药监系统官方培训07药品无菌检查与隔离器的应用-戴翚

药品无菌检查与隔离器的应用中检院微生物检测室 戴翚中国食品药品检定研究院Nat al Institutes for Food and Drug Control无菌检查的相关概念 用于药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法定义性质 是有关药品安全的一种定性试验 根 培养基中是否有微生物生长判断结果 环境 人员、用品无菌性、检验数量、检验量、培养基适用性、方法 用性、培养条件等影响因素 微生物污染不 匀 检验方法局限局限性National Ins tutes for Food and Drug Control无菌检查法发展历史我国历版药典无菌检查法发展历史国际无菌检查法发展历史1953版 实验环境仅要求为半无菌操作箱；仅收载一种直接接种法；用一种培养基检查1925年 直接接种法首先在英国使用1932年 英国药典推荐使用 菌测试1963版 仅直接接种法；用三种培养基分别培养细菌和霉菌1977版 开始收载薄膜过滤法（简单装置），用二种培养基分别培养细菌和霉菌1936年 美国药典第十一章首 引用单个培养基的直接接种法1950年 美国药典第十 章推荐使用FTG和TSB两种培养基分别 培养需、菌和真菌1985版 收载薄膜过滤法限于抗生素样品；用需、厌气菌培养基及霉菌培养基；要求实验环境为紫外线灭菌的无菌室。1995版 开始要求对培养基进行灵敏度检查。2000版 规定实验环境为100级洁净度；检验数 从2支/瓶增加为611支/瓶；1957年 美国FD 和MILLIP E公司介绍膜过滤法用于抗生素无测试1963年 英国药典63版收载薄膜过滤法无菌测试1965年 美国药典引用薄膜过滤 用于非抑菌性药品的无菌测试1971年 欧洲药典第二版公布参 薄膜过滤 菌测试1978年 欧洲药典修订版 行公布推荐使用薄膜过滤法无菌测试1988年 美国FDA规定：假如第一次无菌检查不符合规定的样品明确薄膜过滤法为首选方法，收载全封闭过滤技术。2005版 收载隔离系统，强调洁净度验证；培养基适用性检查包括无菌性检查和灵敏度检查；开始明确规定检验方法的验证试验要求；不再复试，这一批次的药品应报废。无菌阳性后再测试的机会排除了药品1998年 英国药典1998无菌测试以一次 出为准，取消复试。2000年 美国药典24版无菌测试以一次检出为准，取消复试。应优先采用薄膜过滤法，延长培养时间为至少14天、取消复试。National Ins tutes for Food and Drug ControlUSP35部分章节中国药典2015年版Antimicrobial Effectiveness Testing抑菌效力检查法Biological Indicators-Resistance Performance Tests生物指示剂抗性检查法Microbiological Examination of Nonst ile Products:MicrobialEnumeration Tests非无菌产品微生物检查：微生物计数法Microbiological Examination of Nonsterile Products:Tests for Specified 非无菌产品微生物检查：控制菌检查法MicroorganismsMicrobgical Attributes f Nonsterile Pharmaceu cal Product非无菌药品微生物限度标准支原体检查法Mycoplasma TestsSterility Te无菌检查法Biological dicators fterilization灭菌用生物指示剂指导原则水活度检查法用于非无菌药品微生物评价A cation of Water Activity Determination to NonsterilePharmaceutical ProductsMicrobial Characterizaentification,and Strain yping微生物鉴定指导原则Microbiological Eva tion of Clean Rooms and Other C ntrolledEnvironments药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则Microbiological Best Laboratory Practic药品微生物实验室质量管理指导原则无菌检查用隔离器 统验证指导原则灭菌法Sterility Testing-Validation of Isolator Sys msSterilization and Sterility Assuran of Compendial ArticlesValidation of Alternative Microbiological Methods药品微生物检验替代方法验证指导原则/非无菌药品微生物限度检测指导原则/（日本药典收载）中药饮片微生物限度检查法？药品无菌检查的过程控制无菌性检查灵敏度检查环境保证培养基保证SOP操作有效的方法方法适用性有效的结果可靠的结论结果判断National Ins tutes for Food and Drug Control药品无菌检查的过程控制无菌检查用隔离系统验证指导原则对照培养基培养基保证无菌性检查灵敏度检查环境保证SOP操作有效的方法方法适用性有效的结果可靠的结结果判断National Ins tutes for Food and Drug Control案例阳性结果与玻璃安瓿表面采样菌高度相似National无菌检查过程微生物控制 空气微生物浮游菌沉降菌 表面微生物样品包装表面操作人员手部Nntrol玻璃安瓿表面消毒方案比较 杀孢子剂（过氧乙酸）喷洒后立即（3min、5min、10min）用75%乙醇钝化，再用湿棉签擦拭取样 酒精灯过火1秒钟（3秒钟、5秒钟、10秒钟）后直接用湿棉签擦拭取样表面消毒方案 作用时间 残留菌落数 菌属类型杀孢子剂 立即 2cfu3min 0cfuBacillus/min 0cfu10min 0cfu/棉签擦拭 1秒钟 4cfu&过火Bacillus、Brevibacillus3秒钟 10cfuBacillus、Paenibacillus、Brevibacillus5秒0cfu/10秒钟 0cfu/National Ins tutes for Food and Drug Control主要验证环节环境验证的实质区域设备证明任何程序、生产（实验）过程、设备、物料、活动或系统确实能达到预期结果的有文件证明的一系列活动。