猪圆环病毒2型wh株和猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒混合感染致病性的研究

混合感染致病性的研究 T h eS t u d yo nP a t h o g e n i co fC o i n f e c t i o nw i t hP o r c i n eC i r c o v i r u s T y p e 2 ( W HS t r a i n ) a n dP o r c i n eR e p r o d u c t i v e a n dR e p i r a t o r y S y n d r o m eV i r u s 硕士研究生：宋飞 指导教师 ：何启盖教授 指导小组 ：陈焕春教授 郭爱珍教授 方六荣教授 周锐教授 吴斌教授 肖少波副教授 专业：预防兽医学 获得学位名称：硕士 研究方向：动物传染病 获得学位时间：2 0 1 0 年6 月 华中农业大学动物医学院 二O O 年六月 l I l frlrl l lr l lr l ll lllll Y 17 9 9 5 9 8 华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书 薹纂姜妻。I 客 如需保密，解密时间年月日 是否保密i 砭 独创性声明 本人声豌所里交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究 成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人 已经发表或撰写过的研究成果，也孑包含为获得华中农业大学或其他教育机构的 学位或证书而使用过的材料，指导教师对此进行了审定与我一同工作的同志对 本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明，并表示了谢意 研究生签名：东弋 时问： 矽知年月石- 日 学位论文使用授权书 本人完全了解华中农业大学关于保存、使用学位论文的规定，印学生必须按 照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本；学校有权保存提交论文的印刷版 和电子版，并提供目录检索和阗览服务，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段 保存，汇编学位论文本人同意华中农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、 传播学位论文的全部或部分内容，同时本人保留在其他媒体发表论文的权力 注：保密学位论文( 窜涉及技术秘密，商业秘密或申请专利等潜在需要提交保密 的论文) 在解密后适用于本授权书 学位论文作者签名：永飞 导师签名：彳歹碚多 签名日期：o 年月石日 签名日期：如舻年多月膨日 注：请将本表直接装订在学位论文的扉页和目录之间 猪圆环病毒2 型( W H 株) 和繁殖与呼吸综合征病毒混合感染致病性研究 目录 摘要1 A b s t r a c t 3 缩略表( A b b r e v i a t i o n ) 5 1 文献综述6 1 1 P C V 2 的国内流行和分布状况6 1 2 P C V 2 的全球流行和分布状况6 1 3 病毒传播方式及途径7 1 4 P C V 2 相关性疾病及其混合感染病原7 1 4 1 断奶仔猪多系统衰竭综合症( P M W S ) 和共感染病原8 1 4 2 猪呼吸道综合征( P I m C ) 和共感染病原9 1 4 3 猪皮炎与肾病综合征( P D N S ) 和共感染病原。9 1 4 4 繁殖障碍性疾病和共感染病原1 0 1 4 5 P C V 2 相关性肝病、肠道疾病和间质性肾炎1 0 1 5 P C V 2 的致病机理1 1 1 6 P I 汛S V 及其致病机理1 2 1 7 P C V 2 与P R R S V 混合感染流行病学1 3 1 8 展望1 4 2 本实验研究目的及意义1 5 3 P C V 2 和P R R S V 混合感染对原代肺泡巨噬细胞( P A M s ) 的影响1 6 3 1 前言。16 3 2 材料与方法1 6 3 2 1 材料1 6 3 2 1 1 病毒和细胞。1 6 3 2 1 2 主要试剂1 6 3 2 1 3 培养基与抗生素及其配制1 7 3 2 2 实验方法1 7 3 2 2 1P C V 2 增殖和T C I D s o 的测定。1 7 3 2 2 2P R R S V 培养增殖和T C I D 5 0 的测定1 8 3 2 2 3 肺泡巨噬细胞( P 剐s ) 的分离1 8 3 2 2 4 实验设计1 8 3 2 2 5 用T a q m a n 绝对定量P C R 检测P C V 2 的吸附及增殖滴度1 8 3 2 2 6 用间接免疫荧光方法检测P C V 2 阳性细胞率及细胞分布2 0 3 2 2 7 用台盼蓝检测细胞存活率。2 0 3 2 2 8 流式细胞仪检测细胞凋亡2 0 3 2 2 9 用相对定量P C R 检测细胞因子的表达水平2 0 3 3 结果2 l 3 3 1 用T a q m a n 绝对定量P C R 检测P C V 2 的吸附及增殖滴度2 l 2 0 1 0 届华中农业大学硕士学位论文 3 3 2 用间接免疫荧光( I F A ) 方法检测P C V 2 阳性细胞率及细胞分布2 2 3 3 3 用台盼蓝检测细胞存活率2 3 3 3 4 流式细胞仪检测P A M s 凋亡情况2 4 3 3 5 用相对定量P C R 检测细胞因子T N F a 、I L 8 和I F N - 1 , 的表达2 4 讨论：2 7 J 、结2 9 第四章P C V 2 和高致病性P R R S V 人工感染仔猪临床学特征测定与分析3 0 材料及方法3 0 4 1 1 材料3 0 4 1 1 1 病毒3 0 4 1 1 2 实验动物感染及饲养3 0 4 1 2 检测指标及方法3 0 4 1 2 1 临床症状观察3 0 4 1 2 2 血常规检测3 1 4 1 2 3 血清中P C V 2 和P R R S V 病毒血症的监测3 l 4 1 2 4 鼻拭子、肛拭子排毒量的检测3 2 4 1 2 5 免疫器官指数计算3 2 4 1 2 6 剖检大体病变观察3 2 4 1 2 7 病理组织学观察3 2 结果3 3 4 2 1 临床症状观察3 3 4 2 2 病毒感染对猪体温的影响3 4 4 2 3 病毒感染对猪血常规指标的影响3 5 4 2 4 病毒感染对猪体重和日增重的影响3 6 4 2 6 病毒感染对猪免疫器官指数的影响3 7 4 2 7 不同病毒感染组P C V 2 和P R R S V 在组织中的分布3 7 4 2 8 不同病毒感染组P C V 2 和P R R S V 病毒血症的检测一3 8 4 2 9 不同病毒感染组P C V 2 和P R R S V 肛拭子排毒规律检测3 9 4 2 1 0 不同病毒感染组病理与变化特点4 0 4 2 10 1 剖检大体变化4 0 4 2 1 0 2 病理组织学变化4 l 4 3 讨论：。4 3 4 4 J 、结4 6 5 结论4 7 6 参考文献4 8 致谢- 5 6 I I 猪圆环病毒2 型( W H 株) 和繁殖与呼吸综合征病毒混合感染致病住研究 摘要 通过流行病学调查，P C V 2 分布极为广泛，猪群抗体阳性率较高，P R R S V 是严重 危害猪群的健康健康、给世界养猪业带来巨大损失的重要传染病，并且这两种病毒 的混合感染率在P C V 2 阳性猪中占很大比例，并且常常伴随着细菌或其他病原体的 继发感染，造成猪群严重的临床症状甚至很高的死亡率。而当前人们尚未清楚地认 识到这两种病毒的协同致病机制，给P C V 2 和P R R S V 的混合感染的防制带来困难。 因此本实验以猪肺泡巨噬细胞( P o r c i n ea l v e o l a rm a c r o p h a g e s ，P A M s ) 为模型观 察P C V 2 和P R R S V 共感染在体外对P A M 的影响；通过人工感染仔猪，进行P C V 2 和P R R S V 单独感染及混合感染对仔猪致病性的研究，以期为两病毒混合感染的诊断和防制提 供依据。 一