微生物SOP文件

1、一、简易SOP文件：1.1、标本接收筛选方案：1.1.1、痰标本：目测：黄色、灰色、血性、铁锈色，浑浊、 稠厚，呈现团块状的标本为合格标本； 而无色、白色、有黑色小点，清稀，呈现泡沫状，有明显食物渣滓、纸屑灰尘、泥土的为不合格标本。 显微镜下筛选：对经过目测筛选的标本须经过显微镜下再次筛选，凡脓细胞25/HP且复层鳞状上皮10/HP的标本为合格标本，可进入下一步程序；而脓细胞25/HP的标本为不合格标本，应拒收。1.1.2、尿标本：目测：采用一次性无菌杯，杯盖严密者为初步合格； 显微镜下筛选：标本经过离心后镜检，凡有较多复层鳞状上皮的，脓细胞较少而细菌数量较多的、或有大量尿结晶析出的均为不合格标本，应拒收。1.1.3、大便标本：采用一次性无菌杯，杯盖严密，无明显灰尘、泥土或纸屑者为合格标本。1.1.4、咽拭子标本：须采用显微镜下筛选，凡无脓细胞的标本为不合格标本，应拒收；而脓细胞10/HP的为合格标本。怀疑为风湿热、猩红热的病人除外。1.1.5、血液、骨髓、心包液：凡未接种于血培养瓶中的均为不合格标本，应拒收。1.1.6、各种穿刺液：所有标本均采用无菌容器送检或未接种于血培养瓶中，否则

2、为不合格标本，应拒收。1.1.7、脑脊液、生殖道标本：采用一次性无菌杯或直接接种于血培养瓶中，由医护人员（住院病人）或病人家属（门诊病人）当面交送给专业微生物检验人员，经过询问是在30min内，保温保湿条件下运送的方为合格标本，否则应拒收。1.1.8、其他标本：必须是采用无菌容器运送的，且在相应规定时间内送检的才是合格标本。1.2、标本预处理：1.2.1、痰标本：按全国临床检验操作规程（第二版）相关章节，采用先用20ml生理盐水洗涤两次，经过10ml生理盐水稀疏后，用接种钩钩取脓性部分，采用压片法制作痰涂片，再在杯中加入胰蛋白酶消化1-2小时后接种。1.2.2、尿标本：WBC5/HP时，取4 ml离心后，弃去上清液，留下200l混匀后接种，剩余标本涂片干燥后染色；不离心标本用于菌落计数，方法，取5ml生理盐水，加入50l尿液标本，混匀后取100l接种，结果1000为每毫升菌落数。1.2.3、大便标本：取绿豆大小的粪便标本加入生理盐水制成匀浆，用接种环取一环涂片，观察有无脓细胞，真菌孢子及菌丝，有真菌的须接种CHROMagar念珠菌培养基，脓细胞+以上的接种粪便选择性培养基，已经经验应用

3、抗生素的采用改良TTC增菌液或Na2S2O3肉汤增菌液先进行增菌。留下涂片干燥后Gram染色，观察菌群情况，注意有无菌群失调。对于无脓细胞的标本无须进行接种。1.2.4、咽拭子标本：润湿后接种。剩余标本直接涂片，干燥后染色。1.2.5、脑脊液：由临床医生按无菌操作直接注入血培养瓶1-3ml直接送检。1.2.6、生殖道标本：须将培养基孵温后接种。剩余标本直接涂片作Gram染色。1.2.7、其他标本：除血液、骨髓、心包液等所有标本必须在接种完后用剩余标本作直接涂片，干燥后作Gram染色。1.3、读片：根据人体对细菌/真菌感染在早期主要以非特异性免疫的细胞免疫为主的特点，结合标本来源部位系统器官生理病理特点，收寻2030个视野中脓细胞聚集处的脓细胞胞浆中有无吞噬的细菌及细菌的染色排列特征，菌体特征（如粗细、长短、扭曲）并作记录。其中痰液标本的读片尤为重要：阐述痰液形成过程和排出过程，我们可以得知，在下呼吸道中感染中形成的炎性渗出、包裹物中存在与感染直接相关的病原菌，在自然排痰的过程中会被上呼吸道的正常菌群所污染，但污染菌位于炎性包裹物之外，且人体对正常菌群具有共生性保护因而不会产生吞噬现象，

