临床免疫学检验知识点
临床免疫学检验1、免疫：是机体识别和排斥抗原性异物的一种生理功能2、免疫防御（对外）；免疫自稳（防自身免疫病）；免疫监视（防肿瘤）。3、中枢免疫器官：骨髓、胸腺；外周免疫器官：淋巴结、脾脏（最大）、黏膜相关淋巴组织4、B细胞：通过识别膜免疫球蛋白来结合抗原，介导体液免疫；B细胞受体=BCR=mIg表面标志：膜免疫球蛋白（SmIg）、Fc受体、补体受体、EB病毒受体和小鼠红细胞受体。成熟B细胞：CD19CD20CD21CD22（成熟B细胞的mIg主要为mIgM和mIgD）同时检测CD5分子，可分为B1细胞和B2细胞。B细胞功能检测方法：溶血空斑形成试验（体液免疫功能）。5、T细胞：介导细胞免疫。共同表面标志是CD3（多链糖蛋白）；辅助T细胞的标志是CD4;杀伤T细胞的标志是CD&T细胞受体=TCR.Fl，T细胞和NK细胞的共同表面标志是CD2（绵羊红细胞受体）；CD讣CD什CD8-=辅助性T细胞（Th）CD讣CD4-CD计=细胞毒性T细胞（Tc或CTD（T细胞介导的细胞毒试验）CD务CD2计=调节性T细胞（Tr或Treg）T细胞功能检测：植物血凝素（PHA）刀豆素（CONA刺激T细胞增殖。增殖试验有：形态法、核素法。T细胞亚群的分离：亲和板结合分离法，磁性微球分离法，荧光激活细胞分离仪分离法*E花环试验是通过检测SRBCM体而对T细胞进行计数的一种试验；6、NK细胞：具有细胞介导的细胞毒作用。直接杀伤靶细胞（肿瘤细胞和病毒感染的细胞）表面标志：CD16（ADCC、CD56测定人NK细胞活性的靶细胞多用K562细胞株，而测定小鼠NK细胞活性则常采用YAC-1细胞株。7、吞噬细胞包括：单核-吞噬细胞系统（MPS表面标志CD14包括骨髓内的前单核细胞、外周血中的单核细胞和组织内的巨噬细胞）和中性粒细胞。（表达MHQ类分子）8、人成熟树突状细胞（DQ（专职抗原呈递功能）：表面标志为CD1aCD11c和CD839、免疫球蛋白可分为分泌型（sIg,主要存在于体液中，具有抗体功能）及膜型（mIg,作为抗原受体表达于B细胞表面，称为膜表面免疫球蛋白）10、免疫球蛋白按含量多少排序：IgG>IgA>IgM>IgD>IgE五类（按重链恒定区抗原性（CH排序）免疫球蛋白含量测定：单向环状免疫扩散法、免疫比浊法。11、免疫球蛋白的同种型抗原决定簇位于恒定区（CHCD12、抗体由浆细胞产生。抗体分子上VH和VL（高变区）是抗原结合部位。13、IgG:血清中含量最高的免疫球蛋白（IgG1最高），血液和细胞外液中的主要抗体。也是再次免疫应答的主要抗体，是唯一能通过胎盘的抗体，大多数抗菌抗体、抗病毒抗体是IgG,某些自身抗体及超敏H型抗体是IgG,免疫学检测中第二抗体也以IgG为主。14、IgA:分血清型（单体存在）及分泌型；分泌型IgA（sIgA）为二聚体，性能稳定，主要存在于胃肠道、支气管分泌液、初乳、唾液、泪液中，局部浓度高，是参与黏膜局部免疫的主要抗体。15、IgM:为五聚体，主要存在于血液中，是Ig中分子量最大的（又称巨球蛋白）。个体发育最早合成和分泌的抗体。抗原刺激后体液免疫应答中最先产生的抗体，感染过程中血清IgM水平升高，说明近期感染。新生儿脐血中若IgM增高，提示有宫内感染。16、IgE:为单体结构，正常人血清中含量最低。IgE为亲细胞抗体，介导I型超敏反应。特异性过敏反应和寄生虫早期感染患者血清中可升高。17、补体：具有酶样活性的球蛋白（肝细胞、巨噬细胞产生）；激活途径主要有三种：经典途径（以结合抗原后的IgG或IgM类抗体为主要激活剂（双链DNA,C1C9全部参与）、替代途径（病原微生物细胞壁成分（脂多糖）直接激活补体C3,然后完成C5C9的激活过程）、M3至径（由急性炎症期产生的甘露糖结合凝集素（MBL与病原体结合后启动激活）。