血清天门冬氨酸氨基转移酶IFCC推荐方法测定作业指导书

血清天门冬氨酸氨基转移酶血清天门冬氨酸氨基转移酶 IFCCIFCC 推荐方法测定作业指导书推荐方法测定作业指导书 1 1 实实验验原原理理 国际临床化学学会 IFCC 推荐的紫外 连续监测法 L 天门冬氨酸 酮戊二酸 AST 草酰乙酸 L 谷氨酸 草酰乙酸 NADH H MDH 苹果酸脱氢酶 L 苹果酸 NAD H2O 2 2 标标本本 2 1 病人准备 12 小时禁食 2 2 类型 血清 肝素或EDTA 血浆 3 3 标标本本存存放放 3 天内的活性损失 2 8 保存 8 15 25 保存 10 标本稳定性 20 保存 至少可稳定 3 个月 4 4 标标本本运运输输 常温条件下保存运输 5 5 标标本本拒拒收收标标准准 标本溶血 细菌污染的标本 6 6 实实验验材材料料 6 1 试剂 申能 AST 测定试剂盒 货号 141 26017170 1 试剂 1 6 64ml 试剂 2 6 16ml 6 1 1 试剂组成 试剂 1 R1 Tris 缓冲液 pH7 8 80mmol L L 天门冬氨酸 240mmol L MDH 苹果酸脱氢酶 600U L LDH 乳酸脱氢酶 600U L 试剂 2 R2 a 酮戊二酸 12mmol L NADH 0 18mmol L 磷酸吡哆醛试剂 Good s 缓冲液 pH9 6 0 7mmol L 磷酸吡哆醛 0 09mmol L 6 1 2 试剂准备 试剂为即用式 6 1 3 试剂稳定性与贮存 试剂保存于 2 8 若无污染 可稳定至失效期 试剂不可冰冻 6 1 4 变质指示 当试剂有看得见的微生物生长 有浊 度 或者未开盖的液体有沉淀时 表明试剂已变质 不 能继续使用 6 1 5 注意事项 试剂中含叠氮钠 0 95g L 为防 腐剂 不可入口 避免接触皮肤及粘膜 应采取必要的 预防措施使用试剂 6 2 校准品 使用 DiaSys 公司提供的 TruCal U 校准 品对自动分析仪进行校准 具体参见生化检验校准品和 质控品 SOP 文件 6 3 质控品 具体参见生化检验校准品和质控品 SOP 文件 7 7 仪仪器器 奥林巴斯 AU1000 生化分析仪 8 8 操操作作步步骤骤 8 1 项目基本参数 参见生化检验奥林巴斯AU1000 生化分析仪项目测定参数 SOP 文件 8 2 仪器操作步骤 参见生化检验奥林巴斯AU1000 生化分析仪操作规程 SOP 文件 9 9 检检验验结结果果的的判判断断与与分分析析 1 10 0 质质量量控控制制 在每一批标本中都应把非定值血清水 平 I 与 II 质控做为未知标本进行分析 以2S 为质控 警告限 3S 为失控限 绘制质控图 判断是否在控 质控规则参见生化室室内质控操作规程 SOP 文件 1 11 1 计计算算方方法法 以 TruCal U 复合校准品 AST 校准值 校准仪器后 在病人结果可报告范围内 仪器直接报告 可靠的检测结果 不使用校准品进行AST 活力检测 可以直接使用 A min 均值乘以计算因子得到结果 但是这样所得结果的可靠性不如使用校准品 计算 ALT 活力的计算因子见下表 A A m mi in n 因因子子 A AS ST T 活活力力 U U L L 底物起始的反应 37 样品起始的反应 37 340 nm 2143 1745 334 nm 2184 1780 365 nm 3971 3235 1 12 2 参参考考值值范范围围 4 不含磷酸吡哆醛 含磷酸吡哆醛 女性 31U L 10 35U L 男性 37U L 10 50U L 参考值因性别 年龄 饮食和地域的不同而有所差 别 根据好的实验室经验 每个实验室应建立自己的参 考值 1 13 3 临临床床意意义义 1 1 2 2 丙氨酸氨基转移酶 ALT 旧称谷丙转氨酶 GPT 天门冬氨酸氨基转移酶 AST 旧称谷草转 氨酶 GOT 它们是氨基转移酶类的典型代表 氨基转 移酶催化氨基从氨基酸转移给 酮酸的反应 ALT 是肝脏的特异性酶 仅在肝胆疾病时显著升高 而 AST 水平的升高和心肌或骨骼肌损伤 以及肝组织损 害等都有关 因此同时进行ALT 和 AST 的检测用于鉴 别肝损伤和心肌或骨骼肌损伤 AST ALT 比率可用于 肝病的鉴别诊断 比率 1 和严重肝病有关 常见慢性肝病 1 14 4 操操作作性性能能 14 1 线性范围 2 800U L 14 2 精密度 精密度的评估是根据NCCLS 推荐的标 准方法 AU1000 批内精密度小于 3 总精密度小于 3 用于分析的质控血清和数据处理符合以上的 NCCLS 的规则 不含磷酸吡哆醛 批内精密 度 n 20 x U L s U L CV 