4、借此理论，我们将选择痰标本中脓细胞成团块状分布，集中而不稠密，且周围无鳞状上皮细胞或无大量成团状分布的细菌球的区域为读片区，认真收寻脓细胞聚集处的脓细胞胞浆中有无吞噬的细菌及细菌的染色排列特征，菌体特征（如粗细、长短、扭曲）并作记录，将此作为确定病原菌的理论依据。粪便标本：在观察吞噬现象的同时，作好菌群比例计算，并记录（菌群比例分析参照相关文件）。1.4、 标本接种：1.4.1、痰液：一般：BA、Choc（加入万古霉素的营养强化嗜血杆菌培养基）、MecK、CHROMagar；怀疑为军团菌的加种BCYE-培养基，怀疑为百日咳的加种Boudet-Gengou培养基，怀疑为肺炎支原体感染的加种Hayflick双相培养基或采用免疫学及分子生物学方法检测，肺炎衣原体须用免疫学或分子生物学方法。1.4.2、尿液：一般：BA、MecK；怀疑为真菌感染的加CHROMagar，怀疑为淋病的加巧克力培养基，怀疑为软下疳的加种Choc；怀疑支原体感染的接种支原体选择性培养基如PPLO、A7B分离鉴定培养基或商品培养基1.4.3、大便标本：一般感染性腹泻的粪便标本直接接种或增菌后接种：SS、SMC、TCBS；

5、怀疑为金黄色葡萄球菌性食物中毒或伪膜肠炎的加HSM（高盐甘露醇培养基），怀疑为真菌性肠炎的加CHROMagar，怀疑为伪膜性肠炎的应作厌氧菌培养分离艰难梭菌。1.4.4、耳、鼻、眼、咽拭子标本：BA、Choc、CHROMagar；怀疑为白喉的加亚碲酸钾血琼脂或卵黄培养基1.4.5、脓液、及脓性穿刺物：一般：BA、MecK；来源于面部、扁桃体周围、颌下、腋下等处淋巴结脓肿的脓液加种Choc，怀疑为真菌的加CHROMagar；来源于生殖系统的脓液须加种巧克力培养基。怀疑厌氧菌感染时应作厌氧菌培养接种BAP（强化血琼脂）、KVLB（卡拉-万古冻溶血琼脂）、BBE（胆七拟杆菌琼脂）、PEA（苯乙醇血琼脂）等。1.4.6、血、骨髓标本：由医护人员床旁接种，需氧+厌氧或L-型血培养瓶，怀疑播散型结核分枝杆菌感染的加种分枝杆菌血培养基。经过增菌后转种BA、Choc、MecK、厌氧菌BAP等固体培养基。1.4.7、胸腹水、鞘膜液：无菌操作注入血培养瓶内增菌后BA、Choc、MecK、厌氧菌BAP等固体培养基。1.4.8、脑脊液： 由临床医生按无菌操作直接注入血培养瓶1-3ml直接送检。1.4.9、手术

6、创面、烧伤创面分泌物：接种BA、MecK；怀疑为真菌感染的加CHROMagar。1.4.10、各种生殖道标本：种BA、Choc、MecK、CHROMagar。1.4.11、组织标本：（暂未开展！）先粉碎后接种BA、Choc、MecK、CHROMagar，有必要时作厌氧菌培养。1.4.12、皮屑、甲屑、毛发：种CHROMagar、沙氏斜面培养基、必要时种察氏培养基。1.5、读板：1.5.1、痰液：（经过1824h隔夜培养，但孪生球菌、营养缺陷链球菌以及分枝杆菌则需延长培养时间）1.5.1.1、BA生长、Choc不生长、MecK不生长：Gram染色：分G+co（革兰阳性球菌） ,G+ b（革兰阳性杆菌）G+co依靠溶血特征，菌落形态、菌落颜色、菌体形态区分:葡萄球菌：淡黄色/白色，中等大小，较凸，规则圆形，/溶血，较湿润，微球菌：黄色/白色/橙色，中等大小，较凸，规则圆形，不溶血，较干燥，不易乳化较葡萄球菌生长缓慢，该菌一般无临床意义；链球菌：白色/灰白色、凸起小菌落，溶血为溶血型链球菌，其中化脓性链球菌、无乳链球菌、停乳链球菌菌落相对较大（多在1.0mm左右），而咽峡炎链球菌，马链球菌等

