胶体金检测技术优秀PPT.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,免疫胶体金快速检测技术,农业部饲料质量监督检验测试中心（西安）,培训资料,主要内容,一、免疫胶体金技术的发展历史,二、胶体金检测卡的基本原理及构造,三、免疫胶体金层析法检测原理及应用,四、-激烈剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍,五、常见问题分析与留意事项,六、免疫胶体金技术的发展的方向,培训资料,一、免疫胶体金技术的发展史,1.1939年（英，植物）Kausche和Ruska把烟草叶病毒吸附在金颗粒上，在电子显微镜下视察呈现高电子密度的细状颗粒，开启了免疫胶体金技术的探讨2.1971年（美，微生物）Faulk和Taylor首先将兔抗沙门菌抗血清与胶体金颗粒结合，用直于检测沙门菌的表面抗原3.1974年（奥）Romano等将胶体金标记在马抗人IgG上，实现了间接免疫金染色法同年Bauer等报道将胶体金标记在凝集素上的应用培训资料,4.1978年Geoghegan等应用免疫金技术检测B淋巴细胞表面抗原5.1981年Danscher建立了银显影液增加光镜下金颗粒的免疫金银染色方法 （Immunogold-silver staining,IGSS）。

6.1986年Fritz（美，生物）等人在IGSS法基础上成功地进行了彩色IGSS的染色法,使得检测结果更加明丽夺目这是免疫金检测技术诞生的一次历程碑！,培训资料,二、胶体金的概念、原理及结构,1.,胶体金概念及来源：胶体金又称金溶胶，是由金盐还原成金后形成的金颗粒悬浊液2.,胶体金颗粒结构：由一个基础金核即金原子与包围在外的离子层构成，离子层为氯金酸负离子,（,AuCl,2,-,),，,外层为,H,+,，分散在溶液中呈球形,(,小颗粒,),或椭圆形,(,大颗粒,),培训资料,图,1,金颗粒示意图,在溶液中金颗粒呈圆形,表面带有负电荷,由于静电的排斥力,使其在水中保稳定状态，形成稳定的胶体状态培训资料,3.,胶体金试纸条的构造,样品垫,PVC,底板,层析方向,胶体金垫,测试线（,T,线）,限制线（C线）,NC,膜（硝酸纤维素膜）,吸水滤纸,培训资料,4.,免疫层析法检测原理（双抗体夹心,),4.1,（以,HCG,检测为例）,培训资料,4.2,免疫层析法检测原理（竞争抑制反应）,（以吗啡检测为例）,培训资料,4.3,免疫层析法检测的原理（应用,proteinA,金标）,（以,HIV,检测为例）,阴性,阳性,培训资料,克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇胶体金试纸条是胶体金层析法的应用,接受竞争抑制法，将氯金酸用还原法制成确定直径的金溶胶颗粒，标记为抗体。

以硝酸纤维素膜为载体，样本中的盐酸克伦特罗在流淌的过程中与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和硝酸纤维素（NC）膜检测线上盐酸克伦特罗BSA偶联物（与盐酸克伦特罗的化学结构相像）的结合，使检测线不显颜色，结果为阳性反之，检测线显红色，结果为阴性规定尿液中盐酸克伦特罗的胶体金免疫层析测定方法适用于猪、牛尿液中盐酸克伦特罗的筛选，最低检测浓度为3ng/ml培训资料,-,结果判定依据,阴性比照出现红色条带，阳性比照不出现红色条带，说明检测卡有效如阴性比照不出现红色条带，或阳性比照出现红色条带，出现任何一种现象或两种同时出现，说明检测卡失效待检尿样检测区出现红色条带为阴性,待检尿样检测区不出现红色条带为阳性,阳性结果,样品中可能含有等于或高于3ng/ml的盐酸克伦特罗培训资料,四、-激烈剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍,以盐酸克伦特罗胶体金快速检测卡为例,一适用范围：,主要用于定性检测，测定动物尿液，如猪尿、牛尿、羊尿等样品中盐酸克伦特罗的残留整个检测过程只须要510分钟左右，灵敏度为3 ng/ml(3ppb)也就是说当尿液中盐酸克伦特罗的残留大于或等于3 ng/ml时，检测卡才能检测到。

