中山大学考研药物分析资料第四章.docx

本文格式为Word版，下载可任意编辑中山大学考研药物分析资料第四章 第四章 药物定量分析与分析方法验证（一） 目的与要求 ? 1、掌管不同布局药物的稳定性规律 ? 2、掌管色谱系统适用性试验的内容 ? 3、熟谙氧瓶燃烧法的测验过程 ? 4、了解定量分析样品的前处理方法的进展及在药物分析中的应用 1、 掌管不同布局药物的稳定性规律 （1）与苯环直接相连，卤原子和苯环形成强共轭布局，电子云密度重新分布，此时卤原子结合坚韧，不易脱离；需要破坏后才可分析 （2）与脂肪链相连，结合不坚韧；根据处境选择 （3）与苄基相连，相当于活泼取代氢的位置，卤原子易脱掉，结合最不坚韧，易处理 2、掌管色谱系统适用性试验的内容 色谱的定量，都需要色谱系统符合确定要求，即要举行色谱系统适用性测验，包括对主要组分的理论塔板数、主要组分与其他组份的分开度，以及重复性和主要组分的峰对称因子（拖尾因子）等其中分开度和重复性是其中更具实用意义的参数 （1）、色谱柱的理论塔板数（n）：在规定的色谱条件下（固定相，滚动相等），注入供试品溶液或各品种项下规定的内标物质溶液，记录色谱图，量出供试品主成分或内标物质峰的留存时间tR（以分钟或长度计，下同，但应取一致单位）和半颠峰宽（Wh/2），按n＝5.54（tR/Wh/2）2计算色谱柱的理论板数，假设测得理论板数低于各品种项下规定的最小理论板数，应变更色谱柱的某些条件（如柱长、载体性能、色谱柱充填的效果等），使理论板数符合要求。

? 问：为什么不用峰宽来计算理论塔板数？ （2）、分开度（R）：无论是定性鉴别还是定量分析，均要求待测峰与其他峰、内标峰或特定的杂质对照峰之间有较好的分开度分开度的计算公式为： 式中tR2、tR1分别为相邻两峰中后一峰和前一峰的留存时间；W1及W2为此相邻两峰的峰宽除另有规定外，分开度应大于1.5 （3）、重复性：取各品种项下的对照溶液，连续进样3～5次，除另有规定外，其峰面积测量值的相对标准偏差应不大于2.0%也可按各品种校正因子测定项下，配制相当于80%、100%和120%的对照品溶液，参与规定量的内标溶液，配成3种不同浓度的溶液，分别进样3次，计算平均校正因子其相对标准偏差也应不大于2.0% （4）、拖尾因子（T）：为保证分开效果和测定精度，应检查待测峰的拖尾因子是否符合各品种项下的规定拖尾因子的计算公式为： 式中 W 0.05h 为 0.05 峰高处的峰宽； d 1 为峰顶点至峰前沿之间的距离 ? 除另有规定外，峰高法定量时T应在0.95～1.05之间。

峰面积定量影响不大，也不应太大 3、熟谙氧瓶燃烧法的测验过程 氧瓶燃烧法：是将含有待测元素的有机药物置于弥漫氧气的密闭的燃烧瓶中充分燃烧，使得待测元素转化为不同价态的氧化物，被吸收于适当的吸收液中，然后根据待测物质的性质，选用适合的方法举行分析 本法适用于分析含卤素有机药物、氮、硫和硒等药物 操作法：在燃烧瓶中参与规定的吸收液，并将瓶口用水润湿；提防急速通氧气约1分钟（通气口接近液面），立刻用外观皿笼罩瓶口，备用；点燃包有供试品的滤纸包，急速放入燃烧瓶中，按紧瓶盖，用少量水封闭瓶口，使燃烧完毕，充分振摇，使生成的烟雾完全吸收入吸收液中，放置15min后，用少量水冲洗瓶塞及铂丝，合并洗液也吸收液然后用同法做空白试验 需要留神的问题：（1）氧气要充沛！燃烧要充分2）瓶中不得有有机溶剂残留！（3）不得有润滑油等涂抹瓶口！ （4）水封瓶口，且用手按住瓶口！（5）选择适合的吸收液（多数是水和氢氧化钠的混合液）（6）若瓶中展现黑色颗粒，那么为燃烧不充分 4、了解定量分析样品的前处理方法的进展及在药物分析中的应用 药物的定量分析，需要根据分析方法的特点、药物的布局与性质，以及药物制剂的处方组成，采用适合的方法对样品举行处理，以得志所选择的分析方法对样品的要求。

