临床血液学检验SOP_检验科SOP_09

月亮县中医院项 目文件编号：YCXZYYJYK_SOP_09页码：第- 69 -页，共69页检验科检验科血液分析SOP手册版本：第3版，第1次修订生效日期：20180101检验科血液分析SOP手册目录编 号名 称页 面SOP_09-1血液涂片检查标准操作程序3-10SOP_09-2骨髓检查标准操作程序11-14SOP_09-3溶血性贫血检查标准操作程序15-19SOP_09-4白细胞手工计数检查标准操作程序20-20SOP_09-5红细胞手工计数检查标准操作程序21-21SOP_09-6嗜酸粒细胞手工计数（伊红酚法）标准操作程序22-22SOP_09-7网织红细胞手工计数标准操作程序23-23SOP_09-8血小板手工计数检查标准操作程序24-24SOP_09-9血沉分析标准操作程序25-25SOP_09-10血常规检验室内质控的标准操作规程26-28SOP_09-11血常规检验室间质评（EQA）的标准操作规程29-30SOP_09-12临床凝血检验室内质控的标准操作规程31-33SOP_09-13临床凝血检验室间质评（EQA）的标准操作规程34-35SOP_09-14迈瑞BC3000PLUS三分类血液分析仪标准操作规程36-42SOP_09-15Symex pocH-80i型三分类血液分析仪标准操作规程43-49SOP_09-16SYSMEXCA50型血凝分析仪标准操作程序50-51SOP_09-17SYSMEXCA50型血凝分析仪项目标准操作程序52-56SOP_09-18雅培RUBY五分类血球分析仪标准操作程序57-61附件1国际血液学复检专家组推荐的41条血常规复检规则62-66文件审批者：发布日期：操作者从事本项工作前，必须认真学习并掌握本手册的内容，严格按照操作规程操作！学习者:休订书册与增补程序内容与日期：学习者：休订书册与增补程序内容与日期：学习者：SOP_09-1 血液涂片检查标准操作程序一、目的：统一项目操作规程，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。二、适用范围：血液寄生虫检验。三、操作人员：检验科授权工作人员。四、操作步骤：1 原理：血液制成细胞分布均匀的膜涂片或厚涂片经溶血后，运用复合染料染色，观察细胞形态、结构、内容物等，以鉴别、判断血液中的异常细胞和寄生虫。2 试剂：由台湾贝索公司提供。2.1 瑞氏-姬姆萨复合染色液：2.2 碱性亚甲兰染液：2.3 煌焦油蓝生理盐水溶液：3 方法：3.1 红细胞检查：正常红细胞呈圆形，中央略凹陷，大小较为一致，直径为 69m。3.1.1 大小异常红细胞：各种贫血时，红细胞可出现大小不一，凡直径>10m者称大红细；>15m者称巨红细胞，常见于巨幼细胞性贫血、肝脏疾病等；直径<6m者称为小红细胞，多见于缺铁性贫血等疾病。3.1.2 形态异常红细胞：3.1.2.1 球形红细胞：红细胞直径通常<6m，厚度增加，通常>2.6m，因而红细胞呈小圆球形，细胞中心区血红蛋白含量较正常红细胞多，常见于：遗传性球形细胞增多症；自身免疫性溶血性贫血；异常血红蛋白病(HbS及HbC病等)。3.1.2.2 椭圆形红细胞：红细胞呈椭圆形，横径缩短，长径增大，有时可呈畸形。正常人血液中也可见到，但最多不超过15%。增多见于：遗传性椭圆形细胞增多症，一般要高于25%50%才有诊断价值；大细胞性贫血，可达25%；其他各类贫血都可有不同程度的增多。