血凝的基本知识-

1、2019/7/18,1,1,血凝的基本知识,倍赛血凝事业部,2019/7/18,1,2,血凝的基本知识,血液凝固（凝血）： 形态：血液由液体状态凝胶状态。 本质：纤维蛋白原纤维蛋白。 基本学说凝血瀑布学说。,2019/7/18,1,3,凝血瀑布学说,血液凝固是一系列凝血因子酶反应过程； 每个凝血因子都被其前一因子所激活； 最后激活凝血酶原生成凝血酶 凝血酶使纤维蛋白原转变成纤维蛋白，生成纤维蛋白凝块。,2019/7/18,1,4,血凝试剂的基本原理及临床应用,凝血功能的一些检测手段 常规筛选检测(检测凝血功能是否正常） PT凝血酶原时间测定。 APTT活化部分凝血活酶时间测定。 TT凝血酶时间测定。 特殊物质检测（检测引起凝血功能异常的原因） 纤维蛋白原测定 纤维蛋白降解产物 D二聚体 凝血因子检测 发色底物测定（如蛋白C，蛋白S，等）,2019/7/18,1,5,血凝常规四项检测,PT-凝血酶原时间测定 APTT-活化部分凝血活酶时间测定 TT-凝血酶时间测定 FBG-纤维蛋白原测定,2019/7/18,1,6,PT测定,PT试剂中主要含组织因子（TF）和ca离子，试剂中加入血浆后，

2、TF和ca离子与血浆中因子，形成TFca离子复合物，启动外源性凝血途径； 最后使凝血酶原形成凝血酶，凝血酶可使血浆中的纤维蛋白原转变成纤维蛋白。 纤维蛋白的交联，聚合成凝胶状态； 血浆从流动状态变成凝固状态这个过程短时间内完成，可用仪器检测。这段时间即为凝血酶原时间PT，一般以秒表示。,2019/7/18,1,7,PT检测临床应用（2） 监控口服抗凝药病人的凝血功能,口服抗凝药治疗时间比较长，治疗过程需要监控； 剂量增加或减少，会引起出血或凝血； 口服抗凝药治疗病人的治疗剂量，治疗时间由PT检测决定，一般要控制在INR2.0-3.0之间。,2019/7/18,1,8,INR国际标准化比值,INR（ 正常人血浆PT平均值每一实验室取20个以上正常人血浆测得的PT秒数平均值。 不能用质控血浆或参值作为正常人比血浆PT血浆PT平均值不准确 ISI国际敏感指数,2019/7/18,1,9,PT的ISI值 ISI国际敏感指数,ISI值是生产厂商生产的PT试剂与国际标准PT试剂测值相比的值，凡出厂的PT试剂必须标明其正确的ISI值。 若ISI1则表示该试剂敏感度与国际标准试剂值一致 若ISI值越大

3、，则表明该试剂越不敏感。,2019/7/18,1,10,各种ISI值的PT试剂,2019/7/18,1,11,不同ISI值的PT试剂的INR计算举例 同一种标本，同一仪器，用不同ISI值试剂测定，INR值应相同。,ISI值：1.02 在库尔特仪器上正常人 平均值=11.8秒 长岛 液体 PT 异常病人标本测得PT值 试剂 39秒 病人,ISI值：1.36 在库尔特仪器上正常人 ACL 平均PT值12秒 库尔特 原装 异常病人标本测得PT值 PT 29.8秒 试剂 病人,2019/7/18,1,12,PST试剂ISI值正确标识的重要性,国内有些试剂生产厂商，生产的PT试剂试剂ISI值只有1.8左右，甚至2.0以上，但他们提供给客户的ISI值却是1.22。 举例：国内某公司生产的血凝试剂，正常人PT平均测值为12秒，测得口服抗凝药病人血浆PT22秒，标示的ISI值为1.22，而实际ISI却为1.8。 计算：INR（标本值） INR（标本值） PT结果不准确，会导致异常的病人有可能被认为正常； 误导口服抗凝药病人用药，严重的会引起出血。实际INR3.0应减少用药，但按标识的ISI值计算结果永

