纸、纸板和纸制品 抗菌性能的测定-征求.docx

ICS 85. 010CCS Y 30中华人民共和I家标准GB/T XXXXX—XXXX纸、纸板和纸制品抗园性能的测定Paper, Paperboard and paper products一Determination of antibacterial activity（征求意见稿）本稿完成日期：2021年8月在提交反馈意见时，请将您知道的相关专利连同支持性文件一并附上UOHIliS 发布本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起 草请注意本文件的某些内容可能涉及专利本文件的发布机构不承担识别专利的责任本文件由中国轻工业联合会提出本文件由全国造纸工业标准化技术委员会(SAC/TC 141)归口本文件起草单位：本文件主要起草人：纸、纸板和纸制品抗菌性能测定1范围本标准规定了纸、纸板和纸制品抗菌性能的测定方法本文件适用于纸、纸板和纸制品及其原材料2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款其中，注日期的引用文件, 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。

WS/T 650-2019抗菌和抑菌效果评价方法3术语和定义下列术语和定义适用于本文件3. 1ant i bacter i a I采用化学或物理方法杀灭或妨碍微生物生长繁殖及其活性的过程4评价方法的选择原则4. 1根据产品性能选择合适的评价方法4.2吸水性较好的产品均可选择载体抗菌试验；含有溶出性抗菌成分的纸和纸板类产品可选择抑菌环 试验；含非溶出性抗菌成分的产品可选择振荡烧瓶试验4.3鉴别食品接触用纸、纸板和纸制品中的抗菌成分能否发生转移时，应选择抗菌成分转移测定试验； 高吸收性树脂及含高吸收性树脂产品，若其抗菌效果为非溶出性，应选择含高吸收性树脂产品抗菌性能 试验；具有长效抗菌作用的纸、纸板和纸制品应选择长效防霉性能试验4.4进行抗菌性能测定时，若无特殊说明，应使用方法中规定的细菌进行抗菌性能检测，若标明对真 菌或其他微生物有抗菌作用，则还应使用方法中规定的真菌或其他微生物进行抗菌性能检测5载体抗菌试验5. 1适用范围适用于吸水性较好的纸、纸板和纸制品及原材料的抗菌性能检测，当在尺寸为2.0cmx3.0cm的试样 （试样可叠放，但片数不得超过3片）表面滴加lOOpL菌悬液时，菌悬液应被试样完全吸收。

自身含有 抗菌效果或含有可溶出性抗菌成分的样品均可选择载体抗菌试验如抗菌纸巾、棉柔巾等5. 2试验材料5. 2. 1培养基和试剂试验所用试剂应为分析纯或适合于微生物试验用注：建议使用现有商业化的脱水原料制备培养基，并严格按照相关产品制造商的使用说明操作5.2. 1.1营养琼脂培养基蛋白月东 氯化钠 牛肉膏 琼脂蒸馅水log5g3g 15g〜20g lOOOmL5.2. 1.2沙氏琼脂培养基蛋白腺 葡萄糖 琼脂蒸馄水10g40g20glOOOmL5.2. 1.3磷酸盐缓冲液(PBS)2.83g1.36glOOOmL磷酸氢二钠 磷酸二氢钾 蒸馋水 灭菌后，pH为7.2〜7.4, 2C〜8C保存备用5. 2. 2试验器具5.2.2. 1 II级生物安全柜5. 2. 2. 2恒温培养箱：温控精度1 C5. 2. 2. 3旋涡式振荡器5. 2. 2. 4高压蒸汽灭菌锅5. 2. 2. 5试管、烧杯、锥形瓶、接种环、移液器等实验室常用器具5. 2. 3试验菌5.2.3. 1细菌：大肠杆菌(8099或CICC 10899)或大肠杆菌(ATCC 25922)，金黄色葡萄球菌(ATCC 6538 或 ATCC 25923)。

