中药化学苷类-2课件

第5节 苷的提取、分离及检识,苷的提取： 溶剂法 苷的分离： 大孔树脂法 色谱法 苷的检识： 化学检识 色谱检识,1.苷的提取,溶剂法：用极性由小到大的溶剂依次提取。常用溶剂有沸水、甲(乙)醇、正丁醇、乙酸乙酯等。 ！注意：苷的水解（酸、酶、碱的影响）。 原生苷的提取：破坏或抑制酶的活性。 药材迅速干燥 拌料无机盐如碳酸钙 用沸水、高浓度醇提取 次生苷或苷元的提取：利用酶活性。 发酵后或水解后，用亲脂性有机溶剂提取。,2.苷的分离纯化,溶剂处理法：利用溶解度差异分离。提取液浓缩后，用合适的溶剂处理，根据苷类与杂质的溶解度不同分离。如乙醚、丙酮沉淀皂苷等。 铅盐沉淀法：利用醋酸铅在水或稀醇中能沉淀某类成分的性质，进行除杂或提纯。中性醋酸铅能沉淀具邻二酚OH、-COOH的酸性苷；碱式醋酸铅能沉淀酚性成分。 色谱法：利用混合物中各组分与固定相和流动相的相互之间的作用不同，使各组分以不同程度分布在固定相和流动相中，当流动相流过固定相时，各组分以不同的速度移动，达到分离。分离效果好，是一种实验室常规分离方法。,按流动相分：液相色谱（liquid chromatography） 气相色谱（gas chromatography） 按操作方式分：薄层色谱 纸色谱 柱色谱 按分离机理分：吸附色谱 分配色谱 离子交换色谱 按极性分：正相色谱 反相色谱,色谱法（Chromatography）分类：,2.苷的分离纯化,大孔树脂吸附色谱 原理：大孔树脂是一类具有多孔结构、不溶于水的固体高分子物质，可以通过物理吸附（范德华力）从水溶液中有选择的吸附成分，达到分离目的。 特点：选择性、机械强度高、再生处理方便、吸附速度快等。应用广泛，如苷与糖类的分离等。 分类：非极性、中极性、极性和强极性四类。选择的树脂极性与被分离物质极性既不能相似（吸附过强），也不能差太大（无法分离）。常用的有DA-101、DA-201、AB-8型等。 操作：样品用水溶解，上样后依次用水、含水醇、浓醇洗脱。收集洗脱液，回收溶剂，浓缩干燥，即得。 聚酰胺色谱 凝胶色谱,苷的分离（有效部位）：,2.苷的分离纯化,硅胶、氧化铝吸附色谱：适用于极性低的苷类或苷元的分离。利用被分离组分与吸附剂之间的相互作用（可逆的范德华力）差异进行分离。在洗脱过程中，柱内不断地发生解吸、吸附，再解吸、再吸附的过程。即被吸附的物质被溶剂解吸而随溶剂向下移动，又遇到新的吸附剂颗粒被再吸附，后面流下的溶剂又再解吸而使其下移动。经过一段时间以后，该物质会向下移动一定距离。此距离的长短与吸附剂对该物质的吸附力以及溶剂对该物质的解吸(溶解)能力有关。不同的物质由于吸附力和解吸力不同 ，移动速度也不同。吸附力弱而解吸力强的物质，移动速度就较快。 分配色谱：以硅胶、纤维素等为支持剂，水饱和的溶剂为流动相进行分离，适用于极性较大的苷类成分。常用反相色谱，即以键合硅胶为固定相，含水的溶剂系统为流动相分离。,苷的纯化（有效成分）：,3.苷的检识,化学检识 Molish反应（-萘酚浓硫酸）：糖、苷（）紫色环。 糖被氧化成糠醛，糖醛与酚胺缩合生成有色化合物。 Fehling或Tollen反应：还原糖（）。 苷、非还原糖(-)。比较水解前后结果，判断是糖还是苷。 