4、远3.0.,2019/7/18,1,13,2019/7/18,1,14,部分厂商提供不真实ISI值的原因,原因： 技术水平达不到生产ISI1.6的PT试剂，如标识真实ISI值（1.8)，试剂不能被市场接受。 后果： 误导用药，引起医疗事故。 建议： 对目前使用的国产PT试剂的ISI值进行简单的鉴别。,2019/7/18,1,15,鉴别PT试剂ISI值的简单方法,用异常质控血浆鉴别PT试剂真实ISI值的简便方法,2019/7/18,1,16,选择PT试剂的要点（1）,（敏感度）（ISI值）： ISI1.0-1.2 最好 ISI1.2-1.4 一般 ISI1.6 建议不予使用 对枸橼酸浓度不敏感（3.2%或3.8%） 对凝血因子的敏感,2019/7/18,1,17,选择PT试剂的要点（2）,试剂的成分来源： 重组组织因子（基因工程方法）最好 如长岛液体PT试剂、Dade Behring PT 试剂（Inovin) 人胚胎组织：如Dade Behring PT试剂 新鲜兔脑粉：如库尔特PT试剂、StagoPT试剂 陈旧兔脑粉：大多数国产的PT冻干试剂（ISI1.6) 开瓶后的稳定性： 长岛液

5、体PT试剂：开瓶后，37，稳定30天以上。 其他PT试剂：开瓶后，37 ,稳定8小时。,2019/7/18,1,18,PT检测的结果评估 美国CLIA-88提出PT指标的允许误差,有国际标准，以INR表示; 不同厂家根据自己的试剂给 出一个正常范围，一般正常 范围为：10.5-14.5秒； 同一个标本用不同试剂，在同 一仪器上检测，INR值应相同。,2019/7/18,1,19,APTT检测临床应用（2） 监控静脉滴注肝素抗凝治疗的病人的凝血功能,临床上对静脉滴注肝素抗凝治疗的病人必须进行APTT检测以便监控。 APTT的值应控制在1.5-2.5 x基础秒数 基础秒数-肝素治疗前的APTT秒数； 不同的APTT试剂，对肝素敏感性不同，建议使用对肝素敏感的APTT白陶土试剂。,2019/7/18,1,20,国内APTT白陶土试剂现状,国内市场（除长岛能提供液体型APTT白陶土试剂外）尚无稳定的APTT白陶土试剂。 长岛液体型APTT白陶土优势： 对肝素敏感； 非常稳定：常温保存，稳定30天以上； 技术国际领先。,2019/7/18,1,21,不同APTT试剂，对肝素敏感性不同,2019/

6、7/18,1,22,选择APTT试剂的要点,对肝素的敏感性，对肝素越敏感越好APTT白陶土首选； 对凝血因子的敏感性； 对LA抗凝物的敏感性 开瓶后的稳定性 长岛液体型APTT白陶土试剂：37，30天以上； 库尔特APTT试剂： 37，3天左右； StagoAPTT试剂： 37， 3天左右。,2019/7/18,1,23,APTT检测的结果评估 美国CLIA-88提出APTT指标的允许误差,没有国际标准； 生产厂家根据自己的试剂给 出一个正常范围值； 各个厂家不同试剂的正常范 围值均不相同； 评价时，应以超过正常对照 的10秒视为异常。,2019/7/18,1,24,凝血酶时间测定Thrombin Time （TT）,Thrombin Time （TT）测定原理 原理,TT试剂（凝血酶）,纤维蛋白原（血浆）,纤维蛋白,2019/7/18,1,25,TT检测临床应用,2019/7/18,1,26,选择TT试剂的要点,开平后的稳定型 长岛液体TT试剂，37稳定30天以上,建议使用长岛液体试剂， 无需复溶，使用方便，测值稳定,2019/7/18,1,27,TT检测的结果评估,没有国际标准 生

