EGFR血液检测专家共识讲座.pptx

非小细胞肺癌血液EGFR基因突变检测中国专家共识中国非小细胞肺癌血液EGFR基因突变检测专家组人员程颖 (吉林省肿瘤医院肿瘤内科)韩宝惠（上海交通大学附属胸科医院肺内科）黄诚（福建省肿瘤医院胸部肿瘤科）梁智勇（北京协和医院病理科）林冬梅（北京大学肿瘤医院病理科）刘卫平（四川大学华西医院病理科）刘艳辉（广东省人民医院病理科）陆舜（上海交通大学附属胸科医院肿瘤内科）卢铀（四川大学华西医院胸部肿瘤科）邵建永（中山大学附属肿瘤医院分子诊断科）宋勇（南京军区总医院呼吸内科）王洁（中国医学科学院肿瘤医院肿瘤内科）王哲海（山东肿瘤医院肿瘤内科）吴一龙（广东省人民医院、广东省医学科学院、广东省肺癌研究肿瘤内科）应建明（中国医学科学院肿瘤医院病理科）张力（中山大学附属肿瘤医院肿瘤内科）张绪超（广东省人民医院、广东省医学科学院、广东省肺癌研究肿瘤内科）周彩存（同济大学附属上海市肺科医院肿瘤内科）周晓军（南京军区总医院病理科）周晓燕（复旦大学附属肿瘤医院病理科）共识主要内容1.EGFR基因突变和EGFR靶向治疗2.EGFR组织检测的指南推荐3.EGFR的组织检测现状4.EGFR血液检测 标本采集及处理 外周血游离DNA提取 血液EGFR检测方法 报告及周期5.血液EGFR基因突变检测发展与展望肺癌的流行病学CACancerJClin.2015Mar;65(2):87-108l肺癌是世界范围内发病率（180万，13%）和死亡率（160万，19.4%）均最高的恶性肿瘤l2012年中国新发肺癌患者约65.3万，死亡患者约59.7万，发病率和死亡率均居所有恶性肿瘤首位来自国际癌症研究机构(IARC)2012年全球肿瘤流行病学统计数据（GLOBOCAN）EGFR基因突变和EGFR靶向治疗肺腺癌驱动基因突变图谱亚洲人群NSCLC中药物疗效相关的EGFR突变19外显子缺失（约占45%）和21外显子L858R突变（约占40%）为EGFR最主要突变，且均为EGFRTKI的敏感性突变NatureReview2007,7:169EGFR基因突变和EGFR靶向治疗研究 RR 中位PFS IPASS71.2%vs47.3%9.8vs6.4月First-SIGNAL84.6%vs37.5%8.4vs6.7月WJTOG340562.1%vs32.2%9.6vs6.6月NEJGSG00273.7%vs30.7%10.8vs5.4月OPTIMAL83%vs36%13.1vs4.6月EURTAC58%vs15%9.7vs5.2月LUX-LUNG361%vs22%11.1vs6.9月LUX-LUNG667%vs23%11.0vs5.6月TKI化疗TKI化疗缓解率无进展生存约70%约30%10-11个月5-6个月对于EGFR基因突变阳性患者八项随机研究奠定了TKI在EGFR基因突变阳性患者中一线治疗的地位EGFR组织检测的指南推荐晚期非鳞癌的NSCLC患者应进 行EGFR突变检测 ；除了从不吸烟或者很少吸烟的鳞癌患者（每年15包）外，已确诊鳞癌患者不推荐进行EGFR检测检测美国国立综合癌症网络（NCCN）指南欧洲临床肿瘤协会（ESMO）指南腺癌、大细胞癌、NOS (not otherwise specified，即组织 学类型无法确定) 等NSCLC应进 行EGFR突变检测 ；非吸烟、小活检标 本或混合型组织 学类型的鳞癌患者也可考虑进 行EGFR突变检测变检测 ；可采用多种方法进行检测美国临床肿瘤学会 （ASCO）所有肺腺癌患者（或者混合腺癌成分的肺癌），不考虑性别，种族和吸烟情况的特征，都应进 行EGFR检测检测中国非小细胞肺癌EGFR突变检测专家共识所有肺腺癌患者（或者混合腺癌成分的肺癌），不考虑性别，种族和吸烟情况的特征，都应进 