5种不同石斛的多糖与氨基酸及甘露糖的含量比较分析.docx

5种不同石斛的多糖与氨基酸及甘露糖的含量比较分析鲁芹飞'，黄松、八,林培I吕书剑'，谢剑锋'(1.广州中医药大学，广州510006； 2,东莞广州中医药大学中医药数理工程研究院， 广东东莞523808)摘要：目的：比较不同种石斛部分化学成分的差别方法：采用苯酚-硫酸法测定 样品中多糖含量，前三酮显色法测样品中氨基酸的含量，内标法测定样品中甘露 糖的含量,通过定量测定，比较5种石斛种总多糖、氨基酸和甘露糖的含量差异 结果：5种不同种类的石斛的多糖、氨基酸、甘露糖的含量存在较大的差异.多 糖含量，细茎石斛、金钗石斛、马鞭石斛相近，其中铁皮石斛明显高于其余4 种石斛，鼓槌石斛明显低于其余的4种石斛；氨基酸含量，马鞭石斛高于其它4 种石斛；甘露糖含量，铁皮石斛明显高于其余4种石斛结论：5种不同石斛的 总多糖、氨基酸和甘露糖的含量存在较大的差异，但就所含的相同化学成分总体 而言铁皮石斛的质量好于其它四种石斛关键词：石斛；多糖；氨基酸；甘露糖Determination of Polysaccharide , Amino Acid and MannoseContents in the Five Kinds of Dendrobium.LU Qin-fei1, HUANG Song1'2* , LIN Pei *,LV Shu-jian ',XIE Jian-feng1,(1.Guangzhou University of Chinese Medicine Guangzhou 510006,China; 2 Dongguan Institution for Mathematics and Theoretics Engineering Research,Dongguan 523808,China) ABSTRACT: Objective To compare the chemical compositions in the five kinds of Dendrobium. Method Polysaccharide ,mannose and amino acid in the five Kinds of Dendrobium were determined and compared. Result The polysaccharide contents ,the amino acid contents and the mannose contents are remarkably different in the five kinds of Dendrobium. The content of polysaccharide in the Dendrobium officinnle is highedest in the five kinds of Dendrobium; The content of amino acid in the Dendrobium finbristun is higher than other four kinds of Dendrobium; the mannose contents of Dendrobium officinnle is much more higher than other kinds. Conclusion The quantity and contents of polysaccharide, amino acid and the mannose are remarkably different in the five kinds of Dendrobium. However, Dendrobium officinnle has a higher quality than other four kinds of Dendrobium in terms of the same chemical compositions!.Key words: Dendrobium； Polysaccharide； Amino acid； Mannose中药石斛为兰科(Orchidaceae)植物石斛属(Dendrobium)多种药用植物的总 称,始载于《神农本草经》，其有养胃生津、滋阴清热、明目的功能，用于阴伤津 亏，口干烦渴，食少干呕，病后虚热，目暗不明等症状⑴。

现代药理研究证明石斛具 有抗衰老、抗肿瘤、降低血糖的作用，在治疗胃肠道疾病和治疗白内障方面也有 很好疗效「州几十年来，中外学者对石斛属植物的化学成分和药理作用进行了大【收稿日期】20130712 (002)【基金项目】：广东省科技计划项目(2008A030101009),广东省教育部产学研结合项目(2010B090400474), 广东省科技计划项目(2011A030100011)【作者简介】：鲁芹飞，在读硕士研究生，从事中药新药研究开发研究，Tel: 020-39359731,E-mail :jiayouluqinfei@ 【通讯作者】：*黄松，博士，副教授，硕士生导师，从事中药新药研究开发研究，Tel: 020-32503212, E-mail： hs!318@ 量的研究，结果发现石斛属植物中化学成分类型不尽相同，含量也存在差异妇气 本文对铁皮石斛、金钗石斛、细茎石斛、鼓槌石斛和马鞭石斛的多糖、氨基、甘 露糖的含量进行了测定和比较，旨在从化学成分的含量方面的比较不同品种的石 斛的差异，使得各种石斛得到更好的综合应用1. 材料1.1药材五种石斛均有广州中医药大学新药研究开发中心黄松老师提供，经 广州中医药大学新药开发研究中心陈建南研究员鉴定为兰科石斛属植物。

1.2仪器 UV mini紫外分光度计（日本岛津）；Sartorius BPU0S型电子天 平（德国）；Sartorius CP225D型电子天平（德国）；Aquapro艾科浦u系列纯 水机；HWS24型电热恒温水浴锅（上海一恒科技有限公司）；SHIMADZU型高效液 相色谱仪（日本岛津公司），SPD-20A型紫外-可见光检测器；Diamonsil色谱柱 （4. 6 mm*250 mm, 5 Hm）o1. 3试剂 天冬氨酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号624-200104）;无 水葡萄糖（中国药品生物制品检定所提供批号0833-9501）;甘露糖（中国药品 生物制品检定所提供批号140651-200602 ）;盐酸氨基葡萄糖（中国药品生物制 品检定所提供 批号140649-201103 ）;苯酚,硫酸，乙醇，前三酮，氯化亚锡，无 水乙酸钠,PMP（1-苯基-甲基-5毗哩□林酮），乙腊为色谱纯，甲醇，三氯甲烷，乙 酸铉等均为分析纯2. 方法与结果2.1总多糖的含量测定2. 1. 1供试品溶液的制备 根据2010年版《中国药典》铁皮石斛项下的多糖含 测中的多糖供试品制备方法制备铁皮石斛的多糖供试品溶液。

