临床血液学检验技术实验十二PT、APTT和血小板功能
实验十二,血小板功能检测（示教） PT APTT,目的要求,掌握血小板黏附实验 血小板聚集实验 PT APTT 原理、方法、注意事项、临床意义,血小板功能检验,血小板黏附试验 血小板聚集试验,全血的PLT不能小于50×109/L,血小板黏附试验,在体内血小板具有粘附于被暴露的胶原组织和相互之间粘附的机能 在体外血小板可粘附于带负电荷的非生理性表面（如金属、玻璃）的机能，同时也反应血小板的聚集功能。,原理,血小板黏附试验,一定量的血液,一定时间之后，一定量的血小板粘附在容器内表面,利用粘附前后的血小板之差，计算粘附率,0.8ml，粘附15min,用硅化试管采集1：9枸橼酸钠抗凝血7.2ml,用硅化移液管吸取0.8ml混匀的抗凝血至小粘附瓶内,将粘附瓶内的抗凝血用血球计数仪计数粘附前血小板数目,将粘附瓶塞入粘附仪器内的橡皮塞，并做平衡,打开粘附仪电源，按START键,仪器进入旋转粘附,测试完毕，取出粘附瓶,再同前计数粘附后的血小板数目,计算粘附率,记录结果,操作步骤,注意事项,采血过程必须顺利，避免产生气泡，溶血和凝块 器材必须标准化，使用的试管，滴管必须硅化处理，或用塑料制品。 检测前1周，禁止服用阿司匹林类可以影响血小板的药物 血小板的计数要准确，宜作2-3次取平均值。,参考范围,53.9%-71.1% 临床意义： 粘附率增高：见于高凝状态和血栓性疾病，如心梗，心绞痛，动脉硬化等。 粘附率减低：见于vWD、巨血小板综合征，血小板无力症等。,血小板聚集试验,原理： 在体内，血管壁受损后血小板立即粘附于受损血管壁创面处，继而发生聚集反应形成白色血栓。 在体外，将血小板聚集诱导剂加入富含血小板的血浆中通过血小板聚集仪观察血小板聚集反应，称血小板聚集功能试验。,PRP（platelet rich plasm ) 800-1000rpm,10min PPP（platelet poor plasm ) 3000rpm,15min 以PPP调零，在PRP中加入血小板聚集诱导剂后，用一涂硅小磁棒粒进行搅拌，血小板逐渐聚集，透光度增加，通过记录仪描绘出血小板聚集的曲线，分析血小板的聚集能力。,开启血小板凝聚仪，将诱聚剂放入仪器预热槽内进行温浴,用硅化移液管吸0.3mlPRP加入聚集反应杯中，并加入磁棒,用普通移液管准确吸0.3mlPPP加入聚集反应杯中，不加入磁棒,将PPP管放入反应通道内，选择血小板聚集试验，按ENTER进行调零,调零结束后取出PPP管,将PRP放入刚才的反应通道内，按ENTER，仪器读取PRP的浊度,当屏幕显示ADP时，准确加入30ul诱聚剂，同时按ENTER,仪器进行血小板聚集的测试,测试结束，屏幕将显示最大聚集率%,操作步骤,注意事项,采血时应一针见血，并避免产生气泡和溶血。止血带不得扎时间过长 采血当天应禁食牛奶、豆浆类脂肪性食物。 实验在采血后3小时内完成。 采血前1周内不应服用抑制血小板聚集的药物：如阿司匹林、潘生丁、肝素、双香豆素等 所用器具均必须硅化处理 PRP调至血小板数目为220×109/L，PPP调至血小板数目为20×109/L以下,参考范围,ADP-62.7±16.1 Adr-67.8±17.8 胶原-71.7±19.3 瑞斯托酶素-87.5±11.4,临床意义,增高：反映血小板聚集功能增强，见于血栓前状态和血栓性疾病，如心梗，心绞痛，糖尿病，脑血管病变 减低：反映血小板聚集功能减低，见于血小板无力症，巨大血小板综合征，尿毒症，肝硬化，低（无）纤维蛋白原症等,PT APTT TT FIB,凝血四项,A P T T,凝 血 活 酶 生 成 期,P T,组织因子(兔脑、胎盘、肺组织浸液) Ca2+ 血浆 参考值 QUIK法：11-13s,血浆凝血酶原时间 （Prothrombin time, PT）,【原理】,Principle of PT,in Blood,in Plasma,PT Reagent,Fibrin,Extrinsic System,Measure Clotting Time,without,Tissue Factor,Calcium (Ca2+),without,without,Normal Range 10-14 sec,37度,Ca2+, PL,Ca2+, PL,Blood Sampling,Trisodium Citrate,操作,1. 枸橼酸钠1:9抗凝血2ml 2. 3000转/分离心15分钟 3. PT试剂取出进行37温浴 4. 将血浆 100ul 加入试管内温浴1分钟 5. 加入 200ul 已温浴的PT试剂，同时启动秒表不断轻轻倾斜试管，记录凝固时间 6. 重复2次取均值报告,意 义,外源性凝血系统的筛选试验 比正常参考值延长或缩短3秒以上有临床意义。 （1）延长： 1因子II、V、VII、X 单独或联合缺乏 2严重纤维蛋白原降低（尤其1g/L时） 3Vitk缺乏症、严重肝病 4纤溶亢进（如DIC后期） 5循环中抗凝物质增加，如 SLE,（2）缩短：,高凝状态（hypercoagulation state） 血栓性疾病 口服避孕药,（3）口服抗凝剂的首选监测指标,INR为正常对照的1.5-2.5倍,PT的报告方式,时间（S） 百分比活性（%） PT比值（PTR）= 国际标准化比值（INR）= PTRISI,International Normalized Ratio International Sensitivity Index,注意事项,抗凝比例要准确，血量±不得超过0.2ml 离心速度及时间必须到位，以除去血小板的干扰 采血后2小时内完成（与不稳定） 标本不得有溶血 (5)手工操作时，凝血酶原时间的终点计算以出现混浊的初期凝固为准。 (6)测定温度36.538.5，过低或过高均使PT延长。 (7)如遇标本结果异常应密切联系临床,原 理 Ca2+ XII 因子活化剂磷脂（替代PF3） 血浆 参考值 （37±3.3）秒 正常对照10s以上者 延长 正常对照5s以上者 缩短,活化部分凝血活酶时间,（activated partial thromboplastin time,APTT）,Principle of APTT,in Blood,in Plasma,without,without,without,APTT Reagent,Activator,PL,Intrinsic System,Measure Clotting Time,Ellagic acid, silica etc.,Calcium (Ca2+),Normal Range 20-40 sec,CaCl2,Phospholipid,Fibrin,37度,Ca2+, PL,Ca2+, PL,Blood Sampling,Trisodium Citrate,操作,1. 枸橼酸钠1:9抗凝血2ml 2. 3000转/分离心15分钟 3. 氯化钙试剂取出进行37温浴，APTT试剂常温放置 4. 将血浆 100ul 加入试管内温浴1分钟 5. 加入 100ulAPTT 试剂，同时启动秒表，激活3分钟 6. 加入 100ul 氯化钙（20mmol/L），同时启动秒表 不断轻轻倾斜试管，记录凝固时间，重复2次取均值,（1）延长： 1. 主要检测内源性途径的凝血因子缺陷 （如、/血友病甲、乙） 2. 其次检测第二、三阶段因子，如凝血 酶原、纤维蛋白原 3. 严重肝病、DIC. 4. 循环中抗凝物质增多,意 义,（2）缩短：,高凝状态(hypercoagulation state) （脑血栓、心梗、DIC高凝期）,（3）普通肝素应用的首选监测指标,维持正常对照1.5 2.5倍,注意事项,不同的部分凝血活酶、不同的活化剂和不同的激活时间，对各种因子缺陷、对肝素和狼疮抗凝物质的敏感性差异很大，应根据不同的检测目的选择相应敏感的凝血活酶或活化剂。,0.109mol/L枸橼酸钠抗凝 1. HCT0.2 0.5(20%-50%)时：抗凝剂和血按1:9抗凝 2.HCT0.5(50%)时： 抗凝剂用量调整公式 抗凝剂（ml）=(100-HCT)×血液量（ml）×0.00185 血液量（ml）=抗凝剂（ml）/(100-HCT) ×0.00185,抗凝剂使用,作业,书写PT、APTT测定实验报告 实验原理 方法 临床意义 注意事项,血栓与止血知识汇总,基础知识：血管壁（vWF），血小板止血机制，凝血机制，抗凝与纤溶 实验：一期止血（BT与PLT）与二期止血（PT与APTT）临床意义。PT结果表达。血管损伤标志。FDP、D-二聚体与3P临床意义。影响血液流动性的因素。 疾病：出血性疾病分类，出凝血筛查试验初步分析，学会课堂上介绍疾病的结果分析,出血性疾病的分类 血管壁功能异常 遗传性（毛细血管扩张症、家族、单纯性） 获得性（过敏性紫癜、血管炎、免疫性） 数量 遗传性 获得性 Aa 、巨核、免疫性、 ITP、DIC 血小板异常 数量 （ET，CML） 功能异常（GT、BS、颗粒性） 凝血功能障碍 遗传性（血友病、 VWD、其他凝血因子缺乏） 获得性（VK缺乏，肝脏病，DIC、药物） 病理性抗凝物质 凝血因子抑制物 肝素样抗凝物质；狼疮样抗凝物 纤溶亢进 遗传性 t-PA/u-PA，PAI缺乏，抗纤溶酶 获得性（DIC，血栓症）,出凝血筛查试验初步分析（分类）,血小板功能异常 / 血管异常 / FXIII缺陷,血小板数量/血小板功能异常,内源性 凝血途径异常 （血友病、 肝素抗凝、 内凝血途径的因子抑制物等）,外源性 凝血途径异常 (肝脏疾病早期、维生素K缺乏、口服抗凝剂、FVII缺陷等),共同途径异常（FX缺陷、FV缺陷、存在抗凝物质等）,复合因素：DIC、严重肝脏病等,有出血表现,纤维蛋白原缺陷、原发纤溶等,1. 枸橼酸钠1:9抗凝血2ml 2. 3000转/分离心15分钟 3. PT试剂取出进行37温浴 4. 将血浆 100ul 加入试管内温浴1分钟 5. 加入 200ul 已温浴的PT试剂，同时启动秒表不断轻轻倾斜试管，记录凝固时间 6. 重复2次取均值报告,1. 枸橼酸钠1:9抗凝血2ml 2. 3000转/分离心15分钟 3. 氯化钙试剂取出进行37温浴，APTT试剂常温放置 4. 将血浆 100ul 加入试管内温浴1分钟 5. 加入 100ulAPTT 试剂，同时启动秒表，激活3分钟 6. 加入 100ul 氯化钙（20mmol/L），同时启动秒表 不断轻轻倾斜试管，记录凝固时间，重复2次取均值,PT,APTT,