3.1.2.3 靶形红细胞：比正常红细胞扁薄，中心有少许血红蛋白，部分可与周围的血红蛋白连接，边缘部染色深，故呈靶状。主要见于：地中海贫血；严重缺铁性贫血；一些血红蛋白病(血红蛋白C、D、E、S病)；肝病、脾切除后及阻塞性黄疸等。3.1.2.4 镰形红细胞：细胞狭长似镰刀，也可呈麦粒状或冬青叶样，主要见于遗传性镰形红细胞增多症。3.1.2.5 口形红细胞：红细胞淡染区呈裂口状狭孔。正常<4%。增高见于：口形细胞增多症；急性乙醇中毒。3.1.2.6 棘形红细胞：是一种带刺状的红细胞，刺呈针刺状或尖刺状，见于：棘细胞增多症(遗传性血浆-脂蛋白缺乏症)，可高达70%80%；严重肝病或制片不当。3.1.2.7 皱缩红细胞：红细胞表面有圆形棘刺样突起，可见于干燥太慢的血片，也可见于急性铅中毒、尿毒症等病人的血片上。3.1.2.8 锯齿细胞：也称刺毛细胞，形态和皱缩细胞相似。主要见于尿毒症、微血管病性溶血性贫血、丙酮酸激酶缺乏症、阵发性睡眠性血红蛋白尿症等。3.1.2.9 裂片细胞：指红细胞碎片，包括盔形红细胞等，多见于DIC、微血管病性溶血性贫血和心原性溶血性贫血等红细胞破碎综合征。其他也见于化学中毒、肾功能不全、血栓性血小板减少性紫癜等。3.1.3 染色异常：3.1.3.1 着色过浅：红细胞中心淡染区扩大，多见于缺铁性、地中海贫血及其他血红蛋白病。3.1.3.2 着色过深：中心淡染区不见，着色较深，见于先天性溶血性贫血及大细胞性贫血。3.1.3.36 嗜多色性红细胞：红细胞染成灰蓝色、灰红色、淡灰色，较正常红细胞稍大。这是一种尚未完全成熟的红细胞，多染性物质是核糖体，随着细胞的成熟而逐渐消失，主要见于增生性贫血。3.1.4 结构异常：3.1.4.1 嗜碱性点彩红细胞：(1)按常法制成薄血片，自然干燥后，用甲醇固定3min。(2)用碱性亚甲基蓝染液染色12min，水洗待干。(3)用油镜计数1000个红细胞中嗜碱性点彩红细胞数，以百分率报告。附注： 用碱性亚甲基蓝液染色后，红细胞呈浅蓝绿色，嗜碱性点彩呈深蓝色。也可用瑞氏染色，嗜碱性点彩呈蓝黑色。由于点彩红细胞分布不匀，必要时扩大计数红细胞数。 参考值<0.01%(<1OO106RBC)。增高：铅、汞、银、铋等金属中毒及硝基苯、苯胺等中毒时显著增高；溶血性贫血、巨幼细胞性贫血、恶性贫血、恶性肿瘤等可增高。3.1.4.2 卡波环：成熟红细胞胞浆内有染成紫红色的细线状环，呈圆形或8字形，可能是残留核膜所致，见于恶性贫血、溶血性贫血、铅中毒等。3.1.4.3 豪-周小体和核碎块：成熟红细胞中含有紫红色圆形小体，大小不等，数量不一，可能是残留的核染色质微粒。见于增生性贫血、脾切除后、巨幼细胞性贫血、恶性贫血等。3.1.4.4 有核红细胞：溶血性贫血、急慢性白血病、红白血病、髓外造血及严重缺氧等常见。3.1.5 网织红细胞百分数：(1)于小试管中滴加1滴煌焦油蓝生理盐水溶液或煌焦油蓝ACD溶液。(2)加入末梢血2滴于上述试管中，混匀。(3)静置1520min后，取用1滴制成薄片。(4)油镜下检查1000个红细胞中网织红细胞数，以百分率或绝对值报告。附注： 活体染色时间不能过短，室温低时，放37温箱。 最好制片2张，每张计数500个红细胞，避免分布不均引起的误差。涂片要薄而均匀，不使红细胞重叠。 为计数方便，可于目镜中放一个中间有孔之硬纸片，缩小视野，便于计数。 因操作误差大，不宜用玻片直接染色法。 参考值成人：O.005O015(O.5%1.5%)；新生儿：O.03O.06(3%6%)增加：表示骨髓造血功能旺盛，各型贫血均可增多，溶血性贫血增加尤为显著，恶性贫血或缺铁性贫血应用维生素B12或供铁质后显著增多，表示有疗效。