18、补体系统中C3含量最多，C2含量最少。19、灭活：加热56C30分钟，补体丧失活性20、补体清除免疫复合物的方式：吞噬调理；免疫粘附；免疫复合物抑制。21、完全抗原=反应原性+免疫原性。半抗原=反应原性（无免疫原性）22、抗原抗体结合力（分子间引力）：静电吸引、范德华力、氢键、疏水作用力（最强）23、抗原抗体反应的四大特点：特异性、可逆性、比例性、阶段性；受反应条件（如温度、pH电解质、抗原抗体比例等）的影响。24、抗体过量一一前带；抗原过量一一后带（钩状效应）25、抗原抗体反应可分为两个阶段：第一阶段为抗原与抗体发生特异性结合的阶段，此阶段反应快，仅需几秒至几分钟，但不出现可见反应；第二阶段为可见反应阶段，此阶段反应慢，往往需要数分钟至数小时。26、颗粒性抗原出现凝集反应。可溶性抗原出现沉淀反应。单价抗原与相应抗体结合不出现沉淀现象。27、木瓜酶水解IgG为2Fab+Fc；胃蛋白酶水解IgG为F（ab）2+nFc。28、最常用于免疫动物的佐剂是弗氏佐剂，弗氏佐剂分为弗氏完全佐剂（弗氏不完全佐剂加卡介苗）和弗氏不完全佐剂两种。29、R（兔子）型抗血清是用家兔及其他动物免疫产生的抗体，抗原抗体反应比例合适范围较宽，适于作诊断试剂。H（马）型抗血清是用马等大动物免疫获得的抗体，抗原抗体反应比例合适范围较窄，一般用作免疫治疗。30、抗血清常见保存条件：2-8C保存；冷冻保存（最常用）；真空干燥保存（5-10年）。31、杂交瘤细胞放入液氮（-196C）前，需要逐步降温。复苏细胞时，从液氮罐内取出冻存管，立即浸入37c水浴。32、凝集反应分为两个阶段：抗原抗体的特异性结合；出现可见的颗粒凝聚。33、直接凝集反应：细菌、螺旋体和红细胞等颗粒性抗原，在适当的电解质（0.85%氯化钠）参与下可直接与相应抗体结合出现凝集。抗原=凝集原，抗体=凝集素。34、玻片凝集试验：主要用于抗原的定性分析，AB0血型的测定。试管凝集试验：肥达氏试验、外斐试验、输血交叉配血试验；35、正向间接血凝反应（PHA:红细胞包被抗原，用以检测抗体。（凝集）反向间接血凝反应（RPHA:红细胞包被抗体，用以检测抗原。（凝集）36、间接血凝抑制试验：可用于检测抗体、自身抗体、变态反应性抗体，也可测定抗原。（不凝集）37、金黄色葡萄球菌A蛋白（SPA-协同凝集反应（反向间接凝集）38、血凝试验（载体为绵羊、家兔、鸡的红细胞及O型人红细胞）可在微量滴定板或试管中进行，将标本倍比稀释，一般为1:64,同时设不含标本的稀释液为对照孔。凡红细胞沉积于孔底，集中呈一圆点的为不凝集。如红细胞凝集，则分布于孔底周围。39、胶乳凝集试验（间接凝集），所用载体为聚苯乙烯胶乳；明胶凝集试验（间接）将病毒抗原或重组抗原吸附于粉红色明胶颗粒：HIV-1抗体和抗精子抗体检测40、抗球蛋白试验，又称Coombs试验，是检测抗红细胞不完全抗体的一种很有用的方法。包括直接Coombs试验（检测红细胞上的不完全抗体）和间接Coombs试验（游离在血清中的不完全抗体）41、沉淀反应分两个阶段：第一阶段为抗原抗体发生特异性结合，几秒到几十秒即可完成，出现可溶性小的复合物，肉眼不可见。第二阶段为形成可见的免疫复合物，约需几十分钟到数小时才能完成，如沉淀线、沉淀环。絮状沉淀试验：抗原抗体溶液在电解质的存在下结合，形成絮状沉淀物，这种絮状沉淀受抗原和抗体比例的直接影响，因此常用来作为测定抗原抗体反应最适比例的方法。42、免疫比浊：最适pH为6.58.5,磷酸盐缓冲液。（R型抗体，增浊剂如聚乙二醇（PEG、吐温-20）。适合于大批量标本的检测。当反应液中抗体过量时，IC的形成随着抗原递增而增加，至抗原、抗体最适比例处达最高峰，这就是经典的海德堡曲线理论。