检测公司作业指导书

XX检测技术有限公司 作业指导书XX 检 测 技 术 有 限 公 司XX DETECTION TECHNOLOGY CO.,LTD. 作 业 指 导 书 文件编号：JHLD/ZD-2012编 制：检测部、质管部 审 批： 受控状态： 分 发 号：版 本 号： 第A版 持 有 部 门：2012年04月01日 发布 2012年04月05日实施公共场所空气微生物检验方法细菌总数测定 GB/T 18204.1-20001、定义1.1、撞击法 采用撞击式空气微生物采用器采用，通过抽气动力作用，使空气通过狭缝或小孔而产生高速气流，从而使悬浮在空气中的带菌粒子撞击到营养琼脂平板上，经37、48h培养后，计算每立方米空气中所含的细菌菌落数的采样测定方法。1.2、自然沉降法直径9cm的营养琼脂平板在采样点暴露5min，37、48h培养后，计数生长的细菌菌落的采样测定方法。3操作步骤3.1 设置采样点时，应根据现场的大小，选择有代表性的位置作为空气细菌检测的采样点。通常设置5个采样点，即室内墙角对角线交点为一采样点，该交点与四墙角连线的中点为另4个采样点。采样高度为1.2-1.5m。采样点应远离墙壁1m以上，并避开空调、门窗等空气流通处。3.2 将营养琼脂平板置于采样点处，打开皿盖，暴露5min，盖上皿盖，翻转平板，置36±1恒温箱中，培养48h。3.3 计数每块平板上生长的菌落数，求出全部采样点的平均菌落数。以每平皿菌落数（cfu/皿）报告结果。公共场所茶具微生物检验方法 细菌总数测定 GB/T 18204.2-20001 定义细长细菌总数：指公用茶具经过采样处理，在一定条件下培养后(培养基成分、培养温度、培养时间、pH值、需氧性质等),1 cm,表面上所含菌落的总数。本方法规定的培养条件下所得结果，只包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧菌落总数。3 操作步骤3.1 采样方法3.1.1 随机抽取清洗消毒后准备使用的茶具。3.1.2 用灭菌生理盐水湿润棉拭子，在茶具内、外缘，涂抹50 cm,，即1-1.5 cm 高处一圈。用灭菌剪刀剪去棉签手接触的部分，将棉拭子放人10 mL生理盐水内，4h内送检。3.2 检验方法3.2.1 将放有棉拭子的试管充分振摇。此液为1:10稀释液。3.2.2 以无菌操作，吸取2 mL检样，分别注人到两块灭菌平皿内，每皿1 mL。如污染严重，可十倍递增稀释，即吸取1 ml加到9 mL灭菌生理盐水中，混匀，此液为1 100稀释液。每个稀释度做两块平皿。3.2.3 将已融化冷至45 C左右的营养琼脂培养基倾人平皿，每皿约15 mL，并立即旋摇平皿。冷凝后放36C士1培养箱培养48 h。4 菌落计数方法：式中：a细菌总数，cfu/cm2 B平均菌落数 n稀释倍数公共场所茶具微生物检验方法大肠菌群测定 GB/T 18204.3-20001 定义：大肠菌群 指一群在37、24h能发酵乳糖、产酸、产气、需氧和兼性厌痒的革兰氏阴性无芽胞杆菌。 该菌主要来源于人畜粪便，故以次作为粪便污染指标来评价公用毛巾、床上卧具的卫生质量。2 操作步骤2.1 采样方法 2.1.1 随机法：随机抽取清洗消毒后准备使用的毛巾、床上卧具。 2.1.2 涂抹法：用测定细菌总数时采集的样品，无需重采。 2.1.3 纸片法：用灭菌生理盐水湿润5cm×5cm大肠菌群快速测定纸片两张，分别贴在毛巾、床上卧具规定部位和面积范围内，约30s后取下，置于无菌塑料袋内。2.2 检验方法 2.2.1 发酵法 2.2.1.1 用测定细菌总数剩余的检样，倒入双料乳糖胆盐发酵培养液中。置36±1培养箱内培养24h。 2.2.1.2 观察是否产酸、产气，若有变黄和气体产生，该管推测是检验阳性。如不产酸、产气则为大肠菌群阴性。 2.2.1.3 自推测性检验阳性管中取一接种环培养液，转种伊红美蓝琼脂平板上，置36±1培养箱培养1824h，然后取出，观察菌落形态，并做革兰氏染色和证实性试验。 2.2.1.4 在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落12个进行染色镜检； 同时接种乳糖发酵管，只36±1培养24h。2.3 纸片法将已采样的纸片置36±1培养箱内培养1618 h，观察结果。公共场所毛巾、床上卧具微生物检验方法细菌总数测定 GB/T 18204.420001 定义 ：细菌总数：指被检物品经过采样处理，在一定条件下培养后，（培养基成分、培养温度、培养时间、pH值、需氧性质等）25 cm2表面上所含菌落的总数。本方法规定的培养条件下所得结果，只包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧菌落总数。细菌总数主要作为判定公用毛巾、床上卧具被污染程度的标志，检测细菌总数，为公用毛巾、床上卧具清洗消毒效果的判定和评价提供依据。2 操作步骤2.1 采样方法2.1.1 随机抽取清洗消毒后准备使用的毛巾、床上卧具。