行EGFR检测检测EGFR组织检测现状标本类型手术组织术组织活检组织检组织细细胞学标标本适合标本新鲜标本或甲醛固定石蜡包埋临床取材方法：p纤维支气管镜下活检p经皮肺穿刺活检p胸水p手术p胸腔镜p淋巴结穿刺活检p支气管内超声引导细针穿刺活检（EBUSFNA）EGFR组织检测现状影响因素亚洲欧洲北美肿瘤组织学(如鳞癌)组织不足患者急切希望开始治疗而非等待结果体力状态不佳获取结果时间过长不希望延缓治疗患者吸烟患者年龄需要占用我工作时间和精力取得报告患者自付费用过高结果对治疗决策不会产生影响亚洲欧洲北美检测且治疗前可获得结果(%)检测且治疗前不可获得结果 (%)未检测 (%)p2015年ELCC公布的一项全球10个国家562位肿瘤专家参与的调查研究p19%的晚期NSCLC患者未进行EGFR检测p即使进行检测仍有26%的欧洲患者在结果、出来前就开始接受治疗J. Spicer, et al. .2015 European Lung Cancer Conference (ELCC):LBA2血浆游离DNA（plasmacfDNA）是外周血中一种细胞外呈游离状态的小片段核酸 来源：肿瘤组织，炎症组织和正常组织。

其中来自于肿瘤细胞的部分称为循环肿瘤DNA（ctDNA） 释放方式：细胞凋亡，细胞坏死和胞泌作用cfDNA特点：总量少ctDNA丰度低（野生型DNA混杂）片断小（170bp）WWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWMWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWWCrowley et al., Nat Rev Clin Oncol (2013) EGFR血液检测cfDNA(cell-free DNA)102021/8/129、 人的价值，在招收诱惑的一瞬间被决定8月-218月-21Thursday, August 12, 202110、低头要有勇气，抬头要有低气14:17:27 14:17:27 14:178/12/2021 2:17:27 PM11、人总是珍惜为得到8月-2114:17:27 14:17Aug-2112-Aug-2112、人乱于心，不宽余请14:17:27 14:17:27 14:17Thursday, August 12, 202113、生气是拿别人做错的事来惩罚自己。

8月-218月-2114:17:27 14:17:27 August 12, 202114、抱最大的希望，作最大的努力12 八月 20212:17:27 下午14:17:27 8月-2115、一个人炫耀什么，说明他内心缺少什么八月 212:17 下午8月-2114:17August 12, 202116、业余生活要有意义，不要越轨2021/8/12 14:17:27 14:17:27 12 August 202117、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息2:17:27 下午2:17 下午14:17:27 8月-21烦恼有何惧怕，既然躲不掉，就调好心态与它共存心向阳光，何惧风霜茫茫人海你我相遇就是缘分，欢迎下载！EGFR血液检测cfDNA特点Fraction of EGFR mutant in total cfDNANumber of EGFR M+ plasma samples61376353activatingmutations,N=32T790M,N=11总量少 未转移 4期3期2期1期 100806040200结直肠胃食管胰腺乳腺局限期转移性可检测ctDNA的发生率(%)100806040200可检测ctDNA的发生率(%)I期III期II期IV期1.0*10061.0*10051.0*10041.0*10031.0*10021.0*10011.0*1001.0*10-01每5ml的突变片断I期III期II期IV期EGFR血液检测-易瑞沙获得血液ctDNA伴随诊断适应症欧盟和中国相继批准阿斯利康易瑞沙血液ctDNA伴随诊断非小细胞肺癌患者用药前检测EGFR突变p