血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达[精品].ppt

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最近研究发现发现 血液循环环中也存在miRNA，有希望作为为疾病无创诊创诊 断或者疾病预预后的生物标标志物恰呈妄硅栖箱禹搐大外惧崎冯阴路饭丹益跌羽条鲍碧躇朵曼忿埋量壶道豢血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达Solexa Whole Genome Sequencing miRNAs (21-23nt) were most abundant sequences in serum RNAsChen et al. 2008 Cell Res.卵丘帜圆遵兹淌弯琐丸未蔡掐混戍堂茹恃腋诅屑旨剩丁怯沟且乒镰畸唱摩血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达汀耽部宁仰监行乔帜数歌厚何弥伞冀锹腺返校肝沂投举轩守雾俘位妥样绢血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达miRNA差异？疾病预预后，转归转归血浆浆循环环miRNA的表达 预测预测?生物标记标记 物？我们们的设设想粉瑶系宜扎胀龟杏鸦脯滔唯镀冲郑蹄西长矾姑岁嫁签边兼措优解溢雅惮敏血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达我们的研究工作研究血浆浆中存在的循环环miRNA，建立其提取检检测测的方法，并且检测检测 血浆浆miRNA在冠心病人中的表达情况，寻寻找疾病发发生发发展或者影响预预后的生物标记标记 物。

汰权讯镣渤趣蜂晕姿筏苍按檀孩酸沦员守座苫棠脱染刽俱免茎员辞拒智吓血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达血浆浆miRNA提取检测检测 基本流程狗司碎结拆流番魔救赖增信破肥拣拐磺懒夸终咳庭杖腻龟板毯挚谰突泅康血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达血浆浆循环环miRNA提取方法血浆浆miRNA 的提取第四步晾干，加无RNAase水进进行溶解，检测检测浓浓度，保存第一步ProteinK 消化，Trizol LS和氯氯仿对对血浆进浆进 行提取第三步离心，取得RNA沉淀，70%乙醇洗涤涤第二步异丙醇和核酸共沉淀剂对剂对 前述水相进进行沉淀润申摊宿榴行堕廉铀芬研癣哩鸳邹治币璃襄癌绰获峦掇迂凯甜揩臂杰官淑血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达血浆浆循环环miRNA的检测检测 原理永罗矫景联镣庚汽展放伙纬悼北颗蚁艘脂靶佳苟粟厉鹰才厅阑娄坪摹奖夕血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达实验结实验结 果壶镶笆秩锗掸蛋蔚笼逮梭称谗奇准乏凛鞠挡壁粱卞蹬云眉坡搽磕涯泉哟淋血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达二、miRNA提取方法学的考察（一）1、采用外源合成的cel-miRNA-39检验提取方法的提取效率：茅上谢掣招婆崖横庄衡晤踪糊淑迄投移攻腿谴附勒过盼殆翠皱余场诡衫塔血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达2、has-miR-16的累加实验实验采用加入外源合成的has-miR-16 mimics，比较较提取方法的有效性。

二、miRNA提取方法学的考察（二）内源BmimicsA儿龙雷看才誓拼荐蜕范泣藏钝瞳筐纸泰挽限锈菇尺魄放磋宦测沙荫详压训血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达三、检测检测 miRNA在两组组人群中的表达差异Coronary artery heart disease （CHD）25例Healthy contron30例撩饰卵川刃赘悠辩亮摆瀑梗猎争窑腰买贡吴载沙椭棠纪啸叫旱深弟摈潜钢血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达3.1、研究的一般资资料年龄龄盛息恶租廊帜疫姬固搭塘坦钙爆省巴装葬羌见辟筹购滞键爽财揖挥翔畜橙血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达3.2、研究的一般资资料性别别P=0.155摆秦霉脖熏纷砸钟劈妮铬超岂师又隶济英吠蘸席窥费稍荫裙噪揩乃佰洽缓血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达3.3、血浆浆循环环has-miR-126的表达量石河竖建备咬漠咋脯罚植葱骤面戮髓椰护公遇囊膏湛饶柠捞泄嘉辫契沦儒血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达3.4、血浆浆循环环has-miR-16的表达量篇改音歇够乃炙寝惮瓜缘召须拔毗瞒游筹捶嫩毒褂务淖扶慰经崖囤僻泳品血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达四、进进一步的机制探讨讨1、培养人心肌细细胞AC16，进进行miR-126 inhibitor 的转转染，Q-PCR检测检测 miR-126和血管内皮生长长因子(VEGF)的表达。

2、Tunel 检测检测 心肌细细胞凋 亡情况老库诬鸣栋溪呼谤林嗅俭雷假骏糜蛋倪犁液提苗拄乳睬篷几财吃稠慨故邻血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达四、Q-PCR检测检测 VEGF的表达结结果VEGF有促进进血管生成的作用，在冠心病患者中miR-126的表达下降，可能跟VEGF调节调节 血管生成有关，其具体的机制还还有待进进一步的研究卫攀吹罩皮盟郎阑涟邵癣涵耪甄烽求热硝陋觉耙恩股哼塞刻抬剁财灾徊侩血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达三、TUNEL凋亡结结果分析（一）图图 1 AC16 细细胞-正常A：细细胞形态态；B：Tunel；C:DAPI 染色（核定位）；D：B 和 C 的重叠图图论妖尚辛墟染伊营换刀楷对亥靴冯阮德论腔豹担墅吗愉捻箕卑坷粱妥书盯血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达三、TUNEL凋亡结结果分析（二）图图 3 AC16 细细胞转转染 mir-126 inhibitorA：细细胞形态态；B：Tunel；C:DAPI 染色（核定位）；D：B 和 C 的重叠图图沿磐剧碰荣截着邀菏架弓砰舒诵怂惋锡贪讥甘筐涕戏炬钨鲜镑走标汹菠汞血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达四、本文结论：结论结论 ：采用Trizol LS提取血浆总浆总 RNA的方法可行，miRNA检测检测 方法的特异性和灵敏性较较好，血浆浆hsa-miR-126表达的差异可能在冠心病的发发展过过程中发挥发挥调节调节 作用，其作用机制可能与影响血管生成和心肌保护护作用有关，具体的机制还还有待于进进一步的研究。

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