7、产厂家根据自己的试剂给出一个正常范围值 检测时，试剂与血浆的比例，不同厂家，所加比例有所不同，正常值范围也不同，应以说明书为准,2019/7/18,1,28,纤维蛋白原测定Fibrinogen,纤维蛋白原含量测定（Fib）的原理 原理,过量凝血酶,纤维蛋白原,纤维蛋白,凝 固,其凝固时间的长短与纤维蛋白原量 呈反比关系,2019/7/18,1,29,纤维蛋白原含量测定（Fib）直接法,标准曲线制备 取已知靶值纤维蛋白原参比血浆，用缓冲液稀释成不同浓度，测定各浓度的凝固时间。然后在双对数纸上作图，横坐标为浓度，纵坐标为凝固时间，应为一直线。 样品测定 1/10稀释血浆（1份血浆九份缓冲液）测得凝固时间，在曲线上从纵坐标上找出凝固时间，从此点画一平行于横坐标的直线与曲线相交，此交点垂直于横坐标的交点，此即为该样的Fib浓度。,2019/7/18,1,30,纤维蛋白原含量测定（Fib)-衍算法,PT衍算Fib也称间接法测定Fib(Derived)。具体方法是，对标本进行PT测定的同时，即能得出Fib的含量。测定时不需用Fib的试剂（凝血酶试剂），只用PT试剂。 PT衍算Fib在测定前也需先定

8、标，一般是用Fib含量准确性的质控血浆，用生理盐水进行稀释（如100%,75%，50%，25%）得到不同浓度的Fib的标准系列，再对其进行PT的凝固时间测定及E（光密度变化）测定，然后把Fib浓度含量降低，其凝固的OD值也会降低，并呈线性相关，以此达到Fib定量的目的。,2019/7/18,1,31,有关PT衍算Fib,应避免的误解： 误区一：PT衍算Fib是通过PT结果“算”出来的。实际上是依据不同量Fib凝块光密度不同，而测定出来的。 误区二：衍算时PT结果一定与法Fib含量相关。其实有的样本PT正常但Fib可能不正常，或者Fib正常的标本PT有可能不正常。 误区三：PT衍算Fib方法简简便，准确。实际上，超过正常Fib含量的标本，误差很大。,PT衍算法不准确，估算值，国外已淘汰,2019/7/18,1,32,选择Fib的要点,标准曲线的相关性： r0.995 开平后试剂的稳定型： 长岛液体Fib试剂：37，稳定20天以上； 其他国产Fib冻干粉试剂：37 ，稳定24小时。,2019/7/18,1,33,Fib检测的注意点,尽量不用衍算法，不准确； 标本中纤维蛋白原含量如超出所用所

9、用试剂的线性范围，必须作适当的稀释后再进行测定，不然对结果影响较大。 当血浆中有肝素或纤维蛋白降解产物（FDP）时，会导致测值偏低。,2019/7/18,1,34,2019/7/18,1,35,Fib检测的结果评估 美国CLIA-88提出Fib指标的允许误差,为血凝四项检测中的定量检测； 有国际标准： WHO标准品98/612； 可追溯性 正常值范围：2-4g/L； 美国临床实验室改进修正案 CLIA-88允许误差范围为20%。,2019/7/18,1,36,血凝试剂常见的问题,APTT、PT延长及缩短 TT延长 Fib含量过高及过低,2019/7/18,1,37,标本的原因,抗凝剂与血液比例不对，如大于1：9； 抗凝剂配制错误，如枸橼酸钠含2个结晶水仍按3.8%配制； 抗凝剂应用枸橼酸钠溶液，不能用干燥品，或其他抗凝剂； 抗凝剂与血浆混合时摇匀过于剧烈，使凝血因子被破坏； 血细胞比容积大于55%，抗凝剂比例没变（仍按1:9）； 标本陈旧，超过2小时甚至更长； 口服抗凝药或凝血因子异常； 采血不顺利，有郁滞现象； 标本运输未加盖，致使CO2升高PH升高； 血浆分离应3000rpm，10分钟； 临产妇FBG含量较高，可能会超过正常值； 质控标本2-8超过8小时或失效;,2019/7/18,1,38,2019/7/18,1,39,复溶用蒸馏水及材料的原因,复溶蒸馏水质量差； 未用塑料或硅化玻璃管； 实验器材污染； 仪器本身有问题，如灵敏度不够（仪器可用手工操作排除、或凝固终点不对（一般凝固终点在50%有时需根据试剂不同作相应调整到30%甚至20%。,2019/7/18,1,40,试剂本身的原因,复溶后试剂反复使用。如整瓶复溶好的试剂放入预温槽预温，测试完成后，剩余放回冰箱。反复如此试剂在37的时间过长； 复溶后试剂使用时间过长； 试剂储存、运输温度过高，未注意冷藏运输。中间公司未换

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