血栓与止血疾病检验技术

,血栓与止血疾病 检验技术,出血时间测定和血小板计数,血管性血友病因子,血小板膜糖蛋白测定 血小板活化分析 血小板自身抗体 血小板生存时间 血小板第3因子有效性测定,初期止血检查,初期止血的筛查试验：,血浆内皮素-1 血浆血栓调节蛋白 血浆6-酮-前列环素,血小板黏附检验 血小板聚集试验,（一）凝血酶原时间（PT） （二）活化部分凝血活酶时间（APTT） （三）凝血酶时间（TT） （四）血浆纤维蛋白原（FIB）,二、二期止血的筛查试验,凝血四项,（一）凝血酶原时间（Prothrombin time，PT）,钙 组织因子 脂质,含钙组织凝血活酶,（一）凝血酶原时间（Prothrombin time，PT） 原理：,F,a,F（凝血酶原）,a（凝血酶）,纤维蛋白原,纤维蛋白,a、PF3、Ca2+,F,a,TF,TF,Ca2+,外源凝血系统,PT试剂（组织因子、Ca2+、脂质）,PT,手工法 仪器法检测的原理 光学法 电流法 粘度法,检测方法,手工法,凝固法 （磁珠法）,光学法 （透射比浊法）,光学法 （散射比浊法）,光学法（散射比浊法）,光学法（透射比浊法）,凝固法（磁珠法）,（ 0.85 1.15）,（0.81.5）,11 13s（±3s以上为异常）,（ 70% 130%）,组织凝血活酶,牛脑组织、兔脑组织等的抽提物 纯化的重组组织因子加磷脂 对因子、的检测灵敏度不同 试剂的活性影响PT检测的准确性 为增加PT检测结果可比性，要求PT试剂要注明国际敏感指数。,International sensitivity index(ISI) 标准品组织凝血活酶与待测组织凝血活酶PT校正曲线的斜率,标准品PT对数值,待校正PT对数值,斜率（ISI）,国际敏感指数,ISI愈接近1.0 试剂愈灵敏 INR误差愈小,ISI=1.0试剂 ISI=2.0试剂 PT正常平均 12 sec 12 sec PT病人sec 24 sec 16.9 sec PT病人INR (24/12) =2.0 (16.9/12) =2.0 当系统误差是 (23/12) = 1.92 (15.9/12) =1.76 1秒时的INR (25/12) = 2.08 (17.9/12) =2.22 INR误差范围 1.92 2.08 1.76 2.22 一般选用ISI接近1的试剂，不仅可以提高PT的灵敏度，而且INR系统误差也小。,比较同一口服抗凝剂病人的血浆用两种试剂测定,ISI对INR系统误差的影响,不同ISI三种报告方式的差异,为了避免结果的不可比性，所以选用INR作为口服抗凝剂监测的首选指标。,缩短 先天性FV增多 血栓前状态及血栓性疾病 DIC早期（高凝状态）,临床意义：,延长 先天/获得性因子，X，V，II和Fg或无Fg（异常Fg）血症 原发/继发性纤溶亢进，抗凝物质增加,口服抗凝剂监测,口服抗凝剂,国内主要以维生素K拮抗剂（华法林）,优点：在INR最佳时有效、口服、无肝素诱导血小板减少症的风险,缺点：起效缓慢、药代学不明确、与食物和药物相互作用多、需要进行凝血功能监测,口服抗凝剂监测 PT维持在正常对照值的1.52倍 PTR为1.52倍 INR为1.5 2.5,PT,方法评价： 外源凝血系统最常用的筛检试验 口服抗凝剂常用的监测指标 手工法重复性差、耗时，但操作简便，常作为参考方法与校正仪器 仪器法干扰少，标准化，快速、简便,PT,白陶土或鞣酸 脑磷脂,（二）活化部分凝血活酶时间 Activated partial thromboplastin time, APTT,钙离子,原 