depc水的配置及保存
1页DEPC水是用DEPC(diethypyrocarbonate,焦碳酸二乙酯)处理过并经高温高压消毒的MiliQ纯水。经检测不 含RNase、DNase和proteinase。 DEPC水可以用于RNA沉淀的溶解,含有RNA的各种反应体系如反转录、siRNA的退火等,以及其它各种要求无 RNase、DNase和proteinase的反应体系。 DEPC水一般是指千分之一浓度的DEPC,在搅拌器上搅拌至完全溶解,即看不到“油珠”为止,用来处理枪 头、EP管的DEPC水不需高压灭活,而用于配制DEPC酒精等试剂和用来这种RNA相关试验的DEPC水需灭火后使 用。 DEPC气味芳香浓烈,强挥发性,有毒,需在通风橱中操作。 方法是:取市售DEPC 1ml,加入1L待处理水(蒸馏水等)中,经猛烈振摇后,于室温静止数小时,然后高 压灭菌,以除去降解DEPC(DEPC分解为CO2和乙醇)。有些试剂 可直接加入DEPC,终浓度一般为0.1% 0.4%,原则上在杂交及其以前的步骤中,所有液体试剂均需用DEPC处理,或用DEPC水配制,包括乙醇的 稀 释。此外,接触标本以及标本有关的空中的洗涤也需DEPC水洗涤。 注意:DEPC是 潜在的致癌物质,在操作中应尽量在通风的条件下进行,并避免接触皮肤。含有Tris缓 冲液的溶液中,不能加入DEPC。 去离子纯净水加入DEPC达浓度0.1%,室温下持续搅拌过夜,分瓶包装后湿热高压灭菌彻底挥发去除DEPC后 可以长期保存在室温或4度冰箱,不宜反复使用。
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