培训资料,二、包装,每个包装袋中包含盐酸克伦特罗免疫胶体金快速检测卡，滴管1个、干燥剂1片三、现场筛查步骤,1在进行测试前先完整阅读运用说明书，运用前将检测卡和待检样本溶液复原至室温2从原包装袋中取出检测卡，打开后请在一个小时内就地运用培训资料,3将检测卡平放，用移液器或滴管吸取尿液样品溶液，垂直滴加3滴（约80ul）于加样孔中，加样后起先计时培训资料,4结果应在510分钟读取，其他时间判读无效，依据示意图判定结果培训资料,A,、阴性（,-,）：,C,、,T,线均出现表示样品中不含有克伦特罗或其深度低于检测限培训资料,B,、阳性（,+,）：检测,T,线不出现，则表示样品中克伦特罗浓度高于检测限培训资料,C、无效：未出现质控C线，表明操作过程不正确或检测卡已失效，重新运用新卡培训资料,经试剂卡检测的阳性样品在未进行确正之前，被称为疑似样品，必需进行确证后，才能精确推断，不能提前作结论因此，对于出现阳性结果的样品，应按官方抽样程序分瓶封装样品，并于0-4保存，尽快送到我中心进行确证检测培训资料,五、常见问题及留意事项,1.运用前将检测卡和待检样本复原至室温,2.保持干燥，避开受潮，打开包装请尽快运用,试纸条中的NC膜受潮后，尿样在上面无法正常泳动，无法到达吸水纸的位置；胶金垫上的金标抗体受潮后会变性，从而失去原有的生理性功能，影响抗原抗体的选择性反应。

因此，试纸条必需保持干燥，从包装袋中取出后要尽快运用3.检测时，避开阳光直射和电风扇、空调的风直吹,尿样一起先在NC膜上泳动时，是利用毛细管作用，假如风吹太阳晒，NC膜上的尿样蒸发后难以到达吸水纸的位置，会产生假阳性结果，因此，检测时要避开阳光直射和电风扇、空调的风直吹培训资料,4.尽量不要触摸检测卡中心的白色膜面 这主要是人手掌的汗液中有钾、钠离子存在，影响NC膜上泳动时的毛细管作用5.尿样滴管不行混用，以免交叉污染 每一类检测卡的抗体都具有独特的特异性选择，但性质相同或结构相像的样品组成会产生干扰6.加样量为70-80l左右（垂直加三滴）,假如加样量太大或太小，将会影响试验结果如样品特别粘稠，有可能导致样品爬不上去，此时可适当多滴12滴7.以T线的条带为观测点,C线为质量控质线,由于动物个体的差异使尿样样本中的成分组成不同，检测时，有的检测线可能偏淡或颜色偏灰，但只要条带出现，就可判定为阴性结果培训资料,8.假如尿样出现沉淀或浑浊物，请离心后或静置后再检测；,9.试纸条应常温保存，防止温度过高或过低,放在冰箱中要防止温度过低，检测卡受潮，一般风泠冰箱最好，温度限制在8左右较为志向避开在燥热高湿的环境中保存。

10.阳性疑似样品应在0-4冷冻保存 冷藏和常温条件下，尿中的瘦肉精在尿酸和酶的作用下易发生降解，含量会大幅下降，表出现最为突出的是盐酸克伦特罗和莱克多巴胺，因此需确证的尿样必需冷冻保存11.自来水、蒸馏水或去离子水不能作为阴性比照 自来水、蒸馏水或去离子水离子浓度较低，会影响抗原和抗体的反应，不能作为阴性比照培训资料,六、发展方向,(D,eveloping),1.标记技术的探究,顺磁粒子标记、量子点标记,免疫反应信号转化为电子信号模式,培训资料,2.,生物传感器,感谢！,。