Anti-Inflammatory Role of Cannabidio.doc

大麻的消炎的作用和 O- 1602 在蛙皮素诱导的小鼠急性胰腺炎的研究目标：抗炎作用的 O- 1602 和大麻二酚（CBD）的 G 蛋白偶联，配体受体 55（ GPR55 ） ，实验性急性胰腺炎（AP）方法：急性胰腺炎模型，在 C57BL 小鼠腹腔每小时注射 50Kg/kg 蛙皮素，总的 6 倍给予药物（O -1602 ， 10 毫克/千克，或 CBD ， 0.5 毫克 /公斤）通过腹膜内注射 2 次，在第一次注射的前 30 分钟和之前立即第五蛙皮素注射最后在注射后 3 小时，血，肺，胰腺收获的胰腺酶的活性，髓过氧化物酶的活性，促炎细胞因子的测量;和 GPR55 的mRNA 的表达，并在胰腺中的蛋白质进行检测结果：大麻或 O- 1602 治疗显着改善 AP 小鼠的病理变化和酶的活动性下降， IL-6 和肿瘤坏死因子 α 水平，血浆和器官组织中的髓过氧化物酶的活动G 蛋白偶联受体 55 的胰腺组织中的 mRNA 和蛋白的表达，在小鼠与 AP 的表达明显降低，和大麻二酚（ CBD）或 O- 1602 在一定程度上减弱这些变化结论：大麻二酚和 O -1602 显示出抗炎作用与 AP 小鼠胰腺组织中，以及提高了表达GPR55 的水平 。

关键词：急性胰腺炎，O -1602，大麻， GPR55急性胰腺炎（AP）是胰腺的炎症性疾病，它潜在的高发病率和死亡率 . AP 的不同严重程度可以表现出胰腺水肿，轻微的疼痛，胰腺坏死，出血多系统器官功能衰竭，全身炎症反应综合征，不受控制的激活的蛋白水解酶和随后的炎症反应被认为是在 AP 的发生和发展的重要因素已报道的细胞因子，如白细胞介素 6（ IL -6）和肿瘤坏死因子 α（TNF-α） 3-5 为早期的评估和治疗的目标 AP 的检测集中大麻素的抗炎潜力一直高度感兴趣的话题，因为发现在哺乳动物的内源性大麻素系统内源性大麻素系统由内源性大麻素受体的内源性配体，和相关的合成和降解酶有证据表明，大麻素参与炎症的调控并可能成为新的治疗药物，在治疗炎症性疾病有大麻引起的AP 的临床报告，实验报告，确认 2 “经典”大麻素受体，大麻素 1 型受体（CB1 ）和大麻素 2 型受体（ CB2）起着减轻疼痛和调制 AP 的角色结果表明，管理 HU210 ，合成特定的 CB1 受体激动剂，防止蛙皮素诱导的小鼠胰腺炎，否则，CB1 拮抗剂利莫那班衰减的严重程度， AP 在肥胖小鼠中的内源性大麻素，其中之一的内源性大麻素，诱导的 AP 前给药时，重新诱导 AP 严重程度的和给药后诱导的 AP ，根据实验结果重新产生的 AP 的严重程度，而彼得雷拉等人得到了相反的结果，在这种预处理大麻素的前 AP 的诱导炎症恶化，但治疗后改善了过程中的疾病。

一个毒品的 G 蛋白偶联受体 55（ GPR55 ）创建于 1999 年，是支持一个新的 CB 受体，作为一个非 CB1， CB2 受体，或大麻暗示的“ 3 型” 受体表达和作用的 GPR55 在 AP是远离阐明大麻二酚（ CBD ）是一个重要的生物活性成分的大麻没有蒜头素的治疗精神病的作用，示出作为 GPR55 拮抗剂，而不 CB1 和 CB2 受体结合非典型合成大麻素 O- 1602 是一个模拟“ 生物多样性公约” ，并确定忽视的结合能力 CB1 和 CB2 受体，并作为一个 GPR55 的激动剂，在本研究中，根据检测 GPR55 在小鼠胰腺组织中， AP 蛙皮素诱导的小鼠模型的处理与“生物多样性公约 ”或 O- 1602 通过评估胰腺癌组织病理学变化，促炎细胞因子，如 IL-6 和在血浆和胰腺的水平，和髓过氧化物酶（MPO）活性，肺和胰腺，以及在小鼠胰腺的 GPR55 mRNA 和蛋白表达的变化，在可能产生的影响新的大麻毒品及其受体 GPR55 和机制进行了探讨材料与方法动物组：获得了由中国科学院上海实验动物中心，至少有 60 头成年 C57BL 小鼠（权重 22-26 克）的。

