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不一样采收期头花蓼药材指纹图谱相同度评价 　　王祥培，吴红梅,王祥森，刘霞　　摘要 目标对不一样采收期头花蓼药材进行指纹图谱相同度评价,探索最好采收期方法用RPHPLC(DAD)法，梯度洗脱，测定不一样采收期头花蓼的指纹图谱，并作相同度比较分析结果不一样采收期头花蓼的指纹图谱有显著差异结论应注意不一样采收季节对头花蓼药材的质量影响　　关键词 头花蓼药材; HPLC指纹图谱; 相同度　　头花蓼为蓼科植物头花蓼Polygonum capitatum Buch.Han.ex D.Don的干燥全草或地上部分，含有清热利湿，解毒止痛，活血散瘀和利尿通淋之功效，主治泌尿系统感染、血尿、湿疹、肾盂肾炎等症[1]现在测定不一样产地、不一样采收期头花蓼药材中化学成份的含量已经有研究报道[2～5]，但头花蓼化学成份复杂，而且伴随采收期的不一样存在差异所以，为了更全方面评价头花蓼药材质量和控制质量的稳定性，本文对不一样采收期共15批头花蓼药材进行了高效液相指纹图谱研究，并采取国家药典委员会推荐使用的“中药色谱指纹图谱相同度评价软件(2021A)”对不一样采收期头花蓼药材的指纹图谱进行相同度评价,并以相同度数据进行系统聚类分析，以期为头花蓼最好采收期确实定提供参考。

　　1 材料和仪器　　1.1 材料采自西藏墨脱县墨脱镇，共15批，经贵阳中医学院王祥培副教授判定为蓼科植物头花蓼Polygonum capitatum Buch.Ham.ex D.Don的干燥全草详细见表1没食子酸对照品(药品生物制品检定所，批号：06389501)，槲皮素对照品(药品生物制品检定所，批号：08190003)，槲皮苷对照品(自制，纯度﹥98%);乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为重蒸镏水　　1.2 仪器Agilent1100型高效液相色谱仪(自动进样品)，二极管阵列检测器(DAD);《中药色谱指纹图谱相同度评价系统A版》(国家药典委员会)　　2 方法和结果　　2.1 色谱条件采取依利特Hypersil ODS色谱柱(4.6 mm×150 mm,5 μm)，乙腈0.4%磷酸二元梯度洗脱，体积流量：0.8 ml/min，检测波长：310 nm，柱温25℃　　2.2 流动相条件[6]0～5 min：乙腈 0%～5%，0.4%磷酸 100%～95%;5～55 min：乙腈 5%～25%，0.4%磷酸 95%～75%;55～70 min：25%～30%，0.4%磷酸 75%～70%;70～80 min：乙腈 0%，0.4%磷酸 100%;80～85 min：乙腈 0%，0.4%磷酸 100%。

　　2.3 供试品溶液的制备[6]取头花蓼细粉(3号筛)2 g，精密称定，置圆底烧瓶中，分别加100 ml 80%乙醇，置水浴中加热回流2 h,滤过，残渣加100 ml 80%乙醇回流提取1 h，滤过，合并滤液滤液置蒸发皿中挥干，残渣加80%乙醇定容置10 ml容量瓶中用微孔滤膜(0.45 μm) 滤过,取续滤液,即得　　2.4 对照品溶液的制备 精密称取没食子酸、槲皮素和槲皮苷对照品适量，加50%甲醇溶解分别制成0.031 5，0.028 1和0.061 3 mg/ml 的溶液,即得　　2.5 指纹图谱方法学考察[6]　　2.5.1 精密度试验取同一份供试品溶液，反复进样6次，测得各共有色谱峰相对留时间及相对峰面积的RSD均低于3%，表明精密度良好　　2.5.2 稳定性试验取同一份供试品溶液，分别在0，2，6，12，20，30 h进行检测，测得各共有色谱峰相对保留时间及相对峰面积的RSD均低于3%，表明样品溶液在30 h内稳定　　2.5.3 反复性试验取同一采收期的供试品5份，精密称量，按“2.3”项下制备供试品溶液，分别进样，测得各共有色谱峰相对留时间及相对峰面积的RSD均低于3%，表明反复性良好。

