电子文档交易市场
安卓APP | ios版本
电子文档交易市场
安卓APP | ios版本
换一换
首页 金锄头文库 > 资源分类 > PDF文档下载
分享到微信 分享到微博 分享到QQ空间

生物发光技术及其应用

  • 资源ID:37830061       资源大小:6.70MB        全文页数:70页
  • 资源格式: PDF        下载积分:10金贝
快捷下载 游客一键下载
账号登录下载
微信登录下载
三方登录下载: 微信开放平台登录   支付宝登录   QQ登录  
二维码
微信扫一扫登录
下载资源需要10金贝
邮箱/手机:
温馨提示:
快捷下载时,用户名和密码都是您填写的邮箱或者手机号,方便查询和重复下载(系统自动生成)。
如填写123,账号就是123,密码也是123。
支付方式: 支付宝    微信支付   
验证码:   换一换

 
账号:
密码:
验证码:   换一换
  忘记密码?
    
1、金锄头文库是“C2C”交易模式,即卖家上传的文档直接由买家下载,本站只是中间服务平台,本站所有文档下载所得的收益全部归上传人(卖家)所有,作为网络服务商,若您的权利被侵害请及时联系右侧客服;
2、如你看到网页展示的文档有jinchutou.com水印,是因预览和防盗链等技术需要对部份页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有jinchutou.com水印标识,下载后原文更清晰;
3、所有的PPT和DOC文档都被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;下载前须认真查看,确认无误后再购买;
4、文档大部份都是可以预览的,金锄头文库作为内容存储提供商,无法对各卖家所售文档的真实性、完整性、准确性以及专业性等问题提供审核和保证,请慎重购买;
5、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据;
6、如果您还有什么不清楚的或需要我们协助,可以点击右侧栏的客服。
下载须知 | 常见问题汇总

