维生素C的定量测定ppt课件.ppt

紫外分光光度计法测定果蔬中紫外分光光度计法测定果蔬中Vc的含量的含量生物化学实验生物化学实验生物化学实验生物化学实验1本实验要求：本实验要求：1.本实验为设计性实验，每人须撰写好实验设计，实验设计包含“前言、实验、结果与讨论、结论”四部分，其中前言和实验需要在上实验课前写好，其余两部分在实验结束时撰写，然后上交2.实验时，每个小组做一种果蔬的Vc含量测定3.实验结束，每个小组提供一种果蔬的Vc含量数值供所有小组使用4.数据统计时，绘制表格或柱状图等请带直尺和铅笔5.参考资料： 马宏飞， 卢生有，韩秋菊， 李薇. “紫外分光光度法测定五种果蔬中维生素 Ｃ的含量”. 化学与生物工程，2012,29（8）：92-94.6.本实验成绩为生化实验考试成绩21. 学习定量测量维生素C的原理和方法2. 学习设计实验 3.了解水果、蔬菜中维生素C的含量一、实验目的一、实验目的3二、实验原理二、实验原理l维生素维生素C C是人类营养中最重要的维生素之一，缺乏它时会产生坏血病，因此又称其为是人类营养中最重要的维生素之一，缺乏它时会产生坏血病，因此又称其为抗坏血酸抗坏血酸l它可分为还原型和脱氢型。

还原型维生素它可分为还原型和脱氢型还原型维生素C C具有很强的性金属铜和酶（抗坏血酸氧具有很强的性金属铜和酶（抗坏血酸氧化酶）可以催化维生素化酶）可以催化维生素C C氧化为脱氢型根据它具有的还原性质可测定其含量氧化为脱氢型根据它具有的还原性质可测定其含量l维生素维生素C C的测定方法主要有紫外分光光度法、的测定方法主要有紫外分光光度法、 红外光谱法、红外光谱法、2,62,6——二氯靛酚滴定法、二氯靛酚滴定法、 高效液相色谱法、钼蓝比色法、原子吸收法、碘量法、电位滴定法、荧光光度法、毛高效液相色谱法、钼蓝比色法、原子吸收法、碘量法、电位滴定法、荧光光度法、毛细管电泳法、流动注射化学发光法等其中原子吸收法、高效液相色谱法和荧光光度细管电泳法、流动注射化学发光法等其中原子吸收法、高效液相色谱法和荧光光度法仪器相对昂贵；法仪器相对昂贵； 碘量法和电位滴定法操作步骤较繁琐，而且受其它还原性物质、碘量法和电位滴定法操作步骤较繁琐，而且受其它还原性物质、样品色素颜色和测定时间的影响；样品色素颜色和测定时间的影响； 紫外分光光度法是根据维生素紫外分光光度法是根据维生素C C对紫外产生吸收和对紫外产生吸收和对碱不稳定的特性，对碱不稳定的特性， 于于243243ｎｍｎｍ 处测定样品液与碱处理样品液两者吸光度之差，处测定样品液与碱处理样品液两者吸光度之差， 通通过标准曲线方程，过标准曲线方程， 即可计算样品中维生素即可计算样品中维生素C C的含量。

的含量 41.紫外分光光度计2.坐标纸3.移液器4.离心机5.研钵三、实验器材三、实验器材5市售果蔬 10-20g四、实验材料四、实验材料61. 10% HCl:10mL浓盐酸溶解成100mL溶液2. 100ug/mL标准Vc溶液：准确称取0.05g抗坏血酸，加10ｍL 10％HCl溶解，用蒸馏水定容至５00 mL，混匀，即得 100ug/mL维生素Ｃ标准溶液3. 1mol/L NaOH:40g NaOH溶解成1000mL溶液五、实验试剂五、实验试剂71.制作标准曲线（有一组同学提前完成，其他小组不需要做）按照下表操作，以A243为纵坐标，以Vc浓度为横坐标制作标曲六、实验步骤六、实验步骤012345678100μg/mLVc标准溶液mL00.03 0.06 0.09 0.12 0.15 0.18 0.24 0.30蒸馏水mL32.97 2.94 2.91 2.88 2.85 2.82 2.76 2.70Vc浓度μg/mL0123456810A2438 （（1）果蔬样品的处理）果蔬样品的处理 将蔬菜洗净晾干，水果取果肉，分别称取 10.00ｇ于研钵中，各加入１0％ HCl 10mL，研磨匀浆， 转移到50mL容量瓶中， 用蒸馏水稀释至刻度，混匀。

移至离心管中3000转/分钟 离心 10min ， 取上清液即为待测果蔬提取液2. 样品测定（（2）待测果蔬提取液吸光度的测量）待测果蔬提取液吸光度的测量 取0.1mL待测果蔬提取液， 放入盛有0.2mL10% HCl试管中， 再加蒸馏水4.7mL，摇匀以蒸馏水为空白， 在243nm处测定其吸光度（A1）9 （（3）碱处理果蔬提取液吸光度的测量）碱处理果蔬提取液吸光度的测量 依次吸取0.1mL 待测果蔬提取液、1.0mL 蒸馏水和 0.4mL 1mol/L NaOH放入试管中 摇匀； 静置20min后加入0.4mL １0％ HCl ， 混匀， 再加入3.1mL蒸馏水以蒸馏水为空白， 在243nm处测定其吸光度（A2） （（4）吸光度确定）吸光度确定 待测果蔬提取液与碱处理果蔬提取液的吸光度之差（A1-A2）即为果蔬样品吸光度103.计算计算 测得果蔬样品的吸光度后，依据标准曲线方程，即可计算出果蔬中维生素Ｃ的含量［mg/（100g）］ 式中：ｃ 为依标准曲线查到的Vc浓度, ug/mL ； Ｖ１为测吸光度时吸取样品溶液的体积， mL ； Ｖ总为吸取样品定容总体积，mL； Ｖ待测总 为待测样品总体积， mL ； Ｗ总 为果蔬质量，ｇ； 100为100ｇ果蔬。

维生素 Ｃ 含量 ＝ｃ × Ｖ总 × Ｖ待测总 × 100Ｖ１ × Ｗ总 ×100011七、分析与讨论七、分析与讨论12012345678100μg/mLVc标准溶液mL00.030.060.090.120.150.180.240.30蒸馏水mL32.972.942.912.882.852.822.762.70Vc浓度μg/mL0123456810A24300.0480.1050.1590.2130.2700.3210.4440.540线性回归方程: A= 0.054825581c-0.004244186相关系数：R2 = 0.99970345513CORREL:array1 和和 array2 之间的相关系数之间的相关系数 INTERCEPT:利用现有的利用现有的 x 值与值与 y 值计算直线与值计算直线与 y 轴的截距轴的截距 LINEST:使用最小二乘法对已知数据进行最佳直线拟合，并返使用最小二乘法对已知数据进行最佳直线拟合，并返回描述此直线的数组因为此函数返回数值数组，所以必须以回描述此直线的数组因为此函数返回数值数组，所以必须以数组公式的形式输入数组公式的形式输入直线的公式为：直线的公式为：y = mx + b 14。