有些药物可以用相对较简朴的方法处理，如化学药单体等；对于药物制剂来说，需要考虑处方中其他组分的干扰（在处理样品过程中除掉干扰，不同于色谱法的分开分析） ? 本节主要介绍含金属和卤素、硫、磷、硒等特殊元素的药物分析时的前处理过程这些药物的处理方法需根据它 们在分子中结合的坚韧程度不同而有所选择 复习题 ? 1、不同金属或卤素结合类型药物的稳定性？ （1）与苯环直接相连，卤原子和苯环形成强共轭布局，电子云密度重新分布，此时卤原子结合牢 固，不易脱离；需要破坏后才可分析 （2）与脂肪链相连，结合不坚韧；根据处境选择 （3）与苄基相连，相当于活泼取代氢的位置，卤原子易脱掉，结合最不坚韧，易处理 含金属药物前处理有两种处境： 1）金属原子不直接与碳原子相连，通常为有机酸或者酚的金属合作物，即含金属的有机药物，结合不坚韧，很轻易在水溶液中离解成金属离子；假设有机布局片面不干扰分析，可在溶液中直接举行金属的鉴别和含量测定 2）金属原子直接与碳原子以共价键连接，结合状态对比坚韧，即有机金属药物该类药物在溶液中一般不能解离成离子状态此时，可以根据金属共价键的坚韧程度，经处理后转变为可分析的离子状态，然后举行相应分析。

? 因此，对于含金属或卤素等的药物，需要根据药物与他们结合的坚韧程度，预先举行适当处理 处理方法：（1）不经有机破坏的方法，适用于与苄基相连的卤素及金属有机药物等； （2）需要有机破坏的方法，适用于与苯环直接相连和有机金属药物等 ? 2、氧瓶燃烧法的留神事项？（见上页） ? 3、色谱法的主要特点？ 色谱分析法是一种分开分析的方法，根据混合物中各组分的色谱行为差异，先行分开后对各组分逐一举行分析的方法，是分开混合物的有力手段 较常见的是TLC、HPLC、GC以及各种联用技术定量一般用HPLC和GC等 1、HPLC：适用范围广，越来越广泛； 2、GC：理论成熟，但使用受限； 3、TLC：少用于定量，TLCS应用不多 色谱分析法特点： 1）、条件选择范围宽，包括色谱柱、滚动相、检测器等 2）、应用范围宽：大片面药物都可以用色谱法分析，以HPLC为最广泛3、灵敏度高，切实度好，重线性好 4）、操作繁琐，测验消耗大5、适用于多组分的分开分析，与光谱等联用，可举行定性和定量分析 ? 4、色谱系统适用性试验的主要内容？（见上页） 第四章 药物定量分析与分析方法验证（一） 目的和要求 ? 1、掌管定量分析方法验证的主要内容； ? 2、熟谙生物药品前处理的主要方法； ? 3、了解生物样品的富集方法。

1、掌管定量分析方法验证的主要内容； 验证内容有：切实度；细致度（包括重复性、中间细致度和重现性）；专属性；检测限、定量限；线性、范围；耐用性等 一、切实度（Accuracy） 切实度是指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般用回收率(%)表示切实度应在规定的“范围”内测试范围”指的是确定的测试方法适用的上下限浓度或量的区间用于定量测定的分析方法均需做切实度验证 （一）含量测定方法 1、原料药的测定：原料药可用已知纯度的对照品或供试品举行测定；或用本法测定供试品的结果与已知切实度的另一方法测定的结果举行对比计算公式： 假设该分析方法已经测试，并求得其细致度、线性和专属性，在切实度可以推算出来的处境下，切实度可以不用再验证 2、制剂的含量测定：主要测试制剂中其他组份及辅料对含量测定方法的影响可用含已知量被测物的制剂各组分（包括制剂辅料）举行测定计算公式同原料药的方法假设不能获得制剂的全部组分，那么可向制剂中参与已知量的被测物举行测定，回收率计算公式为： 中药分析回收率测定常采用此法，一般要求在95～105%之间。