天间精密 度 n 20 x U L s U L CV 样品 1 25 10 823 25 样品 1 25 71 134 40 样品 2 51 31 573 06 样品 2 48 60 671 38 样品 3 1160 900 77 样品 3 1150 800 69 含磷酸吡哆醛 批内精密 度 x U L s U L CV 天间精密 度 x U L s U L CV n 20n 20 样品 1 43 61 102 51 样品 1 44 01 593 61 样品 2 74 51 792 41 样品 2 77 03 053 97 样品 3 1743 181 83 样品 3 1873 371 80 14 3 方法学比较 不含磷酸吡哆醛 本公司不含磷酸吡哆醛的试剂盒 y 与某商品化试 剂盒 x 同时对 78 个样品进行 AST 活力检测 将检 测结果作方法学比较 其统计结果如下 y 0 98x 0 51U L r 0 999 含磷酸吡哆醛 本公司含磷酸吡哆醛 的试剂盒 y 与某商品化试剂 盒 x 同时对 80 个样品进行 AST 活力检测 将检测 结果作方法学比较 其统计结果如下 y 0 97x 0 79U L r 0 995 14 4 灵敏度 本试剂的检测限为2U L 14 5 病人结果可报告范围 2 800U L 1 15 5 超超出出范范围围结结果果处处理理 本法对 AST 活力检测的最大 A min 在 340 334nm 为 0 16 在 365nm 为 0 08 当样品测定值超过上限时 应将样品用9g L 氯化钠 溶液作 1 9 稀释 重新测定 结果乘以10 1 16 6 病病危危报报警警值值的的处处理理 无 1 17 7 方方法法局局限限性性 17 1 本法对 AST 活力检测的最大 A min 在 340 334nm 为 0 16 在 365nm 为 0 08 当样品测定值 超过上限时 应将样品用9g L 氯化钠溶液作 1 9 稀 释 重新测定 结果乘以10 17 2 干扰物质 当样品中抗坏血酸浓度 1704 mol L 胆红素浓度 684 mol L 甘油三酯浓 度 22 6mmol L 时没有观察到干扰 红细胞内富含 AST 因此溶血血清检测结果明显偏高 1 18 8 补补救救措措施施 当仪器发生故障时 迅速联系仪器厂 家进行维修 1 19 9 参参考考文文献献 1 Thomas L Alanine aminotransferase ALT Aspartate aminotransferase AST In Thomas L editor Clinical Laboratory Diagnostics 1st ed Frankfurt TH Books Verlagsgesellschaft 1998 p 55 65 2 Moss DW Henderson AR Clinical enzymology In Burtis CA Ashwood ER editors Tietz Textbook of Clinical Chemistry 3rd ed Philadelphia W B Saunders Company 1999 P 617 721 3 Bergmeyer HU Horder M Rej R International Federation of Clinical Chemistry IFCC Scientific Committee Analytical section approved recommendation 1985 on IFCC methods for the measurement of catalytic concentration of enzymes Part 3 IFCC method for alanine aminotransferase L alanine 2 oxoglutarate aminotransferase EC 2 6 1 2 J Clin Chem Clin Biochem 1986 24 481 95 4 Lorentz K Rohle G Siekmann L Einfuhrung der neuen Standardmethoden 1994 zur Bestimmung der katalytischen Enzymkonzentrationen bei 37 DG Klinische Chemie Mitteilungen 1995 26 190 2 2 20 0 其其他他 仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集 后按 检验科废物处置管理规定 执行