灵芝三萜类物质抗高血压实验研究.doc

1灵芝三萜类物质抗高血压实验研究作者：刘冬 孙海燕 李世敏【关键词】 灵芝；,,三萜类物质；,,降压；,,子实体；,,菌丝体摘要：目的研究灵芝三萜类物质对原发性高血压大鼠（spontaneously hypertensive rats, SHR）的降压作用方法以 SHR 和正常 wistarkyoto(WKY)大鼠为实验对象，1 次 ig 给药，观察灵芝三萜类物质对 SHR 和 WKY 血压的影响结果给药剂量分别为 450 mg/kg （体重） 和 900 mg/kg（体重）时，灵芝三萜类物质对SHR 大鼠具有显著降压效果 （P＜0.05 或 P＜0.01），3 h 后降压幅度分别达（20.5±11.9）mmHg 和（25.1±13.8）mmHg；给药 3 h 后 SHR 血压降至最低点，此后15 h 内血压趋于稳定，15 h 后 SHR 血压开始回升，至 21 h 血压基本恢复到给药前水平，且灵芝三萜类物质对正常 WKY 大鼠无明显降压作用相同质量（45 g）灵芝子实体和菌丝体灵芝三萜提取物喂食 SHR 大鼠，子实体提取物具有明显降压效果（P＜0.05），而菌丝体提取物降压效果不明显。

结论 灵芝三萜类物质对 SHR大鼠具有明显的降压作用关键词：灵芝； 三萜类物质； 降压； 子实体； 菌丝体Study on Antihypertensive Effect of Triterpenes From Ganoderma lucidum in vivoAbstract：ObjectiveTo study the antihypertensive effect of triterpenes on spontaneously hypertensive rats (SHR) in vivo. MethodsThe systolic blood pressure (SBP) of the SHR and the WKY were measured after taking different doses by ig. ResultsThe results showed that triterpenes markedly reduced the systolic blood pressure (SBP) of SHR at a single dosage of 900 mg/kg body weight or 450 mg/kg body weight, the SBP decreased to （20.5±11.9）mmHg and （25.1±13.8）mmHg at 3 h after administration respectively, the effect was maximal at 3 h after administration 2and could last 15 h, SBP began to rise at 15 h and returned to initial level at 21 h after administration. However, the triterpenes did not change the SBP of normotensive Wistar-Kyoto (WKY) rats significantly. Triterpenes extract from fermented mycelia could not reduce the SBP of SHR significantly, compared with the antihypertensive effect of the extract from the fruiting body of the same quality. ConclusionGanoderma triterpenes have the antihypertensive effect on SHR in vivo. Key words：Ganoderma lucidum; Triterpene; Antihypertension; Fermented mycelia; Fruiting body灵芝在我国已有两千多年的药用历史。

它具有增强机体免疫力、抗肿瘤、抗衰老、治疗和预防心血管疾病等多种功效灵芝中最主要的活性成分是灵芝多糖和灵芝三萜灵芝多糖的增强机体免疫力等功效已通过大量的研究报道而得到公认灵芝三萜（triterpenes）是近年来从灵芝中分离得到的另一类具有广泛药理活性的物质，是当今灵芝研究的又一热点研究表明灵芝三萜具有保肝护肝、抗肿瘤、抗HIV1 及 HIV1 蛋白酶活性、抑制胆固醇合成、镇痛、降血脂等多种药理作用［1］此外，Morigiwa 等［2］还报道从红芝的 70%乙醇提取物中分离出的 8 种灵芝三萜具有体外抑制猪肾血管紧张素转化酶（agiotensin converting enzyme, ACE）活性的作用ACE 的高活性是高血压病发病的重要因素，因此推断灵芝三萜可能具有体内降低血压功效，但至今未见灵芝三萜降血压效果动物实验研究报道本文针对这一问题，研究了灵芝三萜类物质的体内降压作用，并比较了灵芝菌丝体和子实体的降压效果1 器材1.1 药品1.1.1 灵芝子实体由赤芝 Ganoderma lucidum As.565 栽培，为成熟期子实体，菌种由中科院广州微生物研究所提供31.1.2 灵芝菌丝体由赤芝菌种 As.565 按文献介绍的方法（无锡轻工大学，王林，2004 硕士论文《灵芝酸发酵及抗慢性支气管炎活性研究》）经深层液体培养制得，培养时间 100 h。

1.1.3 灵芝三萜类物质粗样品称取粉碎、烘干灵芝子实体，按 1∶50（m/m）加入无水乙醇，超声 1 h，45℃水浴回流浸提 24 h，0.45 μm 滤膜过滤，滤液 45℃减压浓缩得黑色浸膏，浸膏复溶于 CHCl3 中，用饱和 NaHCO3 溶液(体积比为 1∶1)萃取3 次，取 NaHCO3 溶液层，用 6 mol/L 盐酸酸化至 pH 3～5 后用等量 CHCl3 再萃取 3 次，合并 CHCl3 层，减压浓缩得淡黄色粉状固体，即为灵芝三萜（酸性组分）组样品用分光光度法［3］测定粗样中灵芝三萜物质含量1.1.4 卡托普利（Captopril）汕头金石制药总厂生产，批号 0501061.2 动物原发性高血压大鼠 SHR 和正常血压大鼠 WKY，12 周龄，体重250～300 g，全部为雄性，由上海斯莱克实验动物有限责任公司〔（许可证号：SGXK（沪）20020010〕提供标准颗粒饲料喂养1.3 仪器多道生理信号采集处理系统 RM－6240BD，四川成都仪器厂；恒温电子烘箱，上海医疗器械厂 2 方法2.1 动物筛选 SHR 大鼠 50 只，测量尾动脉血压，收缩压高于 180 mmHg 用于实验，低于 180 mmHg 的予以剔除；最终 40 只符合实验要求。

