碱性磷酸酶同工酶检测试剂盒
简介：碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,简称ALP或AKP)为一类磷酸酯酶，广泛分布于 哺乳动物组织内，其活性所需最适pH 9.29.&碱性磷酸酶同工酶有肝、骨、小肠、胎盘、 胆汁等同工酶。碱性磷酸酶同工酶检测试剂盒(抑制敏感法)采用磷酸苯二钠比色法，其检测原理是磷酸 苯二钠在碱性条件下，可在碱性磷酸酶的作用下生成游离酚和磷酸。在碱性条件下酚与氨 基安替比林结合，并经氧化生成红色醌式结构物，呈深浅不一的红色，产物红色越深，说 明碱性磷酸酶活性越高，反之则酶活性越低，通过比色法(分光光度计或酶标仪)测定吸光度， 据此通过比色分析就可以计算出总的碱性磷酸酶活性水平。同时通过尿素、苯丙氨酸抑制 后测定残余ALP活性，以确定同工酶的性质。该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或 匀浆液、血浆、血清等样品中内源性的碱性磷酸酯酶活性。如果用分光光度计,100T的检 测试剂盒可检测33次左右；如果用酶标仪，100T的检测试剂盒可检测330次左右。该试 剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。组成：编号 名称一一TE0010100TStorage试剂(A): ALP Assay buffer50ml4°C避光试剂(B): ALP显色液50ml-20°C避光试剂(C):显色基液150ml-20C避光试剂(D)： Phe nol 标准(1mg/ml)2mlRT试剂(E): ddH2O10mlRT使用说明书1份自备料：1、离心管或96孔板2、水浴锅或恒温箱3、分光光度计或酶标仪操作步骤(仅供参考):1、酉己制标准品工作液：取出Phenol标准(1mg/ml)恢复至室温后，取溶解于ddH2O，使浓度达到，即为标准品工作液-Phenol(0.05mg/ml)。按照下表稀释系列标准品溶液。012345Phe nol(0.05mg/ml)(ml)00.10.20.30.40.5ddH2O(ml)0.550.450.350.250.150.05相当于金氏单位(U/L)010203040502、准备样品： 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速离 心取上清，冻存，用于碱性磷酸酯酶的检测。 血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的 测定，尿液通常也可以直接用于测定，冻存，但为了消除样品本身颜色的干扰，需 设置加了血浆或血清但不加底物的对照。 高活性样品：如果样品中含有较高活性的碱性磷酸酶，可以使用原有的裂解液或 PBS等进行稀释，如鸡血清、血浆可稀释后检测。3、使用分光光度计检测：检测总ALP :按照下表设置对照管、标准管、尿素测定管、苯丙测定管、总测定管，溶液 应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的碱性磷酸酯酶活性过高，可以 减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检测最好能设置平行管。加入物(ml)对照管标准管尿素测定管苯内测定管总ALP 测定管Phe nol标准(15号管)0.2待测样品0.10.10.2尿素抑制剂0.1苯丙氨酸抑制剂0.1ALP Assay buffer0.20.20.20.20.2水浴中孵育。ALP显色液(37弋提前温育)0.500.500.500.500.50立即混匀，水浴中准确孵育。显色基液1.501.501.501.501.50待测样品0.2用分光光度计，以对照管(ddH2O)调零，读取对照管、标准管、尿素测定管、苯丙测定 管、总测定管的吸光度(即A对照、A标准、A测定)，如无法检测，亦可检测范围内吸光度，一 般应数小时内检测完毕。4、使用酶标仪检测：检测总ALP :按照下表设置对照孔、标准孔、尿素测定孔、苯丙测定孔、总测定孔，溶液 应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的碱性磷酸酯酶活性过高，可以 减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检测最好能设置平行孔。加入物（M）对照孔标准孔尿素测定孔苯内测定孔总ALP 测定孔Phe nol标准（15号管）20待测样品101020尿素抑制剂10苯丙氨酸抑制剂10ALP Assay buffer2020202020水浴中孵育。ALP显色液（37C提前温育）5050505050立即混匀，水浴中准确孵育。显色基液150150150150150待测样品20用酶标仪，以0号孔（ddH2O）调零，读取对照孔、标准孔、尿素测定孔、苯丙测定孔、 总测定孔的510nm吸光度（即A对照、A标准、A测定），如无法检测，亦可检测范围内吸光度， 一般应数小时内检测完毕。计算：碱性磷酸酶金氏活性单位的定义：在37弋条件下，100ml待测样品与显色底物（即 ALP显色液所含物质）作用15min，产生1mg酚为一个金氏单位（U/L）。以系列Phenol标准（1 - 5号管）对应的金氏单位为x轴，以相应的A标准（1 - 5号管） 为y轴，绘制标准曲线，亦可分别制作标准曲线。以A测定-A对照的差值为实际的吸光度， 用该差值与标准曲线进行对比，求出总ALP、尿素抑制ALP、苯丙抑制ALP活性单位。尿素抑制ALP残余活性百分率=（尿素抑制ALP残余活性x2）/总ALP活性x100%苯丙抑制ALP残余活性百分率=（苯丙抑制ALP残余活性x2）/总ALP活性x100%参考区间（37°C）:健康成年人总ALP3 13金氏单位健康儿童总ALP5 28金氏单位抑制ALP残余活性百分率尿素苯丙氨酸肝1020%骨19%胎盘<0.6非胎盘>0.7注意事项：1、待测样品中不能含有磷酸酶抑制剂，同时需避免反复冻融。2、如果没有分光光度计，也可以使用酶标仪测定。3、所测样本的值高于标准曲线的上限，应稀释样品后重新测定。4、空白管如果显红色，说明ALP显色液不可用，应丢弃。5、加入显色基液时，应迅速，并且及时混匀，否则显色不充分。6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。有效期：6个月有效。相关：编号名称CSOOO1ACK 红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer)DC0032Masson三色染色液DF0135多聚甲醛溶液(4% PFA)NROOO1DEPC 处理水(0.1%)PS0013RIPA裂解液(强)PW0082丽春红S染色液(1X Ponceau S)