理,APTT,F,a,F,a,F,a,F,a,F（凝血酶原）,a（凝血酶）,纤维蛋白原,纤维蛋白,a、PF3、Ca2+,a、PF3、Ca2+,内源性凝血系统,白陶土或鞣酸,APTT试剂（含白陶土、硅土或鞣酸及脑磷脂）,APTT,参考值 2535秒（±10秒以上有意义） 临床应用 延长 除外、因子缺乏 继发性或原发性纤溶活性增强 循环抗凝物的存在 缩短 、因子活性增高 血栓前状态和血栓性疾病、DIC早期 监测肝素抗凝治疗首选指标，维持正常对照1.5 2.5倍,肝素抗凝剂,抗凝原理：与抗凝血酶结合使其结构改变，从而使抗凝血酶灭活凝血因子（ a、a、a、a、a、a ）的速度明显增加 起效快，注射或输注，使用普通肝素出血发生率为7%10%，血小板减少发生率为0% 5%，需要进行血小板监测,方法评价： 敏感的内源凝血系统的筛检试验，灵敏度CT 检测除、以外其他凝血因子的缺陷 特别是、的缺陷 可检出低于正常水平25%的轻型血友病 单一因子活性增高掩盖其他凝血因子缺乏 手工法重复性差、费时，但操作简便，作为参考方法并校正仪器 仪器法准确度和灵敏度较高，快速、简便、易于标准化,APTT,APTT纠正试验,凝血时间（clotting time, CT） 原理：离体全血的FXII被激活启动了内源凝血系统使血液发生凝固。 方法： 普通试管法（已淘汰）：重复性差，灵敏度低，仅能检出重型血友病（2%） 硅管法 silica clotting time(SCT)：灵敏度高于普通试管法，能检出亚临床型血友病(45%)，但操作耗时 活化法 activated clotting time(ACT)：敏感的筛查试验。需加入活化剂，终点不易判断，尚未标准化。,参考值：1.1-2.1分钟（ACT） 15-30分钟（SCT） 临床应用 延长 除外F、FXIII的凝血因子缺乏 继发性或原发性纤溶活性增强 循环抗凝物的存在 缩短 血栓前状态和血栓性疾病 监测血液体外循环肝素用量（浓度超过1.0IU/ml）,凝血因子,纤溶亢进,抗凝物增多,血栓前状态或血栓性疾病,凝血因子增多： PT、APTT缩短 凝血因子减少： PT、APTT延长,PT、APTT延长,PT、APTT延长,PT、APTT缩短,PT与APTT,PT,APTT,，X，V，II和Fg,除外、因子,， ，和Fg,缺乏,PT,APTT,如何监测抗凝剂？,口服抗凝剂 维生素K拮抗剂（华法林）,肝素,PT：1.5-2.0倍 INR：1.5-2.5,1.5-2.5倍,原理： 标准化凝血酶 纤维蛋白原 纤维蛋白 参考值：1618秒。±3秒以上有意义。 临床应用： 延长 低（异常）纤维蛋白原血症；纤溶亢进；溶栓治疗；肝素治疗；肝素类抗凝物增多 缩短 巨球蛋白血症；混入组织液 标本4中放置过久,凝血酶时间（thrombin time，TT）,纤维蛋白溶解系统,纤维蛋白原 凝血酶 非交联纤维蛋白 因子XIII 交联纤维蛋白 纤溶酶 FPA1-16 纤溶酶 纤溶酶 FPB1-14 X，Y，D，E X，Y，D，E X，Y，D，E B1-42 B15-42 D-D二聚体 A，B，C，H A，B，C，H DD-E复合物,TT是常用的纤溶活性筛查试验。 溶栓治疗监测时，TT控制在健康对照的1.52.5倍,方法评价： 常用的纤溶活性筛查试验 监测链激酶、尿激酶溶栓治疗 筛查低（异常）纤维蛋白原血症 筛查类肝素物质增多,TT,甲苯胺蓝纠正试验 原理：甲苯胺蓝可中和肝素及类肝素抗凝物质 参考值：延长的TT缩短5秒以上或更多时， 提示肝素样物质或肝素增多,纤维蛋白原检测 凝血酶法：在被检血浆中加入足量凝血酶使其凝固，血浆凝固时间与纤维蛋白原浓度成负相关。 