WKY 大鼠 30 只，测量尾动脉血压，收缩压低于 140 mmHg 的用于实验，高于 140 mmHg 的予以剔除；最终 24 只符合实验要求所有大鼠分笼饲养，每笼 2 只，均自由饮水进食，活4动不限温度：(25±1)℃，湿度：(55±5)％，光照和黑暗各 12 h所有大鼠均于实验前训练 1 周后开始正式实验2.2 大鼠血压测量方法采用尾动脉容积法［4］测量收缩压（systolic blood pressure，SBP），以 mmHg 表示（1 mmHg≈0.133 kPa）2.3 统计分析数据均以±s 表示，采用组间 t 检验，P＜0.05 为具有显著的统计学差异2.4 灵芝三萜降压效果实验2.4.1 不同剂量灵芝三萜对 SHR 血压影响取 SHR 大鼠 24 只，均衡随机分为5 组：①空白对照组；②灵芝三萜大剂量组（900 mg/kg）；③灵芝三萜中剂量组（450 mg/kg）；④灵芝三萜小剂量组（225 mg/kg）；⑤卡托普利组（10 mg/kg）各组分别测定给药前收缩压灵芝三萜组和卡托普利组灌胃给药 1 次，空白对照组给予等量生理盐水，分别测定各组给药后 3 h 的血压计算给药前后血压变化的差值进行统计。

结果见表 12.4.2 单次给药后 SHR 大鼠 24 h 血压变化测定取 SHR 大鼠 16 只，均衡随机分为 2 组：①空白对照组；②灵芝三萜组（450 mg/kg）分别灌胃给予生理盐水和灵芝三萜粗样 1 次，测定给药后 24 h 内血压变化情况2.4.3 灵芝三萜对 WKY 大鼠血压的影响 WKY 大鼠 24 只，均衡随机分为 3 组：①空白对照组；②灵芝三萜组（450 mg/kg），③卡托普利组（10 mg/kg）灵芝三萜组和卡托普利组灌胃给药 1 次，空白对照组给予等量生理盐水，分别测定各组给药后 24 h 内血压变化情况结果见图 252.4.4 灵芝子实体和菌丝体三萜类物质降压效果比较分别取 45 g 灵芝子实体和菌丝体按 1.1 方法制备灵芝三萜粗样（灵芝三萜类物质含量分别为（0.47 g 和0.13 g），提取物分别全部溶于 5 ml 水中SHR 大鼠 24 只，均衡随机分为 3 组：①空白对照组；②灵芝子实体三萜组；③灵芝菌丝体三萜组各组分别测定给药前收缩压灵芝三萜各组灌胃给药 1 次，空白对照组给予等量生理盐水，测定给药3h 后血压变化计算给药前后血压变化的差值进行统计。

3 结果3.1 不同剂量灵芝三萜对 SHR 血压的影响见表 1表 1 不同剂量灵芝三萜类物质对 SHR 血压的影响（略）与空白对照组比较， *P＜0.05，**P＜0.01；n=8结果表明，与空白对照组相比，灵芝三萜小剂量组给药前后血压变化无显著性差异(P＞0.05)；灵芝三萜中剂量组可以明显降低 SHR 大鼠血压（P＜0.05），灵芝三萜大剂量组药后 3 h 血压降低幅度达(25.1±13.8) mmHg，呈非常显著变化（P＜0.01），且用药剂量和效果之间存在着较好的量-效关系表明，灵芝三萜类物质不但具有如文献报道的体外抑制 ACE 生物学活性，而且具有高效的体内降血压活性3.2 灵芝三萜单次给药后 SHR 大鼠 24 h 血压变化见图 1图 1 单次给药后 24 h 内 SHR 收缩压的变化（略）结果表明，空白对照组 SHR 24 h 血压都处于较平稳状态SHR 大鼠给药后血6压开始下降，3 h 降至最低点（179.2±9.3） mmHg，与空白对照组比较血压降低显著（P＜0.05），3 h 后血压不再继续下降，从 3 ～15 h 血压趋于稳定，从第 15 h 血压开始上升，直至 21 h 时，血压基本恢复给药前水平。

3.3 灵芝三萜对 WKY 大鼠血压的影响见图 2图 2 单次给药后 24 h 内 WKY 收缩压的变化（略）图 2 显示，空白组 WKY 大鼠自身血压在 24 h 之内变化范围在 117～121 mmHg 之间，但呈不显著性波动（P＞0.05）灵芝三萜给药组，给药后 3h 血压降至最低点血压（117.0±4.3） mmHg，但与空白组比较血压降低无显著性差异（P＞0.05）卡托普利组，给药后 4h 血压降至最低点血压（113.8±7.6） mmHg，与空白组比较也无显著性差异（P＞0.05）说明，灵芝三萜类物质对正常大鼠的血压无显著的降压作用3.4 灵芝子实体和菌丝体三萜类物质降血压效果比较相同质量的灵芝子实体和菌丝体经提取后，对 SHR 的降血压效果见表 2表 2 灵芝子实体和菌丝体降血压效果比较（略）与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；n=8 结果表明，相同质量（45 g）灵芝子实体和菌丝体灵芝三萜提取物喂食 SHR 大鼠，子实体提取物具有明显降压效果（P＜0.05），而菌丝体提取物降压效果不明显，其原因可能是灵芝菌丝体经过100 h 的培养，灵芝。