小鼠在 12—12 小时光线暗的周期在锯末涂层的塑料笼子和访问标准的实验室议员和自来水随意在恒定温度 23- CT 2 -C 和相对湿度约 60％ 动物禁食 12 小时前实验，随机分为 6 组，各组小鼠在 8 到 10 分：生理盐水组（ NS） ， CBD （CBD + NS）组， O- 1602 组（O- 1602 + NS ） ，蛙皮素诱导的 AP 组（AP） ， “生物多样性公约” 处理组 AP （ CBD + AP ） ，和 O - 1602Ytreated AP 组（O- 1602 + AP） 所有动物的研究过程符合国际准则的保养和使用实验动物和同济大学，上海，中国的动物伦理委员会的批准胰腺炎感应小鼠 AP 模型被复制，根据先前描述的方法简单地说，在 AP 组小鼠每小时腹腔注射（IP）的 6 倍，总 50-Kg/kg 一定蛙皮素（ Sigma Aldrich 公司， Taufkirchen，德国） 在 CBD + AP 安藤-1602 + AP 组小鼠得到了蛙皮素，相同的程序，在 AP 组和 2 个额外的 IP 注射： 0.5-mg/kgCBDor 10-mg/kgO-1602 （ BIOTREND 有限公司，科隆，德国） ，在第一和紧接第五蛙皮素注射前 30 分钟给出。

O- 1602 + NS， NS，与“生物多样性公约” + NS 组为对照组，小鼠，而不是蛙皮素注射等渗氯化钠溶液， AP 相关的组，以相同的程序样品的收集和制备在最后一次注射蛙皮素或 NS 3 个小时后，所有的动物的异氟醚麻醉下断头处死收集的血液在肝素处理的管;仔细解剖胰腺和肺，漂洗等渗的氯化钠溶液，然后加权和分为几个部分，并在液氮中冷冻，并存储在—80℃直到用法，除了胰腺的一部分被固定在 10％的福尔马林中，立即将血样离心 10 分钟，以 3000rpm 的转速，和血浆样品放在管中，并存储在—80℃中用于以后的分析病理组织学评价胰腺组织固定在 10％福尔马林中作为前面提到的石蜡包埋，切片（ 5Hm ） ，和由的 HE染色和伊红染色光显微镜下进行研究的幻灯片十五个随机选择的微观领域，从 3 张幻灯片在每个组中的 3 只小鼠研究的调查员所不知道的协议和病理评分提到，有报道：（1）间质和腺泡水肿：为零时，不存在; 1 ，局灶性膨胀的小叶间隔 2，小叶间隔扩大扩张; 3，小叶内隔片的焦距扩展 ; 4，小叶内隔垫的发泡膨胀 ; （2）存在下，空泡化：零，不存在; 1，小于 20 ％， 2，20 ％至 35％ ; 3,35 ％至 50％ ; 4， 50％以上; （ 3）间质浸润的嗜中性粒细胞或淋巴细胞：零，不存在，1 ， 1〜10 /高功率字段（HP） ，2 ，11 至 20 个/ HP ; 3， 20〜 30 / HP ; 4，超过 30 / HP;（4）腺泡细胞坏死：为零时，不存在; 1， 1〜 5 个/ HP 2 ，5〜 10 个/ HP ; 3 ，11 至 15 / HP ;和 4 ，超过 15 个/ HP 。

在每一组中，指的分数水肿，空泡形成，浸润，坏死的最终病理评分结果淀粉酶和脂肪酶活力检测淀粉酶和脂肪酶测定血浆中的的适应性检测试剂盒（ 陈健 ，南京，中国）的活动，并根据制造商的说明进行淀粉酶活性的一个单位定义为在 37℃的降解淀粉 10mg 的在 30 分钟脂肪酶活性的一个单位被定义为降解 37℃1Kmol 每分钟甘油三酯结果为每 100 毫升的血浆（单位/毫升） ，和脂肪酶的活性单位的淀粉酶活性每升血浆（ U / L ）为单位IL-6 和 TNF-α 测量市售酶联免疫吸附说试剂盒（R＆D 系统，英国 Abingdon ）被用来检测血清 IL- 6 和 TNF-α 在血浆或胰腺组织将组织匀浆与 Pro 200 手持式实验室匀浆器（临科学，康恩）以2400rpm 转在冰冷的生理盐水中匀浆的等分试样用于蛋白质终止与二辛可宁酸（BCA ）蛋白质测定（热，罗克福德， Ⅲ）和其余的匀浆和血浆的样品，分别测定 IL -6 和 TNF ，按照制造商的说明由： 超显微读卡器（ BioTek 的，威努斯基， Vt）时，检测到的每个样品一式两份，并测定光密度IL-6 和 TNF-α 水平计算皮克每毫升血浆（ pg / mL 的），根据 BCA 蛋白检测的胰腺组织， IL-6 水平在胰腺癌组织中的表达每毫克蛋白在皮克（ pg / mg 蛋白） 。

