大肠杆菌检测课件.ppt
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PPT模板下载： 大肠杆菌检测方法1PPT学习交流 目录概述检测方法检测原理讨论与展望2PPT学习交流 YourtextYourtextYourtext概述概述 大大肠杆杆菌菌是是人人和和动物物肠道道中中最最著著名名的的一一种种细菌菌，，主主要要寄寄生生于于大大肠内内，，约占占肠道道菌菌中中的的1%，，是是一一种种两两端端钝圆、、能能运运动、、无无芽芽孢的的革革兰氏氏阴阴性性短短杆杆菌菌大大肠杆杆菌菌能能合合成成维生生素素B和和K，，正正常常栖栖居居条条件件下下不不会会致致病病；；若若进入入胆胆囊囊、、膀膀胱胱等等处可可引引起起炎炎症症在在水水和和食食品品中中检出出，，可可认为是是被被粪便便污染染的的指指标大大肠菌菌群群数数常常作作为饮水水、、食食物物或或药物物的的卫生生学学标准准大大肠杆杆菌菌是是国国际上上公公认的的卫生生监测指指示示茵茵，，因因此此大大肠杆杆菌菌的的检测技技术显得得十十分分重重要要，，相相应出出现了了大大量量的的大大肠杆杆菌菌的的各各种种检测方方法法我我将将介介绍一一些些常常用用的的大大肠杆杆菌菌检测的的传统方方法法以以及及最最近近出出现的的新新的的检测方方法法，，为以以后后大大肠杆杆菌菌检测提提供供一一些参考。
些参考3PPT学习交流 传统检测方法检测新技术多管多管发酵法酵法滤膜法膜法平板平板计数法数法气相色气相色谱与液相色与液相色谱法法ATP生物生物发光技光技术PCR检测技技术生物生物传感器感器检测技技术免疫磁珠技免疫磁珠技术IMS基因芯片技基因芯片技术自自动化化仪器器4PPT学习交流 YourtextYourtextYourtext检测原理原理 多多管管发酵酵法法是是一一种种检测食食品品及及水水体体中中大大肠杆杆菌菌的的传统方方法法这种种方方法法是是将将样品品接接种种于于LST肉肉汤中中在在37℃℃±1℃℃的的条条件件下下培培养养24±2h，，之之后后对产气气样品品进行行复复发酵酵；；复复发酵酵是是将将初初发酵酵中中产气气样品品接接种种于于EC肉肉汤中中，，44.5±0.2℃℃条条件件下下培培养养24±2h，，若若产气气则进行行平平板板分分离离培培养养多多管管发酵酵法法对试验条条件件要要求求不不高高，，成成本本低低，，但但是是检检测测时时间间较较长长，，容容易易受受其其他他条条件件干干扰扰，，进进而而影响到影响到测测定定结结果的精确度果的精确度5PPT学习交流 YourtextYourtextYourtextYourtext检测原理原理 滤膜膜法法适适用用于于水水质监测，，是是首首先先于于滤器器内内加加入入10mL无无菌菌稀稀释水水，，接接着着将将适适量量充充分分混混匀匀的的待待检食食品品的的水水溶溶液液加加入入滤器器中中，，进行行抽抽滤，，快快滤完完前前加加少少许无无菌菌稀稀释水水以以冲冲洗洗滤器器内内壁壁，，使使水水溶溶液液内内的的细菌菌全全部部集集中中于于滤膜膜上上；；用用灭菌菌镊子子夹取取滤膜膜边缘部部分分，，移移放放在在M-FC培培养养基基上上,滤膜膜截截留留细菌菌面面向向上上，，滤膜膜与与培培养养基基完完全全紧贴不不能能有有气气泡泡，，将将培培养养皿皿紧密密盖盖好好后后，，置置于于能能准准确确恒恒温温于于44.5±0.5℃℃的的恒恒温温培培养养箱箱中中,经24±2h培培养养，，粪大大肠菌菌群群呈呈蓝色或色或蓝绿色色,计数此数此类菌落数目。