其余四种石斛的 多糖供试品溶液的制备方法如下：取样品粉末（过3号筛）约0. 3g,精密称定， 置250 mL圆底烧瓶中，加水200 mL加热回流2 h,抽滤，滤液转移至250 mL 量瓶中，加水至刻度，摇匀从250ml容量瓶中精密移取溶液10mL,置100 mL 离心管中，精密加入无水乙醇50 mL,摇匀，冷藏1 h,取出，离心20 min, 弃去上清液，沉淀加80%乙醇洗涤两次，每次40 mL,离心，弃上清液，沉淀加 热水溶解，转移至25 mL量瓶中，放冷，加水至刻度，摇匀2. 1.2多糖含量测定及标准曲线的绘制 精密称定105°C干燥至恒重的葡萄糖 对照品10mg,置于100 mL量瓶中，加水适量使溶解，稀释至刻度，摇匀精 密移取对照品溶液0. 2, 0.4, 0.6, 0.8 , 1.0, 1.4 mL ,分别置于10 mL具 塞试管中，各加水至2. 0 mL,精密加入5%苯酚溶液1. 0 mL,摇匀，加硫酸5. OmL, 摇匀，置沸水浴中加热20 min,取出，置冰浴中冷却5 min,以相应试剂为空 白，在488nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，萄糖浓度为横坐标， 绘制标准曲线，得回归方程户0. 060曰0. 074（1=0. 999 2）,在2. 48〜17. 36 mg •!? 线性良好。

另取2. 1. 1项下制备的供试品溶液1. 0 mL,自“加水至2. OmL开 始”，依法测定其吸光度，计算多糖的的含量（以葡萄糖计），结果见表12.1.3精密度、重复性、稳定性考察 依法测定试验方法的精密度、重现性、 稳定性，其RSD依次为1.37%, 1.52%, 0.45%, 180 min内稳定性良好.2. 1.4回收率 精密称取已知多糖含量的石斛鲜品样品的6份，加入相同量葡萄 糖对照品，按2. 1. 1项下的方法制备供试品溶液，依法测定，结果回收率为97. 6%, RSD 2. 43%O2.2氨基酸的含量测定2. 2. 1 2%前三酮溶液的配制 称取水合前三酮2. 0g,加水50 mL、氯化亚锡0. 080 g搅拌溶解，于暗处静置过夜,过滤后，加水定容至100 mLo2.2.2供试品溶液的制备 取样品粉末（过3号筛）约1.0 g,精密称定，置250 mL圆底烧瓶中，加70%乙醇40 mL加热回流提取2次，每次1 h,合并滤液，转移 至100 mL量瓶中，定容，摇匀2.2.3氨基酸含量测定及标准曲线的绘制 精密称取天冬氨酸对照品10 mg,置 于100 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。

精密吸取对照品标准溶液1.0, 1.5, 2.0, 2. 5, 3.0, 3. 5, 4. 0 mL,于25 mL量瓶中，加水补足至4. 0 mL,再精密加 入pH 6. 5的CH3C00Na缓冲盐溶液1. 0 mL, 2%的菌三酮溶液1. 5 mL,摇匀，置沸 水浴中加热30 min,取出，放冷15 min,加水定容以相应溶剂为空白，在波 长为568 nm处测定吸光度，以吸光度作纵坐标，以天冬氨酸溶液浓度为横坐标， 绘制标准曲线，得回归方程与0. 111 9^0. 128 0 S0. 999 7）在2. 022-12. 132 mg •!?线性良好另取2. 2. 2项下制备的供试品溶液2. 0 mL,自“加水至4. 0 mL 开始”，依法测定其吸光度，计算氨基酸的含量，结果见表12. 2.4精密度、重复性、稳定性考察 依法测定试验方法的精密度、重复性、稳定性，其RSD依次为0.98%, 1. 12%, 1.64%, 45 min内稳定性良好.2. 2.5回收率 取已知含量的石斛药材1.0g,精密称定，平行6份，按2.2.2项 下的方法制备供试品溶液，并且按2.2.3项下的方法显色，依法测定吸光度， 在显色反应过程中按照供试品中总游离氨基酸的量与加入对照品的量1： 1,精 密加入适量的天冬氨酸对照品溶液，结果平均回收率为99. 87%, RSD为1. 72%o 表1 5种石斛的多糖和氨基酸含量％药材多糖氨基酸细茎石斛14. 010. 89金钗石斛13. 960. 62鼓槌石斛6. 840. 80马鞭石斛15. 531. 21铁皮石斛29. 750. 702. 3甘露糖的含量测定2. 3. 1色谱条件SHIMADZU高效液相色谱仪（日本岛津公司），SPD-20A紫外-可 见光检测器，Diamonsil 色谱柱（4. 6 mm*250 nun, 5 Mm）,以乙腊-0. 02 mol • L"1 的乙酸铉溶液（20:80）为流动相，流速1 mL - min1,检测波长为250 nm。

2. 3. 2线性范围的考察 精密称取1, 4, 7, 10, 20, 30 mg甘露糖对照品置100 mL 容量瓶中，。