对乙酰氨基酚的生物利用度和药物动力学参数的测定.doc

对乙酰氨基酚的生物利用度和药物动力学参数的测定【【实验目的实验目的】】掌握用血药浓度法（静脉注射与口服给药）测定药物制剂的生物利用度和 药物动力学参数的原理与方法，并加深对这些参数的理解 【【实验原理实验原理】】 对乙酰氨基酚水解生成对氨基苯酚，对氨基苯酚在次溴酸钠的存在下，能 与苯酚产生反应，生成靛蓝染料，靛蓝染料在波长 620nm 处有最大吸收 为了排除血浆中的蛋白的干扰，测定血药浓度时首先应加入适量 20％的三 氯醋酸沉淀蛋白 【【实验方法实验方法】】1、血药标准曲线的制备（1）标准贮备液的配制：精密称取 105℃干燥恒重的对乙酰氨基酚 400mg， 用热蒸馏水溶解于 100ml 容量瓶中，冷却至室温后稀释至刻度，至冰箱保存备 用（4000μg/ml） 2）标准溶液的配制：分别精密吸取上述 4000μg/ml 的浓贮备液 1.0ml、2.0ml、3.0ml、5.0ml、7.0ml 于 100ml 容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度， 得 40μg/ml、80μg/ml、120μg/ml、200μg/ml、280μg/ml 的标准溶液3）空白血浆的制备：将实验动物家兔耳缘静脉处毛拔掉，涂擦酒精，用 100W 灯泡烤 5min，将耳静脉横向切开，用经 1％肝素溶液处理并烤干的离心 管采血约 9ml。

然后将刀口贴上棉球，用夹子夹住离心得上清液血浆约 4.5ml，制备标准曲线用 3ml剩下放置冰箱供测样品用4）标准曲线的制备：取干燥洁净离心管 6 支，标上管号精密吸取各种浓 度的标准液 0.5ml按表 1 程序操作，于分光光度计波长 620nm 处，以空白血 浆按同法作对照，测定吸收度 表 1： 标准液浓度（μg/ml）操 作04080120200280 标准液（ml）0.50.50.50.50.50.5 空白血浆（ml）0.50.50.50.50.50.5 20％三氯醋酸（ml）0.50.50.50.50.50.5 涡旋混合后离心（3500 转/分）101010101010小心吸取上清液（ml）111111 浓盐酸（ml）0.50.50.50.50.50.5 煮沸（h）111111 40％氢氧化钠溶液（ml）0.30.30.30.30.30.3 显色剂加至（ml）101010101010 摇匀放置（min）404040404040 1 2测定吸收度 A 3 平均 A2、静脉给药血药浓度的测定 （1）先准备 7 支 EP 管，标上试管号备用 （2）取雄性家兔 1 只，每只称重精密称取 0.25g 对乙酰氨基酚于 25ml 容量 瓶内。

加灭菌注射用水适量，在 37℃下溶解，并稀释至 25ml静脉注射 15ml，立即记下开始时间然后按 15min、30min、1h、1.5h、2.5h、4h、6h 定时 采血约 1.5ml，每份样品离心 10min（3500 转/分） ，将上清液血浆转移至一个编 号的洁净干燥 EP 管中，置冰箱保存备用 （3）先准备 7 支离心管并编号取出所有样品血浆及空白血浆在室温解冻后， 吸取 0.5ml，按表 2 程序操作用分光光度计在波长 620nm 处，以空白血浆按 同法处理作对照，测定吸收度 A 表 2 取血样时间操 作015min30min1h1.5h2.5h4h6h 蒸馏水（ml）0.50.50.50.50.50.50.50.5 空白血浆（ml）0.50000000 样品血浆（ml）00.50.50.50.50.50.50.5 20％三氯醋酸（ml）0.50.50.50.50.50.50.50.5 涡旋混合后离心 （3500rpm）1010101010101010小心吸取上清液 （ml）11111111浓盐酸（ml）0.50.50.50.50.50.50.50.5 煮沸（h）11111111 40％NaOH 溶液 （ml）0.30.30.30.30.30.30.30.3显色剂加至（ml）1010101010101010 摇匀放置（min）4040404040404040 1 2测定吸收度 A 3 平均 A 3、口服给药血药浓度的测定取雄性家兔 1 只，禁食 24h，实验前称重，口服给药 0. 5g，给药后按 15min、30min、1h、1.5h、2h、3h、4h、6h 定时采血约 1.5ml，其他操作与静 脉给药项下完全相同。

4、结果处理 （1）将血药标准曲线数据列表，并求出回归方程 血药浓度 （μg/ml）4080120200280A 回归方程 （2）静脉注射血药浓度的数据处理 取样时间（h）1/41/211.52.546样品 A 根据标准曲线回 归方程计算得血 药浓度 （μg/ml） （3）口服给药血药浓度的数据处理 取样时间（h）1/41/211.52346 样品 A 根据标准曲线回 归方程计算得血 药浓度 （μg/ml） （4）运用 DAS 软件计算相关药动学参数 k、t1/2、C0、表观分布容积 V、清除 率 Cl、AUC 以及绝对生物利用度 F、Cmax 等对乙酰氨基酚 1％肝素 灭菌注射用水 40％氢氧化钠溶液 浓盐酸 次溴酸钠 三氯醋酸 酒精（75%）。