石蜡切片方法_生物学_自然科学_专业资料.docx

参照郭郛等方法（郭郭1988）苦味酸饱和溶液1份甲醛60份冰醋酸15份80%酒精150份⑤海登汉(Heidenhein)铁矶苏木精染色剂苏木精lg100%酒精50ml冰醋酸5ml甘油硫酸铝钾（钾矶）5g蒸馆水50ml碘酸钠0. 2g①Duboseq-BrasiL 固定液:50ml配制步骤：比将苏木精溶解在15ml无水乙醇中，加冰醋酸搅拌溶解b. 加甘油，搅拌c. 加35ml无水乙醇d. 将钾矶在研钵中研碎，加热溶解在蒸傭水中c.将温热的钾矶溶液缓慢加入到苏木精溶液中，并随加随搅拌f.加碘酸钠促使溶液成熟⑦2. 5%铁矶咬色、褪色液：硫酸铁钱（铁矶） 2. 5g蒸憎水 100ml⑧洗液：95%酒精 20份盐酸 1份第一天①固定：将解剖好的消化系统浸入Duboseq-BrasiL固定液24小时以上，作为实验材料第二天（早晨）② 脱水经30%酒精->40%酒精一50%酒精-*60%酒精—70%酒精一80%酒精一90%酒精一95%酒精一100%酒精，逐级脱水经80%酒精之前的各步可处理5分钟以上，之后各步处理应在戈分钟以内70min左右）③ 透蜡（需要提前准备）将5鉴品缶蜡放在60C恒温箱小融化。

需要提前准备） 用二甲苯作为透蜡剂，恋兑水后的肠道先经1/2纯酒精+1/2二甲苯一二甲苯各 处理5分钟，再将肠道放到二卬苯和石蜡的混和液（1:1）中浸12小时，最后 用纯石蜡浸24小时以上（以上两步均在温箱中进行），确保石蜡浸入肠道各组 织中脱水和透蜡均在小烧杯或酒盅内操作第四天④ 包埋用硕纸先折成小纸盒，放到水平桌而上，将盛冇石蜡及材料的小酒盅从温箱中取 出，置于酒精灯加热的水浴中（保持石蜡呈溶解状态即可，温度不可太高），把 液体石蜡倒入小纸盒中，待稍微冷却，用吸管迅速将肠道从酒盅吸到纸盒的石蜡 中，用解剖针调整好位置，然后小心将纸盒放在冷水中，使石蜡渐渐凝固，取出 剥去纸盒并编号第五天⑤ 切片与贴片 将蜡块修成大小适宜的蜡条，牢牢地粘在台木上，用手动切片机连续切片，厚度 为5〜6umo贴片剂为蛋清加少许甘油，充分搅匀，蛋清要先过滤在干净的 载玻片上加极微量的贴片剂，用拇指涂匀，将切的蜡片放上，用滴管吸水沿蜡片 一角向底面加水，然后在水浴锅上轻微烤片，使蜡片慢慢均匀展平，最后去除多 余的水分提前一天准备）载玻片和盖玻片（即使是新的）用前必须先在洗液 中浸一夜，洗去油污，然后用蒸懈水冲洗，再放到95%酒精中浸洗，最后用白 细布擦净备用。

⑥ 干燥将贴好的切片室温卜•干燥一夜第十五天（早晨）⑦ 脱蜡与染色在染色缸中进行将切片放到两缸二甲苯中脱蜡两次，每次20分钟左右，然后 进入以下步骤：1/2二甲苯+1/2纯酒精一纯酒精->95%酒精->90%酒精一80% 酒精->70%酒精->50%酒精一蒸镭水处理，以上各步各5-10分钟，［然后放到 2.5%铁矶液中咬色15分钟，经蒸馆水漂洗后，再放到钾矶苏木精染色剂中染 色15分钟，取岀后用水漂洗，再将切片放到2.5%铁矶液中褪色、分色，随时 镜检，直到染色效果满意为止在以后的脱水步骤中，当脱水至90%酒精后, 将切片放到95%酒精伊红染色剂中作双重染色，随时镜检⑧ 脱水、透明与封片将染好色的切片经30%酒精一50%酒精一70%酒精一80%酒精一90%酒糟一 95%酒精伊红->95%酒精一纯酒精，逐级脱水各5分钟,然后经1/2纯酒精+1/2 二甲苯一二甲苯透明3分钟以上各步均在染色缸中进行最后用中性树胶封片, 干燥后贴加标签装盒，以待研究观察。