RCHO+2Ag(NH3)2+OHRCOONH4+2Ag+3NH3+H2O RCHO+2Cu(OH)2+NaOHRCOONa+Cu2O+3H2O,第6节 苷的结构研究,纯度鉴定 分子式的测定 苷的水解 苷元的结构鉴定 糖的结构鉴定,糖的结构鉴定,糖的种类 糖的数目 糖链的结构 位置：苷元-糖、糖-糖 顺序：糖-糖 构型：苷键,1.糖的种类的确定,色谱法测定水解液中的单糖，与对照品比较。 PC：最常用。 TLC：点样量较少5g。可用无机盐（强碱弱酸）的水溶液制板，增加样品承载量，改善分离效果。如0.3mol/L Na2HPO4、0.03mol/L H3BO3等。 HPLC：直接进样，但灵敏度不及GC。 GC：灵敏度高，但需水解、制备衍生物。 NMR法直接测定苷，与标准品的糖数据比较。 1HNMR、13CNMR 二维NMR,常见单糖纸色谱hRf,BAW：正丁醇醋酸水（4:1:5, 上层） BEW：正丁醇乙醇水（4:1:2） BBPW：正丁醇苯吡啶水（5:1:3:3） PhOH：水饱和苯酚,2.糖的数目的确定,MS法 测定苷和苷元分子量，根据差值或碎片质荷比差值计算。 色谱法测定水解液中的单糖 TLC-Scan、HPLC-定量，以单糖对照品为标准。 NMR法 1HNMR：根据糖端基质子信号数目确定；或全乙酰化、全甲基化数目推测。 13CNMR：根据糖端基碳信号数目（90-112ppm）确定；或苷和苷元碳信号差值推断。 二维NMR,3.糖的连接位置苷元与糖,13CNMR 苷化位移（glycosylation shift, GS）：苷元与糖结合成苷后，苷元的成苷碳原子（-C）与相邻的碳原子（-C）信号会发生位移，其他碳信号不变；糖端基碳原子与游离单糖信号相比也发生了位移。 苷元：醇苷，-C 低场位移 4-10ppm -C 高场位移 1-4.6ppm 酚苷，-C 高场位移 -C 低场位移 糖：端基C低场位移 4-7ppm 相邻C高场位移 1-4ppm 二维NMR,13CNMR 法：苷的碳谱数据与单糖的碳谱数据比较，根据苷化位移规律可确定单糖的连接位置。若内侧糖的某碳原子向低场移动（4-7ppm），而相邻两个碳原子又略向高场移动（1-4ppm），确定内侧糖的碳原子是连接糖的位置。,4.糖的连接位置糖与糖,6.苷键构型的确定,酶水解法 麦芽糖酶水解 -苷键 苦杏仁苷酶水解 -苷键 NMR,1HNMR：糖成苷后，端基质子常位于较低场。 H-2为a键的糖，如葡萄糖，形成-苷或-苷时，偶合常数J不同，由此可判断苷键构型。 H-2为e键的糖，如鼠李糖，形成不同构型苷的J值相近，无法判断。,-L-鼠李糖苷 J12 = Jae = 2-3 Hz,-L-鼠李糖苷 J12 = Jae = 2-3 Hz,13CNMR：糖成苷后端基碳原子向低场位移，而其他碳变化不大。 2D-NMR（NOE） -D-葡萄糖苷，H1H2 -D-葡萄糖苷，H1H3、H1H5,复习思考题：,1.名词解释 苷 原生苷 次生苷 乙酰解反应 酶解反应 Smith降解 Molish反应 与构型 全甲基化甲醇解 苷化位移 端基碳 氧苷 2.比较以下各化合物水解难易，并说明理由。 ABDC,3.完成反应式 （1）写出苦杏仁苷在不同条件下的水解产物：a.稀酸；b.苦杏仁酶 （2）写出碳苷的Smith降解产物。 4.问答题 （1）简述苷键裂解的方法、使用范围及优缺点。 （2）如何从中药材中提取分离苷类成分，要注意哪些问题？ （3）简述开展苷的结构研究的程序及方法。 （4）确定苷键构型的方法有哪些？,