　　2.6 指纹图谱建立 精密吸收对照品和供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，按选定的色谱条件，进行检测同一试验条件下，测定全部供试品HPLC色谱图依据不一样采收时间供试品测定结果所给出的峰数、峰值(积分值)和峰位(相对保留时间)等相关参数进行分析、比较，制订优化的指纹图谱，见图1图1 不一样采收期头花蓼药材指纹图谱　　　　 1/2 12尾页　　　　2.7 指纹图谱分析[6]　　2.7.1 共有指纹峰标定 比较不一样采收期头花蓼供试品溶液给出的相关参数，其中13个峰是各批供试品共有，所以确定这13个峰为其共有指纹峰，其中槲皮苷峰较没食子酸峰及槲皮素峰大，选作为参考峰　　2.7.2 头花蓼指纹图谱相同度评价 将15个不一样采收期头花蓼样品测定数据导入中药指纹图谱相同度计算软件，经选峰，设定匹配模板，将峰自动匹配，然后设定标准模板，进行谱峰差异性评价和整体相同性评价经过中药指纹图谱相同度计算软件得出头花蓼HPLC指纹图谱共有模式，和共有模式比较，15批次不一样采收期头花蓼药材的相同度结果见表1　　2.8 头花蓼HPLC指纹图谱相同度的分类研究 采取SPSS10.0统计软件对15个样品的指纹图谱相同度数据进行系统聚类分析。

结果见图2从聚类分析结果能够看出，系统将15个样品分为2大组，2，3，4，7，8，9，10，11，12，13，14为一组，其中4，11，3，12，13为一小组，2，7，8，9，10，14为另一小组，1，5，6，15为一组，说明不一样采收期头花蓼药材分为2大类，其中以1～4月采收的为一大类，5～12月的为一大类，但9～11月为一小类，5～8月为一小类表1 不一样采收期头花蓼药材相同度结果编号 产地 采收时间 相同度 1 西藏墨脱县墨脱镇 202103 0.351 2西藏墨脱县墨脱镇 202108 0.897 3西藏墨脱县墨脱镇 202109 0.963 4西藏墨脱县墨脱镇 202110 0.954 5西藏墨脱县墨脱镇 202103 0.3716西藏墨脱县墨脱镇 202104 0.4657西藏墨脱县墨脱镇 202105 0.8248西藏墨脱县墨脱镇 202106 0.8519西藏墨脱县墨脱镇 202107 0.89110西藏墨脱县墨脱镇 202108 0.89911西藏墨脱县墨脱镇 202109 0.95512西藏墨脱县墨脱镇 202110 0.96813西藏墨脱县墨脱镇 202111 0.98114西藏墨脱县墨脱镇 202112 0.85215西藏墨脱县墨脱镇 202101 0.621　　12021.03，22021.08，32021.09，42021.10，52021.03，62021.04，72021.05，82021.06，92021.07，102021.08112021.09，122021.10，132021.11，142021.12，152021.01图2 15批头花蓼HPLC指纹图谱相同度聚类谱系图　　3 讨论　　本文对西藏墨脱县墨脱镇同一产地的不一样采收期头花蓼药材进行指纹图谱相同度及其系统聚类分析,研究结果显示1～4月份采收的头花蓼指纹图谱相同度较低并归为一大类，5～12月份采收的头花蓼指纹图谱相同度较高,归为一大类，其中 9～11月份采收的头花蓼指纹图谱相同度最高，从不一样采收期头花蓼药材相同度评价结果和笔者对采收到的药材性状来看，提议头花蓼药材采收应在5～12月份。

研究结果和文件报道[5]的基础相符,和 2021年版《贵州省中药材、民族药材质量标准》中称头花蓼春、夏、秋三季采收有一定的差异　　参考文件 　[1] 贵州省药品监督管理局.贵州省中药材、民族药材质量标准[S].贵阳：贵州科技出版社，2021:147. 　　[2] 王祥培，万德光，王 强，等.HPLC测定不一样产地的头花蓼中没食子酸的含量[J].华西药学杂志，2021，22(2)：204.　　[3] 王祥培，万德光，王祥森，等. 不一样产地野生和栽培头花蓼中总黄酮的含量分析[J].时珍国医国药，2021，17(9)：1713.　　[4] 杨立勇,王祥培,吴红梅,等.HPLC测定不一样产地的头花蓼中槲皮苷的含量[J].贵阳中医学院学报,2021,31(4):67.　　[5] 张丽艳,杨玉琴,高言明,等.贵州不一样产地、不一样物候期头花蓼中总黄酮的动态改变研究[J].中药杂志，2021，28(9)：889.　　[6] 万德光.中药品质研究—理论、方法和实践[M].上海：上海科学技术出版社，2021：333.　　　　 2/2 首页12　　 。