5. 2. 3. 2 真菌：白色念珠菌(ATCC 10231)5. 2. 3. 3根据产品特定用途所需用的其他菌株5. 3试样、对照样和菌悬液制备5. 3. 1试样在无菌条件下打开试样包装，避开样品边缘，将试样剪成2.0 cmX3.0 cm的小块，一份试验样的厚 度应确保试验过程中的菌悬液被完全吸收，如被测试样品厚度无法满足要求，可适当增加每份试样的片 数(但不可超过3片)若试样需进行灭菌处理，可采用高压灭菌法(121C, 103kPa, 15min),如果 高压灭菌法不适用，可采用环氧乙烷或其他合适方法对试样进行灭菌若试样进行过灭菌处理，应在报 告中注明灭菌方式5.3.2对照样可选用与待测样品同等材质、同等大小但未经抗菌处理的样品作为对照样，此时，试验中对照样的 层数应与试样相同；也可选用经验证对微生物生长不产生影响的纸或纸板(如不含抗菌成分、回收菌数 >90%的纸样)，将其裁剪成与待测试样同等大小，作为对照样对照样应经高压消毒灭菌(121103kPa, 15min）,如果高压灭菌法不适用，可采用环氧乙烷或其他合适方法进行灭菌报告中应注明 对照样品的种类和灭菌方式5. 3.3菌悬液的制备取菌株第2代〜5代的营养琼脂培养基（真菌为沙氏琼脂培养基）新鲜斜面培养物（18h〜24h）,用 5.0mL PBS洗下菌苔，使菌悬浮均匀后用PBS稀释至适宜浓度，每份对照组回收菌数应为1.0X 104CFU~5.0X104CFUo5. 4试验步骤取试验样片和对照样片各1份，分别置于无菌平皿内，用新鲜制备的菌悬液分别在试验样片与对照 样片上均匀滴加lOOpL,开始计时，作用至说明书规定的时间（最长不得超过120 min）,用无菌镶子将 试验样片和对照样片分别放入5mLPBS中，充分混匀，进行10倍系列稀释，选择适宜稀释度，吸取0.5mL 接种平皿，每个稀释度接种2个平皿，将冷却至40C〜45C的熔化营养琼脂培养基（细菌）或沙氏琼脂培 养基（真菌）倾注于已加入样液的平皿中，每平皿15mL〜20mL,转动平皿，使其充分混匀，琼脂凝固 后翻转平皿，36C1C培养48h （细菌）或72h （真菌），进行活菌菌落计数。

试验重复3次，分别计算 抑菌率5.5计算公式按公式（1）计算抑菌率：100% （1）强式中：K——抑菌率（%）；虬——对照样平均回收菌落数，单位为每份对照样菌落形成单位（CFU）；Ns——试样平均回收菌落数，单位为每份试样菌落形成单位（CFU） o选择菌落数在20 CFU〜200 CFU之间的平板计数菌落数，若所有稀释度的平板菌落数均小于20 CFU,则选用最低稀释倍数菌落数计算结果3次重复试验分别计算抑菌率，抑菌率结果修约至小数点后第一位若被测试样各稀释度菌落数均 为0,则抑菌率记为＞99.9%5.6结果判定5.6.1各次抑菌率均N50%,即可认定该样品相对于对照样具有抗菌效果5. 6.2各次抑菌率均390%,即可认定该样品相对于对照样具有较强的抗菌效果5.7注意事项试验过程中，生活用纸产品（如抗菌纸巾纸）作用时间不应超过5 min；其他产品不应超过120 min6抑菌环试验6. 1适用范围适用于含溶出性抗菌物质，且可制成直径为5.0mm、厚度不超过4.0mm的片（块）状物的纸、纸板 和纸制品的抗菌性能检测；也可用于鉴别抗菌产品中是否含有可溶性抗菌物质6. 2试验材料6. 2. 1培养基和试剂同 5.2.U6. 2. 2试验器具6. 2. 2. 1 II级生物安全柜。