菌落数目6PPT学习交流 YourtextYourtextYourtextYourtext检测原理原理 平平板板计数数法法首首先先选取取较适适宜宜的的连续稀稀释梯梯度度样品品匀匀液液，，将将冷冷却却至至45℃℃±0.5℃℃的的结晶晶紫紫中中性性红胆胆盐琼脂脂（（VRBA））倾注注于于平平皿皿内内，，混混匀匀并并凝凝固固后后加加入入3~4mL的的VRBA-MUG覆覆盖盖平平板板表表层，，36±1℃℃下下培培养养18~24h，，之之后后在在紫紫外外灯灯下下计数数该方方法法是是将将样本本做做一一定定比比例例的的稀稀释，，其其中中的的微微生生物物被被稀稀释后后分分散散成成单个个细胞胞，，然然后后在在一一定定的的条条件件下下进行行培培养养一一直直到到生生长成成能能用用肉肉眼眼观察察的的菌菌落落，，最最后后通通过样本本数数量量和和稀稀释度度来来计算算出出单位位样本本中中的的菌菌数数本本方方法法适适用用于于除除贝类产品外的食品中大品外的食品中大肠杆菌杆菌检测7PPT学习交流 YourtextYourtextYourtextYourtext检测原理原理 气气相相色色谱法法主主要要是是将将大大肠杆杆菌菌经过一一系系列列衍衍生生化化的的前前处理理后后，，为接接下下来来的的分分析析研研究究提提供供尽尽可可能能多多的的化化学学组分分。
大大肠杆杆菌菌的的污染染程程度度可可以以用用顶空空气气相相色色谱法法来来分分析析，，其其原原理理是是利利用用食食品品密密封封系系统顶部部的的微微生生物物代代谢产物物CO2对微微 生生物物进行行分分析析这种种方方法法对食食品品质量量安安全全检测有有重重大大意意义与与上上述述传统技技术相相比比，，此此种种方方法法具具有有检测速速度度快快、、灵灵敏敏度度高高的的优点点高高效效液液相相色色谱法法（（HPLC））主主要要是是根根据据离离子子配配对反反相相层析析的的原原理理来来分分析析核核酸酸HPLC主主要要是是针对DNA片片段段分分离离长链DNA所所携携带的的磷磷酸酸基基团比比较多多，，因因此此会会有有更更多多的的 TEAA与与 之之 相相 融融 合合 ，， 其其 在在 柱柱 内内 停停 留留 的的时 间增增 加加 8PPT学习交流 YourtextYourtextYourtextYourtext检测原理原理 ATP生生物物发光光技技术是是近近些些年年来来发展展较快快的的微微生生物物快快速速检测方方法法ATP是是活活细胞胞中中最最普普遍遍的的能能量量代代谢产物物，，为细胞胞提提供供各各种种生生理理活活动所所需需的的能能量量，，而而且且其其在在生生物物体体内内含含量量维持持在在一一定定的的范范围内内。
ATP含含量量检测的的一一种种方方法法是是荧光光光光度度法法，，生生物物发光光是是活活细胞胞在在荧光光素素酶催催化化下下发出出的的荧光光与与传统检测方方法法相相比比，，不不同同之之处在在于于几几分分钟内内便便可可获得得检测结果果，，而而且且荧光光光光度度计是是便便携携式式的的，，使使用用非非常常方方便便，，适适用用于于现场检测，，这种种技技术可可以以用用于于检测微微小小的的污染染物物水水平平以及食品加工以及食品加工设备及其表面的清及其表面的清洁程度的程度的检测9PPT学习交流 YourtextYourtextYourtextYourtext检测原理原理 PCR检测技技术是是在在1971年年首首先先被被Kleppe等等提提出出，，1985年年才才作作为一一种种检测方方法法获得得认可可PCR检测技技术是是一一种种聚聚合合酶链反反应，，其其采采用用变性性—退退火火—延延伸伸三三个个步步骤使使DNA基基因因能能够在在体体外外实现解解旋旋解解链，，类似似于于一一种种体体外外增增加加、、复复制制形形式式史史云云等等建建立立了了用用于于肉肉及及肉肉制制品品中中大大肠杆杆菌菌的的两两重重PCR检测方方法法，，但但该方方法法需需要要较长的的时间的的样品品纯化化处理，且理，且对操作人操作人员的的专业知知识的要求也的要求也较高。
高10PPT学习交流 YourtextYourtextYourtextYourtext检测原理原理 生生物物传感感器器主主要要是是以以生生物物化化学学传感感技技术为基基础，，用用抗抗体体、、酶、、细胞胞等等作作为识别元元件件，，并并与与信信号号转换器器和和电子子测量量仪联合合构构成成的的一一种种分分析析工工具具目目前前已已经成成熟熟的的商商品品化化的的传感感器器有有免免疫疫传感感器器、、酶传感感器器、、DNA杂交交传感感器器、、微微生生物物传感感器器、、分分子子印印迹迹传感感器器等等生生物物传感感器器具具有有诸多多优点点，，如如高高灵灵敏敏度度、、高高选择性性、、较好好的的稳定定性性、、低低成成本本、、且且能在复能在复杂的体系中快速在的体系中快速监测11PPT学习交流 YourtextYourtextYourtextYourtext检测原理原理 免免疫疫磁磁珠珠技技术是是一一种种大大肠杆杆菌菌的的分分离离技技术其其原原理理是是以以磁磁珠珠为抗抗体体载体体，，磁磁珠珠和和大大肠杆杆菌菌结合合，，通通过磁磁力力来来实现力力学学移移动进而而将将大大肠杆杆菌菌进行行分分离离。