2.1.2 用灭菌生理盐水湿润棉拭子，在毛巾、枕巾对折后两面的中央各25 cm2(5 cm×5 cm)面积范围床单、被单在上下两部各25 cm2面积范围内有顺序地来回涂抹，用灭菌剪刀剪去棉签手接触的部分，将棉拭子放人10 mL生理盐水内，4h内送检。2.2检验方法2.2.1将放有棉拭子的试管充分振摇。此液为1:10稀释液。2.2.2以无菌操作，吸取2 mL检样，分别注入到两块灭菌平皿内，每皿1 mL。如污染严重，可十倍递增稀释，即吸取1 mL加到9 mL灭菌生理盐水中，混匀，此液为1:100稀释液。每个稀释度做两块平皿。 2.2.3将已融化冷至45左右的营养琼脂培养基倾入平皿，每皿约15 mL，并立即旋摇平皿。冷凝后放36±1培养箱培养48 h。3 菌落计数方法：M=k·n/2 式中：M 细菌总数，cfu/25K 稀释倍数; n 平均菌落数。公共场所毛巾、床上卧具微生物检验方法大肠菌群测定 GB/T 18204.5-20001 定义：大肠菌群 指一群在37、24h能发酵乳糖、产酸、产气、需氧和兼性厌痒的革兰氏阴性无芽胞杆菌。 该菌主要来源于人畜粪便，故以次作为粪便污染指标来评价公用毛巾、床上卧具的卫生质量。2 操作步骤2.1 采样方法 2.1.1 随机法：随机抽取清洗消毒后准备使用的毛巾、床上卧具。 2.1.2 涂抹法：用测定细菌总数时采集的样品，无需重采。 2.1.3 纸片法：用灭菌生理盐水湿润5cm×5cm大肠菌群快速测定纸片两张，分别贴在毛巾、床上卧具规定部位和面积范围内，约30s后取下，置于无菌塑料袋内。2.2 检验方法 2.2.1 发酵法 2.2.1.1 用测定细菌总数剩余的检样，倒入双料乳糖胆盐发酵培养液中。置36±1培养箱内培养24h。 2.2.1.2 观察是否产酸、产气，若有变黄和气体产生，该管推测是检验阳性。如不产酸、产气则为大肠菌群阴性。 2.2.1.3 自推测性检验阳性管中取一接种环培养液，转种伊红美蓝琼脂平板上，置36±1培养箱培养1824h，然后取出，观察菌落形态，并做革兰氏染色和证实性试验。 2.2.1.4 在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落12个进行染色镜检； 同时接种乳糖发酵管，只36±1培养24h。2.3 纸片法 将已采样的纸片置36±1培养箱内培养1618 h，观察结果。理发用具微生物检测方法大肠杆菌测定 GB/T 18204.6-20001 范围本标准规定了理发用具大肠菌群的检验方法。本标准适用于理发用具的大肠菌群的检验。2 定义大肠菌群：指一群在370.24 h培养能发酵乳糖、产酸、产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。3 仪器、培养基和试荆见GB/T 18204.3- 2000中第3章 见GB/T 18204. 3- 2000中第4章4 操作步骤4.1 采样应在无菌操作下进行。将蘸有无菌生理盐水的无菌棉拭子在推子前部上下均匀各涂抹三次，或在使用的刀刃、剪刃的两侧各涂抹一次采样将采样后的棉拭子剪去手接触部分，放人10 mL灭菌生理盐水中，充分振摇，取5 mL放人双料乳糖胆盐发酵管中，置36士1温箱培养24 h，如乳糖胆盐发酵管不产气，则可报告大肠菌群阴性，如有产酸、产气者，则进行分离培养。4.2 分离培养:将产酸、产气的发酵管划线接种在伊红美兰琼脂平板上，置37温箱培养1824 h，观察菌落形态，做革兰氏染色和证实试验。典型的大肠菌落为黑紫色或红紫色，具有金属光泽。4.3 证实试验:挑取可疑大肠杆菌菌落1-2个进行革兰氏染色镜检，同时接种乳糖发酵管于36士1培养24h观察产气情况。5 结果报告如乳糖管最终产酸、产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，即可报告大肠菌群阳性。 理发用具微生物检测方法金黄色葡萄球菌测定 GB /T 18204.7-20001 范围本标准规定了理发用具金黄色葡萄球菌的检验方法。本标准适用于公共理发用具的金黄色葡萄球菌的检验，美容用具金黄色葡萄球菌检验可参照使用。2 定义金黄色葡萄球菌：指在Baurd Parker培养基或血平板培养基上生长良好，分解甘露醇产酸，血浆凝固酶阳性的革兰氏阳性葡萄状球菌。3 仪器3.1 显微镜。3.2 培养箱3.3 离心机3.4 灭菌吸管3.5 灭菌试管3.6 载玻片3.7 酒精灯3.8 革兰氏染色用有关器材4 培养基和试剂4.1胰酪胨大豆肉汤成分：胰酪胨(或胰蛋白胨) 17g 植物蛋白胨(或大豆蛋白胨) 3 g 氯化钠 100g 磷酸氢二钾 2.5g 葡萄糖 2.5g 蒸馏水 10 00m L制法：将上述成分混合后，加热溶解，调pH为7.2-7.3 ，分装,12120m in高压灭菌。4.2 7.5%的氯化钠肉汤成分：蛋白胨 10g 牛肉膏 3 g 氯化钠 75g 蒸馏水 1000m L制法：将 上述成分加热溶解，调pH为7.4，分装，12115m in高压灭菌。4.3 Baird Parker平板成分：胰蛋白胨 10g 牛肉膏 5 g 酵母浸膏 1 g 丙酮酸钠 10g 甘氨酸 12g 氯化锂 (LiCl·6H20) 5g 琼脂 20g 蒸馏水 950m L