0，三组间计数资料比较应用秩和（Kruskal-Wallis 法）检验，如具有统计学意义，则进一步采用秩和（Nemeryi 法）进行两两比较，当 P<0.05 时表示数据间比较差异具有统计学意义2 结果2．1 。