生物发光技术及其应用

Confidential and Proprietary. Not for Further Disclosure.Confidential and Proprietary. Not for Further Disclosure.Promega Founded 1978 Over 50 distributors in Europe, Asia, Africa and the Americas 1,400+ employees worldwide ISO 13485 certified Manufacturing in US, Korea and Shanghai Over 3,000 products for life science research and applied science including drug discovery Promega BioSystems Sunnyvale, Inc., CAPromega BioSciences, San Luis Obispo, CAPromega Headquarters and Manufacturing Madison, WisconsinPromega BioSystems, Seoul, KoreaShanghai Promega, ChinaConfidential and Proprietary. Not for Further Disclosure.Confidential and Proprietary. Not for Further Disclosure.Promega Provides Outstanding Life Science Research ToolsSystems BiologyProteomicsGenomicsCellomicsDNARNAProteinCellTissue Cellular Analysis Protein Protein Interaction Drug Screening Research Tools Little Animal Imaging Cell-Free Protein Expression DNA , RNA Purification and Analysis Epigenetics Research Tool©2010, Promega Corporation. Confidential and Proprietary. Not for Further Disclosure.段文娟 Senior Field Application Specialist wenjuan.duanpromega.com萤光素酶报告基因技术及其应用Confidential and Proprietary. Not for Further Disclosure.Confidential and Proprietary. Not for Further Disclosure.Content-目录目录1.报告基因技术简介报告基因技术简介2.萤光素酶报告基因技术应用3.萤光素酶报告基因技术检测法Confidential and Proprietary. Not for Further Disclosure.Confidential and Proprietary. Not for Further Disclosure.5Reporter Gene 报告基因的产生报告基因的产生PromoterExon 12345Enhancertranscription start siteEnhancerReporter GenePromoter优势优势: 报告基因通常是容易检测的蛋白 报告基因可以通过生物发光、荧光、比色或放射的方法进行检测 采用酶类做为报告基因,具有放大信号的作用Reporter 问题问题:下游蛋白难以检测、方法繁琐Confidential and Proprietary. Not for Further Disclosure.Confidential and Proprietary. Not for Further Disclosure.Absorbance 物质的结构不同吸光波长也不同 物质对光的吸收与其浓度成正比 灵敏度有限灵敏度有限Four Methods For Assay 四种检测方法学四种检测方法学AbsorbanceAbsorbanceRadiationRadiationFluorescenceFluorescenceBioluminescenceBioluminescenceFluorescence Excitation from a photonBioluminescence Excitation from a chemical ReactionExcitation (photon)Emission (photon)Excitation (chemical)Emission (photon)Confidential and Proprietary. Not for Further Disclosure.Confidential and Proprietary. Not for Further Disclosure.萤光素酶反应原理萤光素酶反应原理LIGHTFirefly Luciferase: Common Firefly Photinus pyralis Wavelenghty:550-570nmRenilla Lucierase: Renilla reniformis Sea Pansy Wavelenghty:480nmLIGHTConfidential and Proprietary. Not for Further Disclosure.Confidential and Proprietary. Not for Further Disclosure.什么是理想的报告基因?没有内源性表达易于定量高灵敏度线性范围宽反应迅速ReporterNon- RadioactiveEnzymaticBackgroundSensitivityActive FormHalf-lifeFirefly LuciferaseYY+Monomer3 hoursRenilla LuciferaseYY+Monomer5 hoursCAT(氯霉素乙酰 转移酶)NY+Trimer50 hoursb-Galactosidase (-半乳糖苷酶)YY+/+Tetramer20 hours其他:GUS (葡萄糖醛酸酶)、SEAP (分泌型碱性磷酸酶)、GFP (绿色荧光蛋白)Luciferase is the REPORTER of choice!Confidential and Proprietary. Not for Further Disclosure.Confidential and Proprietary. Not for Further Disclosure.Reporter Assay Concept 报告基因检测大体流程报告基因检测大体流程transcriptionREPORTERASSAYTRANSFECT REPORTER CONSTRUCTVector ConstructVector ConstructTreatment 适用范围广: 总RNA 、细胞裂解物以及纯 化的RNA都可用于miRNA的定量检测需要仪器设备northern杂交杂交检测miRNA在组织细胞中的表达水平 结合RNA marker,经凝胶电泳检测miRNA 的分子大小对样品的需求量较高:需要微克级样品才 能避免假阴性原位杂交原位杂交检测不同细胞系单个细胞中的miRNA表达 不经分类和分离的情况下,比较不同细胞系 中miRNA的表达水平操作复杂基因芯片基因芯片高通量的检测基因表达谱需要昂贵的仪器设备; 半定量 重复性较差 不能同时优化所有待测miRNA的杂交环境, 因而不能区分高度类似的miRNAConfidential and Proprietary. Not for Further Disclosure.Confidential and Proprietary. Not for Further Disclosure.20Promega miRNAs /siRNAs 靶标研究工具靶标研究工具载体特点载体特点:1.插入片段可以是目的基因的3-UTR或一段 siRNA/shRNA/miRNA的结合序列2.目的片段插入萤光素酶基因3端终止密码子后, 与萤光素酶基因共同转录,产生一个mRNA, 但目的片段不翻译3.不生成融合蛋白,不用担心过表达功能蛋白 影响细胞状态,可用于研究对细胞有毒性的 蛋白4.蛋白水平直接验证,siRNA/ shRNA/ miRNA有 效时检测不到萤光;无效时检测到萤光应用应用:1.鉴鉴定定miRNA 靶标位点靶标位点2.研究细胞内源性研究细胞内源性miRNA活性活性3.高通量筛选有效的高通量筛选有效的siRNAsPromega miRNA/siRNA 靶标载体靶标载体Translation stop coden萤光素酶萤光素酶靶序列靶序列53mRNAmiRNA/siRNA/shRNA发光发光发光发光Inhibition of translation or Cleavage of mRNAConfidential and Proprietary. Not for Further Disclosure.Confidential and Proprietary. Not for Further Disclosure.21多克隆位点多克隆位点主报告基因主报告基因PGK启动子启动子新一代新一代miRNA/siRNA靶标载体靶标载体Cat.#载体载体骨架骨架主报告主报告基因基因内参基因内参基因 靶标靶标/内参启动子内参启动子 大小大小应用应用SizeE1330pmirGLOpGL4luc2hRluc-neo fusionPGK/SV40 7.35kb siRNA 适用范围广: 总RNA 、细胞裂解物以及纯 化的RNA都可用于miRNA的定量检测需要仪器设备northern杂交杂交检测miRNA在组织细胞中的表达水平 结合RNA marker,经凝胶电泳检测miRNA 的分子大小对样品的需求量较高:需要微克级样品才 能避免假阴性原位杂交原位杂交检测不同细胞系单个细胞中的miRNA表达 不经分类和分离的情况下,比较不同细胞系 中miRNA的表达水平操作复杂基因芯片基因芯片高通量的检测基因表达谱需要昂贵的仪器设备; 半定量 重复性较差 不能同时优化所有待测miRNA的杂交环境, 因而不能区分高度类似的miRNAConfidential and Proprietary. Not for Further Disclosure.Confidential and Proprietary. Not for Further Disclosure.报告基因应用报告基因应用Experimental firefly luciferase constructControl Renilla luciferase constructexpression level varies little with treatmentPROMOTER DISSECTIONSIGNALING PATHWAYNUCLEAR RECEPTORSPROTEIN INTERACTIONSPOST-TRANSCRIPTIONMIRNA CONTROLexpression level varies with treatmentLITTLEANIMAL IMAGINGENZYMEACTIVITYConfidential and Pro

注意事项

本文(生物发光技术及其应用)为本站会员(wt****50)主动上传,金锄头文库仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容本身不做任何修改或编辑。 若此文所含内容侵犯了您的版权或隐私,请立即阅读金锄头文库的“版权提示”【网址:https://www.jinchutou.com/h-59.html】,按提示上传提交保证函及证明材料,经审查核实后我们立即给予删除!

温馨提示:如果因为网速或其他原因下载失败请重新下载,重复下载不扣分。




关于金锄头网 - 版权申诉 - 免责声明 - 诚邀英才 - 联系我们
手机版 | 川公网安备 51140202000112号 | 经营许可证(蜀ICP备13022795号)
©2008-2016 by Sichuan Goldhoe Inc. All Rights Reserved.