参考值：24g/L 临床意义：增高：急性时相反应、血栓前状态 减低：DIC晚期、低（无）纤维蛋白原血症、异常纤维蛋白原血症 作为溶栓治疗监测指标：使用链激酶、尿激酶等溶栓治疗时，不应低于1.2-1.5g/L，若低于1.0g/L，有出血风险。,37,（一）凝血酶原时间（PT） （二）活化部分凝血活酶时间（APTT） （三）凝血酶时间（TT） （四）血浆纤维蛋白原（FIB）,二、二期止血的筛查试验,凝血四项,血浆因子II、V、VII、X促凝活性检测 外源性凝血因子缺乏的定量试验 原理: 受检血浆分别加入乏II、V、VII、X基质血浆后，加入兔脑粉和钙溶液后作PT测试，以各自的标准曲线为依据，分别计算受检血浆的因子促凝活性。 抗原含量测定（火箭免疫电泳）,39,临床评价： 外源凝血系统筛选试验异常 增高 见于血栓前状态和血栓性疾病 减低 见于肝病变（FVII、）、维生素K缺乏（FVII、） 、DIC（FV、 、 ）和先天性凝血因子缺乏等 外科手术风险判断（ II、VII、X 60%，V35%）,40,血浆因子II、V、VII、X促凝活性检测,血浆因子VIII、IX、XI、XII促凝活性检测 原理：受检血浆分别加入乏VIII、IX、XI、XII基质血浆后，作APTT测试，以各自的标准曲线为依据，分别计算受检血浆的因子促凝活性。 抗原含量测定（火箭免疫电泳） 临床评价： 内源筛选基础上的凝血因子促凝活性 血友病评价和分型的重要指标,41,组织因子测定,临床意义：严重感染所致内毒素血症、严重创伤、休克、DIC、M3等TF含量或活性增加。,42,抗原含量和凝血活性测定,凝血因子,肝脏疾病、SLE、DIC等引起获得性缺乏 先天性缺乏,F,Fa,Fa,F1+2(血浆凝血酶原片段1+2),凝血活化分子标志物,（一）血浆凝血酶原片段1+2（凝血活化特异敏感标志物） 增高见于血栓前状态与血栓性疾病、急性心肌梗死、易栓症与静脉血栓形成 抗凝治疗有效后，由原来高浓度降到正常水平,43,Fg,FM,Fa,FPA(血浆纤维蛋白肽A),FPB,凝血活化分子标志物,（二）血浆纤维蛋白肽A 增高 血栓前状态与血栓性疾病 对DIC诊断灵敏度较高，早期DIC诊断试验之一,44,凝血活化分子标志物,（三）血浆凝血酶-抗凝血酶复合物 用于早期诊断DIC 血栓前状态轻度升高、血栓性疾病显著升高 溶栓治疗有效时，水平下降,Fa +,AT,TAT(凝血酶-抗凝血酶复合物),45,PT、APTT、TT、FIB,二期止血的筛查试验,凝血四项,血浆因子II、V、VII、X促凝活性检测,血浆因子VIII、IX、XI、XII促凝活性检测,组织因子测定,凝血因子,凝血活化分子标志物,血浆凝血酶原片段1+2,血浆纤维蛋白肽A,血浆凝血酶-抗凝血酶复合物,思考题？,何为一期止血缺陷？简述其筛检试验（BT、PLT）的临床应用。 二期止血筛查试验？PT、APTT、TT检测原理、临床意义、药物监测？ PT报告方式？,Thanks,是在原发性疾病（严重感染、创伤、广泛性手术、恶性肿瘤等）基础上。继发于血管内凝血的纤溶亢进，主要见于弥散性血管内凝血。,原发性纤溶（原发性纤维蛋白溶解）,是在无异常凝血的情况下，2抗纤溶酶缺乏、纤溶酶原活化抑制物-1缺乏、纤溶酶原激活剂增多而导致纤溶活性增强，导致纤维蛋白过早、过度破坏和(或)纤维蛋白原等凝血因子大量降解并引起出血。,继发性纤维蛋白溶解症（继发性纤溶）,弥散性血管内凝血 （disseminated intravascular coagulation,DIC）,是由于多种病因（感染、创伤、手术、肿瘤等）所引起的血栓与止血病理生