培养基方法无菌性灵敏度制备过程检查过程验证的目的规范要求过程受控、满足预期、形成文件提供相应的质量保证生产（实验）过程的稳定性、可靠性得到符合预期品质属性的产品（实验结果）National Ins tutes for Food and Drug Control无菌检查环境要求无菌检查：环境洁净度B级背景下的局部A级洁净度的单向流空气区域内或隔离系统中B+验证、转移、确认TRANSFER OF ANALYTICAL PROCEDURESVALIDATION OF COMPENDIAL PROCEDURESVERIFICATION OF COMPENDIAL PROCEDURES、人员（具象）过程、方法（抽象）icationValidatioLudwig Huber Va idation and Qualification inAnalytical Lab ratoriesNew York,USA,2007Transferrificatio 确认的文件化过程 确认适用性tional Ins tutes for Food and Drug Control环境验证National Ins tutes for Food and Drug Control隔离器应用于无菌测试隔离系统通过基本结构实现无菌操作良性工作流程ational Inut s for Food and Drug Control隔离器的全舱灭菌 每次隔离器启用前进行全舱灭菌 汽化过氧化氢经HEPA进入舱体 不涉及物 装载 保证操作舱与传递舱贯通传递舱的灭菌 全舱灭菌后关闭操作舱门，操作舱实现无菌保持 严格遵照验证过的装载模式对供试样品/器具的表面进行消毒National Ins tutes for Food and Drug Control隔离系统用于无菌测试隔离器URS 性能1.检测处理 材质与结构1.基本结构2.无菌保证要求3.清洁&清洁确认4.密封性能2.关键部件材质3.送风系统及空气过滤4.口5.环境控制6.泄露测试5.控制单元6.附加设备7.监控系统8.环境微生物监测9.过程模拟试验National Ins tutes for Food and Drug Control隔离器安装环境中国药典2015版9206无菌检查用隔离 安装环境的洁净度要求应不低于我国现行GMP中D级空气洁净度要求，安装隔离器的房间应限制无关人员出入。National Ins tutes for Food and Drug Control隔离系统实验室基本设施参数od and Drug Control隔离系统验证ood and Drug Control隔离系统验证National Ins tutes for Food and Drug Control安装确认IQ 主要验证项目 文件资料文件资料 结构与构造材料 安装环境管道仪表流程图衔接部件电气组件 测量仪表线路检查传输部件 HEPA及其他除菌过滤器 易耗部件变频器参数确认传感器校准确认 操作软件操作软件界面确认输入/输出确认泄露测试高效完整性IQ-构造、线路传感器确认变频器参数确认泄露测试高效完整性操作确认（OQ）控制有效性 参数设定 报警功能 操 软件 尘埃微粒每小时换气率压力控制测试运行测试 系统完整性压力下降试验泄露测试发烟测试粒子测试HEPA粒子扫描操作等级确认 灭菌设备功能与过程参数 灭菌循环程序（步骤、运行值与设定值的相符性）National Ins tutes for Food and Drug Control每小时换气率压力控制测试功能运行测试发烟测试粒子测试-自净灭菌循环开发（CD）隔离器内物料装载模式与要求 开发与验证最坏装载模式下的循环标准装载模式确认生物指示剂确认优化装载循环灭菌循环验证排空测试rug Control标准装载模式确认多种装载模式测试生物指示剂确认 汽化过氧化氢灭菌过程采用的生物指示剂嗜热脂肪地芽孢杆菌（Geobacillus stearothermophilus）ATCC12980 or ATCC7953生物指示剂确认优化装载循环灭菌循环验证 根据隔离器体积大小，每立方米放置5-10个BI是足够的，均匀分布于内表面，以证实杀菌剂的分布均匀性。-PDA TR34灭菌循环验证 确认过的装载模式 增加生物指示剂挑战 平行3次灭菌循环验证 不锈钢桶更利于汽化过氧化氢扩散 全舱灭菌关闭DPTE门排空测试包装完整性包装完整性 单层塑袋密封 全程1ppm 单层呼吸袋密封Stabilization 2ppmAeration 20ppm 双层包装 0.0ppmr清洁验证 无菌试验用隔离器的清洁验证并非关键，清洁至无目视污染的程度即可。有抗菌活性的粉剂应予重视，防止其扩散而影响其他产品或批次中低污染微生物的检出 清洁方案，频率，材料等应进行文件规定并形成记录。National Ins tutes for Food and Drug Control无菌维持与环境监测 建立隔离器内部环境的监测系统和程序 环境物理监测：尘埃微粒、压差等 环境微生物监测1.动空气取样（浮游菌）2.被动空气取样（沉降菌）3.表面取样（swab、RODAC）4.手套采（指印）Nationa无菌室C级浮游菌高限图硬件差异软件差异National Ins tutes for Food and Drug Control无菌程序保障 无菌检查样品前处理分批消毒、实验