与与其其他他的的细菌菌分分离离方方法法相相比比，，免免疫疫磁磁珠珠技技术在在很很大大程程度度上上提提高高了了样本本中中病病原原性性副副溶溶血血性性弧弧菌菌的的检测效效率率免免疫疫磁磁珠珠技技术可可以以快快速速地地在在不不同同菌菌种种的的样本本中中处理理不不同同的的微微生生物物，，该方方法法可可以以大大幅幅度度地提升地提升检测效率12PPT学习交流 YourtextYourtextYourtextYourtext检测原理原理 自自动免免疫疫测定定分分析析仪诞生生于于20世世纪70年年代代随随着着科科技技的的发展展，，自自动免免疫疫测定定分分析析仪在在各各领域域的的应用用也也越越来来越越多多，，该仪器器使使用用简单，，无无太太多多操操作作干干扰，，既既省省时省省力力，，又又大大大大提提高高了了检测的的精精确确度度和和灵灵敏敏度度这种种自自动酶标免免疫疫测试系系统目目前前在在国国内内外外是是酶免免疫疫自自动化化系系统中中应用用最最为广广泛泛的的一一种种但但是是由由于于与与其其配配套套的的试剂昂昂贵，，从从而而限限制制了了其其在在基基层实验室的使用室的使用13PPT学习交流 YourtextYourtextYourtextYourtext检测原理原理 基基因因芯芯片片技技术(gene chip)是是20世世纪90年年代代兴起起的的生生物物技技术，，也也叫叫DNA微微阵列列(DNA mi—croarray)。
采采用用原原位位合合成成(insitu synthesis)或或显微微打打印印方方法法，，将将数数以以万万计的的DNA探探针固固化化在在支支持持物物表表面面，，产生生二二维DNA探探针阵列列，，接接着着与与标记的的样品品进行行杂交交，，通通过检测杂交交信信号号来来实现对生生物物样品品快快速速、、并并行行、、高高效效地地检测，，由由于于它它常常用用硅硅芯芯片片作作为固固相相支支持持物物，，而而且且制制备中中运运用用了了计算算机机芯芯片片的的制制备技技术，，所所以以称称为基基因因芯芯片片技技术基基因因芯芯片片可可以以对食食品品中中的的致致病病菌菌实行行高高通通量量和和平平行行检测，，一一次次实验就就可可以以得得出出全全部部检测结果果另另外外整整个个检测在在很很短短时间内内即即可可得得出出检测结果果，，且且敏敏感性高，特异性感性高，特异性强14PPT学习交流 YourtextYourtextYourtextYourtext讨论与展望与展望 近年来，世界各国近年来，世界各国针对水水环境和食品中大境和食品中大肠杆菌的杆菌的快速快速检测技技术展开了大量研究，在已知的展开了大量研究，在已知的检测方法中均方法中均有自己的有自己的优势与不足。
随着科学和生物生化技与不足随着科学和生物生化技术的的发展，展，食品中大食品中大肠杆菌的杆菌的检测计数也将数也将趋于提高精度与速度，于提高精度与速度，不断改不断改进与完善才能切与完善才能切实解决食品安全解决食品安全问题，，为人品生人品生活提供保障活提供保障15PPT学习交流 YourtextYourtextYourtextYourtext参考文献参考文献[1] 4种食品中大肠杆菌检测方法评价.周宏霞.[2]关于食品中大肠杆菌检测方法的研究.姚勇.[3]食源性大肠杆菌快速检测技术研究进展.董妍.[4]水中细菌总数与大肠杆菌检测方法的比较研究.黄友芳.[5]GB4789.38-2012 食品微生物学检测 大肠埃希氏菌计数[6]HJ/T 347-2007 水质 粪大肠菌群的测定[7]快速检测大肠菌群数的研究.徐尔尼.16PPT学习交流 Thankyou!17PPT学习交流 。