6. 2. 2. 2恒温培养箱：温控精度lCo6. 2. 2. 3旋涡式振荡器6. 2. 2. 4高压蒸汽灭菌锅6. 2. 2. 5游标卡尺6. 2. 2. 6试管、烧杯、锥形瓶、接种环、移液器等实验室常用器具6. 2. 3试验菌同 5.2.3o6. 3试样、对照样和菌悬液制备6. 3. 1试样在无菌条件下打开试样包装，避开样品边缘，将试样制成直径为5.0mm、厚度不超过4.0mm的圆片 （块）,每4片（块）一组若试样需进行灭菌处理，可采用高压灭菌法（121C, 103kPa, 15min）, 如果高压灭菌法不适用，可采用环氧乙烷或其他合适方法对试样进行灭菌若试样进行过灭菌处理，应 在报告中注明灭菌方式6.3.2阴性对照样可选用与待测样品同等材质、同等大小但未经抗菌处理的样品作为阴性对照样，此时，试验中对照 样的层数应与试样相同；也可选用经验证不含溶出性抑菌成分的纸或纸板（如不定性滤纸），将其制成 与待测试样同等大小，作为阴性对照样阴性对照样应经高压消毒灭菌（121C, 103kPa, 15min）, 如果高压灭菌法不适用，可采用环氧乙烷或其他合适方法进行灭菌报告中应注明对照样品的种类和灭 菌方式。

6.3.3试验的接种取菌株第2代〜5代的营养琼脂培养基（真菌为沙氏琼脂培养基）新鲜斜面培养物（18h〜24h）,用 PBS洗下菌苔并做适当稀释，制成浓度为5x 105CFU/mL~5x 106CFU/mL的菌悬液，用无菌棉拭子蘸取该 菌悬液在适宜的培养基平板表面均匀涂抹3次每涂抹1次，平板应转动60 ,最后将棉拭子绕平板边缘 涂抹一周盖好平板，置室温干燥5min6.4试验步骤每次试验贴放1个染菌平板，每个平板贴放4片试验样片，1片阴性对照样片，共5片用无菌镶子取 样片贴放于平板表面，阴性对照样片贴于平板中心位置，试验样片贴于四周各样片中心之间相距25 mm 以上，与平板的周缘相距15 mm以上贴放好后，用无菌镶子轻压样片，使其紧贴于平板表面盖好平 皿，置36C1C培养16h~18h后测量结果试验重复3次用游标卡尺测量抑菌环的直径（包括贴片）并记录，测量抑菌环时，应选均匀而完全无菌生长的抑 菌环进行，测量其直径应以抑菌环外沿为界6.5抑菌作用判定阴性对照样片应无抑菌环产生，否则试验无效试验样片抑菌环直径＞7mm者，判为具有抑菌作 用；抑菌环直径W7mm者，判为无抑菌作用6.6结果判定3次重复试验，共12个样片，均有抑菌作用结果者，判为具有溶出性抑菌作用，否则判为无溶出性 抑菌作用，即样品中不含有溶出性抑菌物质。

7振荡烧瓶试验7. 1适用范围适用于含非溶出性抗菌物质的纸、纸板和纸制品的抗菌性能检测本方法不适用于含有高吸收性树 脂的样品注1：在进行振荡烧瓶试验前，需要鉴定其抗菌成分是否可溶出如果含有溶出性抑菌物质，可参照载体抗菌试验 检测抗菌性能；如果不含溶出性抑菌物质，可选用振荡烧瓶法进行抗菌性能检测注2：非溶出性抗菌材料的鉴定：至少取lg样品置于无菌蒸馅水中浸泡24h,并确保在浸泡后至少可以吸取20mL游离 液体按照WS/T 650-2019中5.1.1悬液定量抑菌试验法验证浸泡液是否具有抑菌作用，试验中试验菌与浸泡液作用时间为 2h；或将样品裁成直径5mm圆片，采用抑菌环试验鉴别抗菌产品中是否含有可溶性抑菌物质若样品浸泡液无抑菌作用 或采用抑菌环法判定为不含有溶出性抑菌物质，说明样品属非溶出性抗菌材料，可进行振荡烧瓶试验7.2试验材料7. 2. 1培养基和试剂同 5.2.1o7.2.2试验器具7. 2. 2. 1 II级生物安全柜7. 2. 2. 2恒温培养箱：温控精度1笆7. 2. 2. 3旋涡式振荡器7. 2. 2.4高压蒸汽灭菌锅7. 2.2. 5 振荡摇床：(250〜300) r/min。

7. 2. 2. 6具塞锥形瓶：250mL7. 2。