临床血液学检验技术实验十二PT、APTT和血小板功能
37页1、实验十二,血小板功能检测(示教) PT APTT,目的要求,掌握血小板黏附实验 血小板聚集实验 PT APTT 原理、方法、注意事项、临床意义,血小板功能检验,血小板黏附试验 血小板聚集试验,全血的PLT不能小于50109/L,血小板黏附试验,在体内血小板具有粘附于被暴露的胶原组织和相互之间粘附的机能 在体外血小板可粘附于带负电荷的非生理性表面(如金属、玻璃)的机能,同时也反应血小板的聚集功能。,原理,血小板黏附试验,一定量的血液,一定时间之后,一定量的血小板粘附在容器内表面,利用粘附前后的血小板之差,计算粘附率,0.8ml,粘附15min,用硅化试管采集1:9枸橼酸钠抗凝血7.2ml,用硅化移液管吸取0.8ml混匀的抗凝血至小粘附瓶内,将粘附瓶内的抗凝血用血球计数仪计数粘附前血小板数目,将粘附瓶塞入粘附仪器内的橡皮塞,并做平衡,打开粘附仪电源,按START键,仪器进入旋转粘附,测试完毕,取出粘附瓶,再同前计数粘附后的血小板数目,计算粘附率,记录结果,操作步骤,注意事项,采血过程必须顺利,避免产生气泡,溶血和凝块 器材必须标准化,使用的试管,滴管必须硅化处理,或用塑料制品。 检测前1周
2、,禁止服用阿司匹林类可以影响血小板的药物 血小板的计数要准确,宜作2-3次取平均值。,参考范围,53.9%-71.1% 临床意义: 粘附率增高:见于高凝状态和血栓性疾病,如心梗,心绞痛,动脉硬化等。 粘附率减低:见于vWD、巨血小板综合征,血小板无力症等。,血小板聚集试验,原理: 在体内,血管壁受损后血小板立即粘附于受损血管壁创面处,继而发生聚集反应形成白色血栓。 在体外,将血小板聚集诱导剂加入富含血小板的血浆中通过血小板聚集仪观察血小板聚集反应,称血小板聚集功能试验。,PRP(platelet rich plasm ) 800-1000rpm,10min PPP(platelet poor plasm ) 3000rpm,15min 以PPP调零,在PRP中加入血小板聚集诱导剂后,用一涂硅小磁棒粒进行搅拌,血小板逐渐聚集,透光度增加,通过记录仪描绘出血小板聚集的曲线,分析血小板的聚集能力。,开启血小板凝聚仪,将诱聚剂放入仪器预热槽内进行温浴,用硅化移液管吸0.3mlPRP加入聚集反应杯中,并加入磁棒,用普通移液管准确吸0.3mlPPP加入聚集反应杯中,不加入磁棒,将PPP管放入反应通
3、道内,选择血小板聚集试验,按ENTER进行调零,调零结束后取出PPP管,将PRP放入刚才的反应通道内,按ENTER,仪器读取PRP的浊度,当屏幕显示ADP时,准确加入30ul诱聚剂,同时按ENTER,仪器进行血小板聚集的测试,测试结束,屏幕将显示最大聚集率%,操作步骤,注意事项,采血时应一针见血,并避免产生气泡和溶血。止血带不得扎时间过长 采血当天应禁食牛奶、豆浆类脂肪性食物。 实验在采血后3小时内完成。 采血前1周内不应服用抑制血小板聚集的药物:如阿司匹林、潘生丁、肝素、双香豆素等 所用器具均必须硅化处理 PRP调至血小板数目为220109/L,PPP调至血小板数目为20109/L以下,参考范围,ADP-62.716.1 Adr-67.817.8 胶原-71.719.3 瑞斯托酶素-87.511.4,临床意义,增高:反映血小板聚集功能增强,见于血栓前状态和血栓性疾病,如心梗,心绞痛,糖尿病,脑血管病变 减低:反映血小板聚集功能减低,见于血小板无力症,巨大血小板综合征,尿毒症,肝硬化,低(无)纤维蛋白原症等,PT APTT TT FIB,凝血四项,A P T T,凝 血 活 酶 生 成
4、 期,P T,组织因子(兔脑、胎盘、肺组织浸液) Ca2+ 血浆 参考值 QUIK法:11-13s,血浆凝血酶原时间 (Prothrombin time, PT),【原理】,Principle of PT,in Blood,in Plasma,PT Reagent,Fibrin,Extrinsic System,Measure Clotting Time,without,Tissue Factor,Calcium (Ca2+),without,without,Normal Range 10-14 sec,37度,Ca2+, PL,Ca2+, PL,Blood Sampling,Trisodium Citrate,操作,1. 枸橼酸钠1:9抗凝血2ml 2. 3000转/分离心15分钟 3. PT试剂取出进行37温浴 4. 将血浆 100ul 加入试管内温浴1分钟 5. 加入 200ul 已温浴的PT试剂,同时启动秒表不断轻轻倾斜试管,记录凝固时间 6. 重复2次取均值报告,意 义,外源性凝血系统的筛选试验 比正常参考值延长或缩短3秒以上有临床意义。 (1)延长: 1因子II、V、VII
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