若 有些方法操作步骤繁多，可要求在90 ～110% RSD 一般在3% 以内 制剂含量测定时要考虑辅料的影响，要尽量除去辅料的空白影响制剂分析中，要求从自行制定的模拟样品开头，要求至少高、中、低三个浓度，每个浓度3份样品，共9个数据举行分析一般仪器分析要求回收率的RSD为2%之内，而容量分析要可达成99.7～100.3%对于生物样品分析，要求可以适当放宽 （二）杂质含量测定方法：多采用色谱法回收率的测定可通过向原料药或制剂中参与已知量杂质举行测试 （三）数据要求：在规定范围内，至少用9个测定结果举行评价 如设3个不同浓度，每个浓度分别制备3份供试品溶液举行测定应报告已知参与量的回收率（%）计算值，或测定结果平均值与真实值之差及其相对标准偏差（RSD）或可信限 二、细致度（Precision）系指在规定的测试条件下，同一个平匀供试品，经屡屡取样测定所得结果之间的接近程度 细致度一般用偏差、标准偏差（SD）或相对标准偏差（RSD）表示一般至少用6次结果举行评价细致度细致度是考察分析方法在不同的时间、操作人员、测验室等所得结果的重现性和重复性涉及含量测定的工程（含量测定和杂 S质定量）都需要验证细致度。

d?xi?xS???x?x?RSD??100%n?1x偏差（d）：测量值与平均值之差；标准（偏）差（SD或S）；相对标准（偏）差（RSD） 验证内容：细致度验证包括重复性、中间细致度和重现性 1、重复性:在较短时间间隔内，在一致操作条件下，由同一分析人员测定所得结果的细致度称为重复性，也称批内细致度 2i测定时，可采用3个不同浓度，每个浓度3份供试品，共9个数据举行分析也可以采用同一个浓度，用6个数据举行分析 2、中间细致度：在同一测验室，由于测验室内部条件的变更，如不同时间、不同分析人员，用不同设备测定所得结果的细致度，称为中间细致度 3、重现性:在不同测验室，由不同分析人员测定结果的细致度，称为重复性重现性只有当方法被法定标准采用时需要做 三、专属性（Specificity） 专属性是指在其他成分（如杂质、降解产物、辅料等）可能存在处境下，采用的方法能切实测定出被测物的特性 能反映该方法在有共存物时对供试物切实而专属的测定才能，也是用于繁杂样品分析时相互干扰程度的度量 鉴别回响、杂质检查、含量测定等均应考察专属性假设方法的专属性不够好，需要采用多个方法举行补充。

（一）鉴别回响：应能与可能共存的物质或布局好像化合物区分不含被测成分的供试品，以及布局好像或组分中的有关化合物，均应成负回响 （二）含量测定和杂质测定：应用色谱法时，应附代表性图谱并应标明诸成分在图中的位置，以说明专属性，其中分开度应符合要求（>1.5） 对于可获得杂质处境下，可通过参与杂质的方式，看杂质是否可得到有效分开对于杂质不能获得的处境，可与其他已阅历证的方法举行对比必要时采用光二极管阵列检测和质谱检测，举行纯度检查 四、检测限（Limit Of Detection，LOD）：检测限是指试样中被测物能被检测出的最低浓度或量 反映了方法与仪器的灵敏度和噪音的大小，也说明样品经处理后空白值的上下LOD是一种限度检查效能指标，无须切实定量，只要指出高于或低于该规定的浓度或量即可药品的鉴别试验和杂质检查方法均应验证LOD。