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脂肪干细胞原代培养流程.docx

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脂肪干细胞原代培养流程1. 将收集到的脂肪组织移入 50ml 离心管，加入 2 倍体积的常温 PBS 用移液管吹打清洗：清洗完成的指标？2. 1000 转/分离心5 分钟，是否需要低温？3. 用移液管将下层的液体和沉淀的血污弃掉，保留上层黄色组织，如何操作，为何不吸取上层黄色组织？4. 吸取2倍体积的常温PBS用移液管吹打清洗5. 1000 转/分离心5 分钟6. 用移液管将下层的液体和沉淀的血污弃掉，保留上层黄色组织7. 吸取2倍体积的常温PBS用移液管吹打清洗8. ……反复重复以上操作3-4 次，直至下层液体呈不浑浊，底部无血污（还是弃掉？，保留上层组织9. 将组织用移液管移入无菌培养皿中，用剪刀将大块组织剪碎，将组织用吸管移入 50ml 离心，加入与组织等体积的胶原酶（625U/ml）混匀后放入37°C孵箱，消化2h10. 消化完将最上层颜色较深的油脂弃掉，注意保留组织，取与消化液等量终止液（DMEM+10%NBS）终止消化，用弯头吸管吹打混匀数次，过100目筛网，收集滤液于离心管， 1000转/分钟，离心5分钟11. 弃上清，用培养液（a -MEM+10%NBS）重悬，根据沉淀多少接入培养瓶中（个人估计约 3E6/瓶），每瓶总液量8ml。

12. 放入孵箱，24h天镜检，72或96h换液，之后隔天换液，培养12-14d传代。

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