甲醛滴定法测定氨基氮.doc

实验二 甲醛滴定法测定氨基氮一、目的初步掌握甲醛滴定法测定氨基氮含量的原理和操作要点二、原理氨基酸是两性电解质，在水溶液中有如下平衡：-NH3 是弱酸，完全解离时 pH 为 11～12 或更高，若用碱滴定-NH 3 所释放的 H＋ 来测定氨基酸，一般指示剂变色域小于 10，很难准确指示滴定终点常温下，甲醛能迅速与氨基酸的氨基结合，生成羟甲基化合物，使上述平衡右移，促使-NH 3 释放 H＋ ，使溶液的酸度增加，滴定中和终点移至酚酞的变色域内（pH9.0 左右） 因此可用酚酞作指示剂，用标准氢氧化钠溶液滴定如样品为一种已知的氨基酸，从甲醛滴定的结果可算出氨基氮的含量如样品为多种氨基酸的混合物如蛋白质水解液，则滴定结果不能作为氨基酸的定量依据但此法简便快速，常用来测定蛋白质的水解程度，随水解程度的增加滴定值也增加，滴定值不再增加时，表明水解作用已完全三、仪器、试剂、材料1.仪器25mL 锥形瓶；碱式滴定管；吸管2.试剂（1）0.1mol/L 标准甘氨酸溶液准确称取 7.5g 甘氨酸，溶解后定容至 1000mL2）0.02mol/L 标准氢氧化钠溶液（3）酚酞指示剂(0.5%酚酞乙醇溶液) ：取 0.5g 酚酞，用 95％乙醇溶解，并稀释至 100mL，无需加水。

4）400 mL 中性甲醛溶液在 50mL36～37％分析纯甲醛溶液中加入 1mL0.5％酚酞乙醇水溶液，用 0.02mol/L 的氢氧化钠溶液滴定到微红，贮于密闭的玻璃瓶中四、操作方法1.氢氧化钠溶液标定（1）准确称取 0.08g 邻苯二甲酸氢钾；（2）用量筒准确量取 50mL 纯净水，溶解完全；（3）加入 2 滴酚酞指示剂，（4）用氢氧化钠溶液滴定，记录体积；平行做 2 次5）求消耗氢氧化钠溶液平均值，用公式计算氢氧化钠溶液浓度 2.取 3 个 25mL 的锥形瓶，编号向 1、2 号瓶内各加入 0.05mol/L 标准甘氨酸溶液 2mL 和水 5mL，混匀向 3 号瓶内加入 7mL 水然后向三个瓶中各加入 5 滴酚酞指示剂，混匀后各加 2mL 甲醛溶液再混匀，分别用 0.02mol/L 标准氢氧化钠溶液滴定至溶液显微红色重复以上实验两次，记录每次每瓶消耗的标准氢氧化钠溶液的毫升数取平均值，计算甘氨酸氨基氮的回收率3.取未知浓度的甘氨酸溶液 2mL，依上述方法进行测定，平行做几份，取平均值计算每毫升甘氨酸溶液中含有氨基氮的毫克数五、结果处理1.氢氧化钠溶液标定 CNaOH=m/(G 邻 *V) 注解：m：g；G 邻 ：204.2；V：ml2.回收率计算：实际测得量甘氨酸氨基氮回收率％＝加入理论量 ×100公式中实际测得量为滴定 1 和 2 号瓶耗用的标准氢氧化钠溶液毫升数的平均值与第 3号瓶耗用的标准氢氧化钠溶液毫升数之差乘以标准氢氧化钠的摩尔浓度，再乘以 14.008。

3.氨基氮计算：（V 未 －V 对 ） ×NNaOH×14.008氨基氮（毫克/毫升）=2公式中 V 未 为滴定待测液耗用标准氢氧化钠溶液的平均毫升数V 对 为滴定对照液（3号瓶）耗用标准氢氧化钠溶液的平均毫升数N NaOH 为标准氢氧化钠溶液的摩尔浓度六、注意事项1.标准氢氧化钠溶液应在使用前标定，并在密闭瓶中保存不可使用隔日贮在微量滴定管中的剩余氢氧化钠2.中性甲醛溶液在临用前配制，若已放置一段时间，则使用前需要重新中和3.本实验为定量实验，甘氨酸和氢氧化钠的浓度要严格标定，加量要准确，全部操作要按分析化学要求进行4.脯氨酸与甲醛作用生成不稳定的化合物，使滴定毫升数偏低而酪氨酸的滴定毫升数结果偏高七、思考题甲醛滴定法为什么不能准确测定含有多种氨基酸的样品中的氨基氮？。