减少：再生障碍性贫血。 网织红细胞绝对值计算：网织红细胞绝对值=（网织红细胞% ´ 红细胞/l）/100 仅用网织红细胞相对值或绝对值表达还不够确切。若贫血时骨髓生成红细胞增多，大量尚未成熟红细胞释放入血，而这些网织红细胞在外周成熟时间需2天，而正常生理情况下骨髓释放到外周的网织红细胞仅一天后其胞质中RNA即消失。为此Finch提出在贫血时用网织红细胞生成指数(reticulocyte production index，RPI)报告，它代表网织红细胞的生成相当于正常人的多少倍。3.2 白细胞检查：3.2.1 白细胞分类计数：(1)采血后推制厚薄适宜的血膜片，血膜应呈舌状，头、体、尾清晰可分。(2)推好的血膜在空气中晃动，以促使快干。天气寒冷或潮湿时，应置于37温箱中保温促干，以免细胞变形缩小。(3)染色：瑞氏-姬姆萨染色法或快速染色法。(4)选择涂片的体尾交界处染色良好的区域，在油镜下计数100个白细胞，按其形态特征进行分类计数，求出各类细胞所占比值(百分率)。附注： 要避免重复计数，玻片应由血膜边缘向中央依次上下呈曲线移动。 白细胞总数超过20×109L，应计数200个细胞。明显减少的血片，可检查多张血片。 快速染色法无法确定的细胞，应该用瑞氏-姬姆萨染色复查，以免漏诊血液病。 白细胞形态变化较大，应经常由高年资检验人员进行核实，以减少误差。3.2.2 异常白细胞形态：外周血象中，除各类幼稚细胞外，常能见到细胞形态上的异常变化。3.2.2.1 中性粒细胞：(1)核象变化：反映中性粒细胞的成熟程度。正常血象中有少量杆状核细胞出现，它与分叶核细胞之间的比值约占1：13。 核左移：是指杆状核细胞增多，常见感染。极度左移，多见于类白血病反应或白血病。伴白细胞总数增高的核左移：称再生性左移，常见于急性化脓性感染(大叶性肺炎等)。白细胞总数不增加或减低的核左移：称退行性左移，常见于严重感染、机体抵抗力低下。 核右移：是指不仅分叶核粒细胞增多，且分叶过多，常见4叶、5叶(正常时多分3叶)，这是造血功能衰退或造血物质缺乏的表现。常见于营养性巨幼细胞性贫血和使用抗代谢药物后。此外，在疾病进行期突然出现核象右移，表示预后不良。(2)毒性变化：严重感染、恶性肿瘤、各种重金属或药物中毒、大面积烧伤等症时，中性粒细胞可出现形态变异。 细胞大小不均：为骨髓内幼稚粒细胞发生不规则的分裂增殖所致。 毒性颗粒：胞浆中部分或全部颗粒变粗，着色深，颗粒的分布及大小不等。可能为中性颗粒成熟过程中发生变性所致。 空泡：可在胞浆或核中出现，常为多个，被认为是细胞脂肪变性后未能着色所致。 Dohle体：胞浆内出现嗜碱性点、线、梨形或云雾状物质，可能为核浆发育不平衡所致，为细胞严重毒性变的表现。 核棘突：胞核有各种形态的芽状突出，临床意义尚不明确，可能与中毒、癌转移、严重放射损伤等有关。(3)退行性变：表现为胞体肿大，结构模糊，边缘不清。胞核可呈固缩、肿胀、破碎、溶解等变化，退行变可以是细胞衰老死亡的表现。3.2.2 2 淋巴细胞：淋巴细胞形态变异在多种疾病如各种病毒感染、传染性单核细胞增多症最为常见。此外，疟疾、过敏性疾病、淋巴结炎等亦可见，统称为异型淋巴细胞。传染性单核细胞增多症患者血液中常可出现3种异型淋巴细胞，即空泡型、不规则型和幼稚型。3.3 红斑狼疮细胞检查：红斑狼疮患者血液内的红斑狼疮因子为一种抗核蛋白的IgG抗体，它作用于细胞核抗原决定簇，并使细胞核胀大，失去原