单细胞藻类的培养液概要.doc

第六节 单细胞藻类的培养液藻类的生长繁殖需要吸收各种营养元素，单细胞藻类的培养液必须具备这些营养元素,而且在营养成分和数量上都应该符合藻类的需要，各种藻类对营养的需要有很多共同点，所以一些培养液配方，能应用于多种藻类的培养然而，藻类的不同种类，对营养的要求是有差别的，各有其特殊性，不同种类的培养液配方，当然也应该不同只有较好地符合培养种类需要的配方，才可能获得较理想的效果一个培养液配方的提出，首先必须了解这种藻类对营养的要求，要达到这一点，进行一系列的试验是必要的还必须在使用中验证配方的效果，并在实践过程中不断总结经验，加以改进，使配方达到更理想的水平 本节内容分培养液成分、培养液配方和培养液的配制三部分 一、培养液成分 单细胞藻类培养液的成分有下列七类 (一)大量元素 1．氮(N) 单胞藻培养液常用的氮源有硝酸钾(KNO3)、硝酸钠(NaNO3)、尿素(NH2CONH2)、硝酸铵(NH4NO3)、硝酸钙[Ca(NO)3)2]、氯化铵(NH4C1)、硫酸铵[(NH4)2SO4]、发酵人尿……等其中以硝酸钠和硝酸钾最常用但不同的藻类对硝酸态氮和铵态氮的吸收利用情况是不同的，必须根据不同的藻类选择合适的氮源。

2．磷(P) 单胞藻培养液常用的磷源有磷酸二氢钾(KH2PO4)、磷酸二氢钠、(NaH2PO4)、磷酸氢二钾(K2HPO4)、磷酸氢二钠(Na2HPO4)4种海水单胞藻培养液应用磷酸二氢钾，如用磷酸氢二钾所配培养液会产生大量沉淀 3．铁(Fe) 单胞藻培养液常用的铁源有三氯化铁(FeCl3)、硫酸铁(FeSO4)、硫酸高铁[Fe2(SO4)3]、氧化铁(FeO)、柠檬酸铁(FeC6H5O7)、柠檬酸铁铵[Fe(NH4)3(C6H5O7)]等其中最常用的是三氯化铁和柠檬酸铁无机铁在水中容易形成一种胶体复合物，无可逆反应，不能为生物利用铁也容易产生沉淀所以尽管铁在数量上所需很少，但要满足藻类需要却很困难要保持溶液中可利用态铁的数量，通常采用3种方法，这些方法都取得一定的成功，但都不够十分完善 (1)在培养液内加入土壤抽出液：由于自然有机质(一般称为腐殖酸)的作用阻止了铁的沉淀和溶胶化(Pringsheim，1963) (2)在培养液内加入某种有机酸或其盐类以形成可溶性铁化合物：已证明较有效的有柠檬酸盐和酒石酸盐：迈尔(Myers，1947)证实应用硫酸铁和柠檬酸钠能使小球藻生长十分良好。

(3)应用络合剂：最常用的为乙二胺四乙酸(EDTA)，络合剂能防止铁和微量营养元素沉淀，并按照质量作用定律释放出足够数量的离子供藻细胞利用 由于无机铁容易形成胶体复合物和沉淀，而有机铁，如柠檬酸铁、酒石酸铁等则是可溶性的，易为藻类细胞利用，在培养液配方中可使用有机态铁代替无机态铁 因藻类对铁元素需要量不大，也有部分科学工作者，把铁列为微量元素 4．钾(K) 单胞藻培养液中钾的来源常用的有氯化钾(KCl)、硝酸钾(KNO3)、磷酸二氢钾(KH2PO4)、磷酸氢二钾(K2HPO4)等一般培养液中由于氮、磷元素的加入，也附带加入了钾营养元素除此以外，可再加入氯化钾5．镁(Mg) 培养液中镁的来源，常用的是硫酸镁(MgSO4)和氯化镁(MgCl2)两种可以单独使用其中一种，也可两种同时使用镁元素在天然海水中的含量很大(1 200mg/L以上)，一般是足够的①湛水101号培养液（湛江水产学院）：NaNO30.03g维生素B1200µgCo(NH2)2 0.03g维生素B12 200mµgKH2PO4 0.005g 人尿 1.5mlFeC6H5O7(1%溶液) 0.2ml 海水1 000ml培养绿藻类、金藻类、硅藻类……使用。

在培养硅藻时应加入0.02g/L硅酸钠②ASP2培养液[Provasoli,L.;McLaughlin,J.J.A.;Droop,M.R.1957]:NaCl1.8gNnCl20.12mgMgSO4·7H2O0.5gCoCl20.3µgKCl0.06gCuCl20.12µgCaC1210.0mgH3BO30.6mgNaNO35.0mg维生素B120.1µgK2HPO40.5mg维生素溶液S3（参考第70页）1.0mlNa2SiO3·10H2O15mgNa2EDTA3.0mg三[羟甲基]氨基甲烷0.1mgFeCl30.08mg纯水100mlZnCl315µgpH7.6~7.8培养绿藻类、金藻类、蓝藻类、隐藻类、涡鞭藻类使用2）绿藻培养液配方：①海洋三号扁藻培养液（海洋研究所，1960）：NaNO30.1g2Na3C6H5O7·11H2O0.02gKH2PO4 0.01g Fe(SO4)3(1%溶液)10滴 海水1 000ml ②亚心形扁藻培养液（湛江水产学院）：NaNO30.05g维生素B12200mµgKH2PO4 0.005g 人尿 2mlFeC6H5O7(1%溶液) 0.2ml维生素B1200µg 海水1 000ml培养成亚心形扁藻及其他绿藻使用，多用于小型培养和中继培养，如能加入海泥抽出液20ml，效果更好。