IVIFUM(易瑞沙后续评估)研究中，652例患者中血液与配对组织EGFR突变状态的一致性是94.3%对于无法获取组织样本或者组织样本量不足以检测的患者，可选择血液ctDNA用于评价EGFR突变状态JanYD,etal.2014ASCOAbstract1868.EGFR血液检测- IFUM研究：血液检测阳性可以指导TKI用药p IVIFUM(易瑞沙后续评估)研究中，血液与配对组织不同EGFR突变状态患者ORR的一致，19外显子缺失患者PFS也一致(10.3月 vs 9.6月)ORR(%)PFS (月)组织血液ctDNA检测EGFR突变阳性可用于指导EGFR-TKI治疗JanYD,etal.2014ASCOAbstract1868.EGFR血液检测-IFUM研究：血液检测阳性可以指导TKI用药p 血检特异性达到97.2%p 血检敏感性为49.6% 较之IFUM(65.7%)等临床研究数据低 可能是由于肿瘤分期、血液标本的处理、EGFR检测方法等方面的差异所造成的 提示我们，对于EGFR血液检测阴性的患者我们应持谨慎的态度就现阶段而言EGFR 组织学及细胞学检测仍是金标准EGFR 血浆ctDNA 检测可以作为在无法取到组织或细胞学标本时的一个有效补充及替代方法EGFR血液检测- IGNITE研究非小细胞肺癌血液EGFR基因突变检测的中国专家共识p 建议使用如下两种方法之一采集10毫升全血并进一步分离血浆： 方法内容样本收集管方法1：含有游离DNA保护剂 及防细胞裂解保护剂 的专用常温采血管方法2：常规EDTA抗凝管（严禁使用肝素抗凝管）.样本保存方法1：轻摇 混匀，常温（6-30）放置不超过5-7天方法2：轻摇 混匀，常温（6-30）放置不超过2小时血浆快速处理以足够的离心力将全血充分离心两次，从而分离出不含细胞成分的血浆，放置于-70度冻存直至DNA抽提，或直接进入DNA抽提步骤血液离体后血细胞立即溶解并释放gDNA,快速处理可降低gDNA浓度.两步离心第一步低速离心10min(800-2000g)第二步高速(或低速(i)离心10min(2000-16000g)两次离心有利于去除血浆中所有的细胞碎片p 考虑到临床实践的方便性，建议尽量采用第一种方案采集10毫升全血。

血浆分离过程中应注意避免吸入白细胞(i)第二步低速离心优于没有, 高速离心式最佳的但不是必须的EGFR血液检测样本采集和处理p 在临床允许的情况下增加血浆用量，建议使用10毫升全血分离出的血浆（4-5毫升）p 外周血游离DNA的提取有很多方法，建议采用国家药监部门批准的、大容量血浆游离DNA分离试剂盒p 检测方法的选择受到技术人员和仪器两方面影响p 商业试剂盒快速、易操作、易质控、更适用于体外诊断EGFR血液检测外周血游离DNA提取EGFR血液检测检测方法(ARMS)p欧盟批准用于指导易瑞沙治疗的血液检测方法也是ARMS检测方法pARMS法特异性较好，灵敏度有限;p但ARMS是目前唯一获得CFDA批准的血液检测方法EGFR血液检测检测报告p患者及标本基本信息pDNA质量p检测方法p检测试剂及仪器p相关临床意义p检测结果p对结果的诠释p在检测过程中出现的状况 及不确定结果和因素EGFR血液检测周期u所有专业化EGFR分子检测实验室，通过建立高效率的分子检测平台，优化流程u从接收标本到发出报告周期，建议不超过3-5个工作日，以及时满足临床的需求EGFR血液检测检测流程图Plasma(ARMS)Tumor tissue(ARMS)Total+-+24024-125062Total365086ddPCR敏感性:83.3%特异性:94%一致率:89.5%Plasma(ddPCR)Tumor tissue(ARMS)Total+-+30333-64753Total365086ARMS敏感性:66.7%特异性:100%一致率:86%Unpublished data (collaboration with Hospital of Academy of Military Medical Science) 2586位未经TK。