实验一槐米中芦丁的提取、分离和鉴定.doc

实验一 槐米中芦丁的提取、分离和鉴定一、概述槐米系豆科植物槐树（Sophora japonica L.）的花蕾（槐米）具有清热、凉血、止血的功效，用于治疗便血、痔血，尿血、血淋，崩漏，赤血痢下，风热目赤，痛疽疮毒，还可用于预防中风近年来被用作治疗高血压的辅助药物药理实验证明，槐花米具有调节毛细血管的渗透作用，抗炎作用，解痉、抗渍疡作用，影响脂质代谢，抗菌等多种生物活性槐花米中主要含有黄酮苷，皂苷、甾醇和鞣质等成分，其中芦丁(Rutin)含量最高，达12～20%主要化学成分的结构及理化性质：芦丁（rutin）：C27H30O16·3H2O，浅黄色针状结晶，mp174～178℃（含三分子水）；188℃（无水物）难溶于冷水（1：8000～10000），可溶于热水（1：180～200），热甲醇（1：10），冷甲醇（1：100），热乙醇（1：60），冷乙醇（1：650）；难溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等，易溶于碱液槲皮素（quercetin）：C15H10O7·2H2O，黄色结晶，mp313～314℃（2分子结晶水），316℃（无水物）能溶于冷乙醇（1：290），易溶于沸乙醇（1：23），可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等；难溶于水、苯、石油醚等溶剂。

二、实验部分（一）实验目的1、通过芦丁的制备，掌握黄酮类化合物提取分离的原理和操作2、掌握酸水解将芦丁生成槲皮素的方法3、掌握芦丁与槲皮素的鉴别方法，聚酰胺薄膜的操作方法，电子天平的使用方法二）实验原理1、芦丁的提取原理：芦丁中含有多个酚羟基，具有酸性，故用碱提酸沉法2、芦丁的分离原理：芦丁在沸水中溶解，在冷水中析出3、芦丁的鉴定原理：芦丁与槲皮素分别为黄酮类化合物的苷与苷元，用Molish反应可以进行鉴别，也可以利用聚酰胺的氢键吸附性质进行定性分析，Rf值也应不同三）实验药材、仪器与试剂1、药材：槐米50g(每组)2、仪器：电炉子、不锈钢锅、量杯、1000ml烧杯、冰箱、滤纸、PH试纸、减压抽滤装置、锥形瓶、玻璃漏斗、纱布、电子天平、聚酰胺薄膜3、试剂：0.4%硼砂水溶液、石灰乳、2%硫酸溶液、浓盐酸、蒸馏水、镁粉、浓硫酸、甲醇、90%乙醇、1%三氯化铝醇溶液、醋酸镁乙醇液等四）实验方法1、芦丁的提取：（碱提酸沉法）取槐米50g，加0.4%硼砂水溶液400ml至小锅中，加热煮沸，用石灰乳调节PH=9，加热微沸30min，随时补充失去的水分及控制PH值，四层纱布过滤，药渣再重复处理一次（不用调PH值）。

合并两次滤液，用浓盐酸调PH=3，放入冰箱中析晶2、芦丁的精制：（水重结晶法）（1）抽滤：用虹吸法先除去上清液，再进行抽滤，可更换滤纸2）精制：取全部芦丁粗品，加入蒸馏水800ml，煮沸至全部溶解（15min），趁热抽滤，放入冰箱析晶3、芦丁的水解：（酸水解法）取芦丁1g，加入2%硫酸150ml，小火加热微沸30min，注意观察现象：溶液由浑浊变澄清，逐渐析出黄色结晶，抽滤，得到槲皮素粗品剩下的芦丁要妥善保管，下次课还要带来4、鉴别反应（1）称槲皮素重量，计算水解率2）薄层色谱鉴定样品：自制芦丁及槲皮素的1mg/ml甲醇溶液每组称取20mg）对照品：芦丁及槲皮素对照品的1mg/ml甲醇溶液展开剂：90%乙醇溶液显色：喷三氯化铝溶液，紫外光（365nm）观察荧光实验结果记录：观察斑点颜色，记录图谱并计算Rf值3）显色反应①Molish反应：取芸香苷及槲皮素样品分别1ml，加入3%α-萘酚溶液1滴，振摇，沿壁滴加浓硫酸1ml，观察现象②盐酸-镁粉反应：分别取样品1ml，加入浓盐酸2-3滴，再加入少许镁粉，观察现象③纸片反应：取一张滤纸，分别滴加样品1滴，在上面再滴加三氯化铝溶液1滴，观察现象。

同理，再用醋酸镁显色）（五）注意事项1、提取时控制小火加热，微沸即可2、加热完成后要放冷抽滤3、用石灰水调节芦丁提取溶液的PH，既可以达到碱提取芦丁的目的，还可以除去槐米中含有的大量粘液质但钙离子浓度及pH值均不宜过高，否则多余的钙能与芦丁形成螯合物沉淀，同时黄酮母核在强碱性条件下易被破坏4、用HCl调PH时，应注意PH不要过低，因为PH过低（PH2以下）会使芦丁形成钅羊 盐而使已形成的沉淀重新溶解，同时黄酮母核也会在强碱性条件下被破坏，导致收率下降5、Molish反应中加入浓硫酸后不可振摇6、纸片反应待溶液干燥后观察荧光效果好，否则荧光颜色淡或没有六）思考题1、如果碱或酸加过量会对实验有何影响？2、加石灰乳和硼砂分别有何目的？。