③亚心形扁藻培养液（厦门水产学院）：（NH4）2SO4200mg海泥抽出液V（参考第60页）20ml过磷酸钙[Ca(H2PO4)2·H2O+2(CaSO4·H2O)]30mgFeC6H5O7(1%溶液) 0.5ml 海水1 000ml 过磷酸钙溶液的配制：取含有效磷为16%的普通二级过磷酸钙配成3%的母液，过滤，使用时每1000ml海水加入1ml培养过程中以追肥形式分2次加入0.2%人尿液效果更好④布彻（Butcher）培养液[Butcher，（1959）]：NaNO30.1g土壤抽出液50mlK2HPO40.05g海水1000ml培养扁藻使用⑤盐藻培养液：甲液：K2HPO40.05gNaCl5~10gFeC6H5O70.001g海水500ml海泥抽出液V（参考第60页）20~30ml乙液：海水500mlNaNO30.5g使用时，将甲、乙两液混合如果再加入0.2%~0.3%人尿，效果更好⑥赫特纳（Hutner）培养液[Hutner,S.H.(1950)]：NaCl0.25~4gK2HPO420mgMgSO4·7H2O0.25g醋酸钾0.2gCa(NO3)2·4H2O15mg甘氨酸0.25gEDTA0.05gZn3.0mgFe0.6mgCu0.5mgMn1.0mg纯水100mlMo1.0mgpH7.5 培养盐藻使用。

⑦赖瑟（Ryther）培养液[Ryther，J.(1954)]:NaCl2.67gNa3HPO4·12H2O2.0mgMgCl2·6H2O0.22gNa2SiO3·9H2O2.0mgMgSO4·7H2O0.32gNa2C6H5O7·2H2O0.02mgKCl73mgKBr5.8mgNaHCO320mgB1.0mgNH4Cl5.3mg纯水100mlCaCl2150mg培养微绿球藻和Stichococcus使用⑨屋岛改良培养液（平田八郎，1980）：过磷酸钙[Ca(H2PO4)2·H2O]+2(CaSO4·H2O)50g硫酸铵（NH4）2SO4300g海水1m3大量培养海产小球藻使用3）硅藻培养液配方：①艾伦—内尔森（Allen-Nelson）培养液[Allen,E.J.et al(1910)]:A.KNO320.2g纯水100mlB.Na2HPO4·12H2O4.0gCaCl2·6H2O4.0gHCl(浓)2.0ml纯水80mlFeCl32.0mlB 液的配制法：先把氯化钙4g溶解于40ml纯水中另外把磷酸氢二纳4g溶解40ml纯水中，再把三氯化铁溶融液2ml，缓慢滴入，摇动，产生白色沉淀，加热，缓滴入浓盐酸2ml，沉淀的白色沉淀即重新溶解。

把以上两溶液混合使用时，取A液2ml和B液1ml，加入1000ml海水中，充分混合后加热消毒，消后静置24h，然后将上层清液倒出使用②卢因（Lewin）培养液[Lewin,J.C.;Lewin,L.A.(1960)]:Ca(NO3)2·4H2O0.02gZn0.1mgK2HPO40.05gB0.1mgNa2SiO3·9H2O0.5mgCo0.1mg胰蛋白1.0gCu0.1mg维生素B121.0µgMo0.1mgFe0.3mg海水1000ml③米奎尔（Miquel）培养液[Miquel,P.(1890~1893)]:A.MgSO410gKI0.2g NaCl10g纯水100ml Na2SO45gB.Na2HPO4·12H2O4g NH4NO31gCaCl2·6H2O4g KNO32gFeCl3(溶融)2ml NaNO32gHCL(浓)2ml KBr0.2g 纯水80ml每1000ml海水加入A液2ml，B液1ml④须藤培养液[须藤俊造（1959）]：NaCl24gNaHCO30.168gMgSO4·7H2O8gNa2SiO30.008gKCl0.7gP1（参考第70页）1mlCaCl2·2H2O0.37g维生素B120.02µgNaNO30.1gNa2HPO4·12H2O0.125g纯水1000ml 培养中肋骨条藻使用。

⑤廖氏改良培养液（转引自张立言等，1989）：KNO360mgNaSiO310mgNa2HPO4·12H2O10mg海水1000ml培养中胁骨条藻用⑥中胁骨条藻培养液（厦门大学）：KNO30.4gNaSiO30.02gNa2HPO4·12H2O0.04gFeSO4·7H2O0.014g土壤抽出液15ml4~5国际单位“920”植物生长刺激素海水1000ml⑦硅藻培养液（湛江水产学院）：NaNO30.08g维生素B1200µgK2HPO40.008g维生素B12200mµgFeC6H5O7(1%溶液)0.2ml人尿1.5mlNa2SiO30.02g海水1000ml培养三角褐指藻、小新月菱形藻、钙质角毛藻、牟氏角毛藻使用⑧牟氏角毛藻培养液（黄海水产研究所）：NH4NO35~20mgFeC6H5O7·3H2O0.5~2.0mgKH2P。