MPO 活性检测在研究中，在肺和胰腺髓过氧化物酶的活动均化组织样品与 Pro 200 均化器以 2400rpm在冰冷的生理盐水中此匀浆的等分试样用于蛋白质测定用 BCA 蛋白分析，和其余的匀浆用于髓过氧化物酶（MPO）活性检查所购买的检测试剂盒（ 陈健 ，南京，中国） ，根据制造商的说明被定义为一个单位的 MPO 活性，分级 1Kmol 每分钟的过氧化氢，在 37℃根据 BCA 蛋白检测的胰腺组织， MPO 活性为每毫克蛋白质和作为 NS 对照组的百分比的预先给出最后单位计算实时定量 RT- PCR胰腺组织用 Trizol 试剂（TAKARA ，日本滋贺县） ，并从每个样品中的 RNA 为 3kg 总 RNA提取，反转录成第一链互补的 DNA 上标 TM II RT 试剂盒（ Invitrogen 公司，卡尔斯巴德，加利福尼亚州）制造商的手册实时定量逆转录聚合酶链反应（PCR）进行检测 GPR55 mRNA 的表达，用 SYBR PRIMIX 前 TaqTM 试剂盒（Takara ，日本滋贺县）在美国联邦贸易委员会 3000 PCR 仪（枫树岭，上海，中国） 由 Invitrogen 公司设计并合成引物和探针。

聚合酶链反应进行扩增，其结构如下： “热明星” ，与在 95℃的初始变性 30 秒， 5秒，然后 40 个循环，在 60 ℃94℃和 31 秒，与内含子跨越引物 GPR55 这里所用的正向引物序列的 GPR55 为 5 ¶ - GGACTCATTGGTACTCCTAAGCTGT -3 ¶和反向序列 5 ¶ - GCAGATCCCAAAGGTCTTCCT - 3¶ 蛋白印迹胰腺组织匀浆，Western 印迹法根据之前的说理描述进行了分析裂解液. 主要的兔抗 GPR55抗体（恩佐，宾夕法尼亚 Plymouth Meeting ）在 1:500 的稀释和内部控制的 β-肌动蛋白抗体（Sigma 公司， Taufkirchen，德国）中的 1:1000 的稀释液施加适当的 IRDye 二次抗体（罗克兰， Me）中 1:5000 稀释，在室温下孵育 1.5 小时3.0 与 Odyssey 成像系统（ LI-COR ，林肯，纳布）拍摄的图像进行图像分析系统的蛋白条带的光密度，并在每一组中， GPR55 蛋白的表达的调节与相应的 β- 肌动蛋白，分别 GPR55 ％的 NS 对照组的相对表达值免疫组织化学G 蛋白偶联受体 55 蛋白表达胰腺组织中也检测到了用免疫组织化学预先描述. 胰腺组织的石蜡切片进行脱蜡通过常规程序，并浸入溶液中的 0.01-mol/Lcitric 酸为 1 分钟在 95℃，用 5 ％山羊血清 30 分钟，然后在 4℃在 1:20 稀释的兔抗 GPR55 多克隆抗体（开曼化学，安阿伯，密歇根州）过夜孵育。

切片，随后由生物素标记的山羊抗兔 IgG 在 37℃15 分钟，和辣根过氧化物酶标记的链霉抗生物素蛋白（金桥，北京，中国） 30 分钟，在 37℃最后，与二氨基联苯胺染色标本，用苏木精在此染色，和用 Leica DM 2500 显微镜拍摄（Leica ， Wetzlar，德国） 图像进行半定量的 Image-Pro 加 6.0（居间，特伦顿，NJ） 从每张幻灯片的 5 个不重叠的意见进行了分析，并从 3 个不同的小鼠在各组中重复至少3 张幻灯片平均光密度为代表的阳性染色强度和用百分比 NS 组最后表示统计分析从多个测定值分别获得在 。