7、菌落则较小（多在0.5mm左右）；灰白隆起中心扁平或凹陷，1.0-1.5mm大小的宽大溶血为肺炎链球菌，该菌是最常见的肺部感染病原菌，在社区获得性感染中有重要的地位；细如针尖，白色凸起溶血的为草绿色链球菌，自然咯痰标本中的草绿色链球菌一般不具有临床意义；孪生球菌：白色小菌落，/溶血，菌落黏着不易刮取，但在盐水中易乳化，较湿润，在质量较好的新鲜血琼脂或哥伦比亚血琼脂上易生长，在含血MHA上不生长。从正常咳取的痰液中分离到一般不具有临床意义，但在套管保护下采集的下呼吸道标本中分离出来具有临床价值。气球菌：白色凸起小菌落，溶血，1.0mm左右，有特殊气味（酷似乙醛），菌落较草链大。镜下为短链或葡萄球菌样排列，菌体大而着色不均。从痰液中分离到不具有临床意义。肠球菌：灰白，低凸，2.0mm左右之溶血菌落，较湿润，口腔球菌：白色凸起较大菌落，不溶血，黏着，接种针挑之则整个菌落挑起，琼脂上不留痕迹。该菌偶尔可引起肺部的严重感染，一般好发生于COPD病人和肺气肿病人；G+ b依靠溶血特征，菌落形态、菌落大小、菌体形态区分：棒状杆菌：白色1.0-1.5mm左右大小，较干燥，不溶血/狭窄溶血的为白喉或一般

8、棒状杆菌；小而湿润，灰白/无色，半透明的为J-K棒状杆菌；灰白细小，溶血的可能为假结核、化脓放线菌、溶血分泌杆菌；除白喉杆菌外，假结核、化脓放线菌、溶血分泌杆菌是罕见的咽喉部病源菌，棒状杆菌一般不导致肺部感染；芽孢杆菌：灰白大菌落，表面粗糙如毛玻璃状、蜡状、边缘不规则，不同种类菌落形态差异巨大，宽大溶血。延长培养时间，菌落从湿润变得干燥，边缘呈放射状扩散，形成叶状、掌状、雪花状、齿轮状等，常常为痰培养的污染菌；1.5.1.2、BA生长、Choc生长、MecK不生长：Gram染色：分G+co及G+bG+co：平面球菌、藻球菌：血琼脂上为溶血，0.5-1.0mm大小，在Choc上呈现金属色泽，无临床意义。 G+b：乳杆菌：细小，白色凸起溶血菌落，有特殊的酸臭味，口腔正常菌群，无临床意义；G-菌：根据形态分为G- b（革兰阴性杆菌） 、G-co（革兰阴性球菌） 、以及根据对特殊营养的需求对苛养性G- b进一步分类，常见的如嗜血杆菌，军团菌等：1.5.1.3、BA生长、Choc生长、MecK生长：Gram染色：G- b氧化酶、分科琼脂颜色肠杆菌：氧化酶（-），MecK上红色、淡红色或无色湿润大

9、菌落；弧菌：氧化酶（+），MecK上红色或无色扁平大菌落；非发酵菌：氧化酶（+/-），MecK上无色或淡红色透明小菌落1.5.1.4、BA生长、Choc生长、MecK不生长：Gram染色：分G-b及G-coG-b：苛养性G-b：HACEK族：嗜沫/副嗜沫嗜血杆菌、艾肯氏菌、碳酸噬胞菌、放线杆菌、金氏菌；心杆菌：人类心杆菌；鞘氨醇单胞菌：少动鞘氨醇单胞菌；莫拉菌：缺陷莫拉菌、非液化莫拉菌、奥斯陆莫拉菌；寡源菌：所有种；黄杆菌及相关种：包括鞘氨醇杆菌、产吲哚金色杆菌、黏液威克菌、动物伤口伯杰氏菌、短稳杆菌等；甲基杆菌：嗜中温甲基杆菌；巴斯德菌：除产气和溶血巴斯德菌外的所有种；鲍特氏菌：百日咳/副百日咳鲍特氏菌；弗朗西丝菌：所有种。G-co：氧化酶（+）、触酶（+）奈瑟菌：白色/黄色中等大小菌落，该类细菌为口腔常见正常菌群，该菌在痰培养中含量的高低反应了标本采集状态的合格程度，大量出现提示培养结果将是不可信的； 卡他莫拉菌：白色小菌落（24h内），菌落有脆性，用接种环推之可移，是儿科和老年病人常见的下呼吸道病原菌；1.5.1.5、BA不生长/细小、Choc生长、MecK不生长：Gram染色：G-b、菌体细小或呈扭曲之长丝状嗜血杆菌：灰色/无色，半透明，1.5-2.0mm的多为流感嗜血杆菌17，该菌为最常见的肺部感染病原菌，可发生于各个年龄层次，其高携带与COPD发病有较强的相关性；灰色略黄，不透明，1.0-1.5mm的多为副流感嗜血杆菌。一般副流感嗜血杆菌不导致肺部感染，大量出现提示培养结果将是不可信的；1.5.1.6、BA不生长、Choc不生长、MecK不生长、BCYE-生长/或在含有

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