当抗原过量时，形成的IC（免疫复合物）分子小，而且会发生再解离，使浊度反而下降，光散射亦减少，这就是高剂量钩状效应。43、单向扩散试验是在琼脂内混入抗体，测抗原。Mancini曲线适用大分子抗原和长时间扩散（48小时）的结果，沉淀环直径的平方与抗原浓度呈线性关系。Fahey曲线适用于小分子抗原和较短时间扩散的结果处理，用半对数值画线，浓度对数与扩散环直径呈线性关系。双向扩散试验是对抗原或抗体进行定性分析。沉淀线如果靠近抗原孔，则表示抗体含量较大沉淀线如果靠近抗体孔，则表示抗原含量较大。不出现沉淀线则表明无对应的抗体或抗原或者抗原过量。* 分子量小者扩散快，反之则较慢。由于慢者扩散圈小，局部浓度则较大，形成的沉淀线弯向分子量大的一方。如果两者分子量大致相等，则形成直线。* 两条沉淀线互相吻合相连，表明抗体与两个抗原中的相同表位结合而沉淀，两个抗原相同沉淀线呈部分相切，说明两个抗原之间有部分相同。两条沉淀线交叉而过，说明两个抗原完全不同。* 出现沉淀线最高的抗体稀释度为该抗体的效价。* 出现一条沉淀线说明待测抗原或抗体纯。出现多条沉淀线说明不纯。44、对流免疫电泳（双向免疫扩散与电泳相结合的定向加速的免疫扩散技术）：抗体流向负极，抗原流向正极；最适比例出现沉淀线。火箭免疫电泳是将单向免疫扩散与电泳相结合的一项定量检测技术，实质上是加速的单向扩散试验。（抗体混合于琼脂中，样品孔中的抗原置于负极端，电泳时抗体不移动，抗原向正极泳动，随着抗原量的逐渐减少，抗原泳动的基底区越来越窄，抗原抗体分子复合物形成的沉淀线逐渐变窄，形成一个形状如火箭的不溶性复合物沉淀峰。）顶部呈不清晰的云雾状或圆形，则表示未达终点。免疫电泳技术：区带电泳+免疫双向扩散。用于纯化抗原和抗体成分的分析免疫固定电泳：电泳+沉淀反应技术，可用于各种蛋白质的鉴定（M蛋白的鉴定与分型，也用予尿液中本-周蛋白的检测及K、入分型，脑脊液中寡克隆蛋白的检测及分型。）。45、RIA（放免）核素（1251）标记抗原，竞争抑制（标记抗原和非标记抗原竞争限量抗体），反比关系；IRMA（免疫放射）核素标记抗体，非竞争结合（过量标记抗体，反应速率比RIA快，灵敏度明显高于RIA）,正比关系。*RIA可以测定大分子和小分子抗原，但IRMA则只能测定至少有两个抗原决定簇的抗原。46、常用的荧光素有：异硫氟酸（FITC,最大吸收光波长490495nm）黄绿色，最常用；四乙基罗丹明（RB20Q最大吸收光波长为570nm）橘红色；四甲基异硫鼠酸罗丹明（TRITC,最大吸引光波长为550nm）橙红色；藻红蛋白（R-RE）橙色。其他：铺（Eu3+）47、荧光标记蛋白的常用方法：搅拌法和透析法。荧光抗体效价鉴定：抗原含量为1g/L时，抗体效价1:1648、时间分辨荧光免疫测定（TRFIA）以例系元素（如：铺）化合物为荧光标记物。49、偏振免疫测定的偏振波长是485nm（蓝光）。不适宜测定大分子物质。50、荧光酶免疫：由于使用酶和荧光底物的化学反应作为放大系统，故灵敏度大大提高。51、均相法：不分离，直接测（用于小分子激素和半抗原（如药物）的测定）；酶放大免疫测定技术（EMIT）最早用于临床。酶标半抗原。EIA：异相法：先分离，后测定。固相酶免疫测定（如ELISA）52、酶联免疫吸附试验（ELISA）:辣根过氧化物酶（HRP:底物（1）邻苯二胺（OPD,（2）四甲基联苯胺（TMBELISA中应用最广泛的底物。（HRP记抗体或抗原的最常用方法一一改良过碘酸钠法）碱性磷酸酶（ALP）:底物：对-硝基苯磷酸脂（p-NPP）3-半乳糖昔酶（3-Gal）:底物：4-甲基伞酮基-R-D半乳糖昔（4-MUU必要的试剂：固相的抗原或抗体；酶标记的抗原或抗体；酶反应的底物。抗原测定：蛋白大分子抗原用得最多的是双抗体夹心法（HBsA0。只有单个
