实验诊断学实验1全血细胞计数及血细胞形态检查
45页1、,实验诊断学实验1 全血细胞计数及血细胞形态检查,静脉真空采血(示教) 白细胞计数 红细胞计数 血红蛋白测定 血涂片制备及染色 白细胞分类计数 网织红细胞(示教) 血沉测定(示教) 目前实验室血细胞测定方法,内 容,真空采血过程,血球计数板的结构,白细胞计数(显微镜法) 试剂冰醋酸 2.0ml,蒸馏水 98ml,10g/L亚甲蓝溶液3滴 操作 取一小试管,加白细胞稀释液0.38ml。 用微量吸管采血20ul加入试管底部,用上清液吸洗23次,摇匀。 充池后静置23分钟待白细胞下沉后用低倍镜计数4个大方格内的白细胞数。 计算 白细胞数/L=4个大方格内的白细胞数41020106,参考范围 成人:4 10109/L(400010000/ul)2013年行业标准:3.5-9.5109/L 儿童:5 12109/L(500012000/ul) 新生儿:1520109/L(1500020000/ul) 临床意义 增高:生理性:新生儿、剧烈运动、妊娠晚期、极度恐惧与疼痛。 病理性:大部分细菌性感染、尿毒症、烧伤、手术后、传染 性单核细胞增多症、白血病等。 减少:病毒性感染、伤寒、副伤寒、疟疾、再生障
2、碍性贫血、放疗、 化疗、非白血性白血病。 注意事项 1.一些贫血患者血液中出现有核红细胞会影响白细胞计数,应校正排除。 2.加全血时,应檫去吸管外周血液,再将标本吹入试管底部,再吸上清液回洗几次。 3.滴入计数室内的混悬液,液量要适当,不得外溢或混有气泡;计数室内的细胞分布均匀。 4.计数室边线的白细胞,可数上不数下,数左不数右,避免重复或漏计。,试剂 (可用生理盐水) 操作 取一小试管,加红细胞稀释液1.99ml。 用微量吸管采血10ul加入试管底部,用上清液吸洗23次,摇匀。 充池后静置23分钟待红细胞下沉后用高倍镜计数5个中方格内的红细胞数。 计算 5个中方格内红细胞数5 10 106 200=红细胞数/L 注意事项 红细胞在计数池内分布不均匀时应重新充池,红细胞计数(显微镜法),试剂血红蛋白稀释液(文-齐氏液) 原理血红蛋白中的亚铁离子(Fe2+)被高铁氰化钾氧化为高铁(Fe3+)血红蛋白,再与氰结合成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋白,在540nm波长和液层厚度条件下,具有一定的吸光系数,根据吸光度,即可求得血红蛋白浓度。 操作 取一试管,加血红蛋白稀释液5.0ml。 用微量吸管采
3、血20ul加入试管,用上清液吸洗2-3次,摇匀后静置5-10分钟待比色。,血红蛋白测定(手工比色法),由于仪器的差异,用吸光系数的方法已改为用高铁血红蛋白参考标准液相对比较的方法.即用一组已知浓度的HiCN参考液,在应用的分光光度计上,分别测定其吸光度(A)。以A为衷纵坐标,血红蛋白值为横坐标,绘制标准曲线。,OD,血红蛋白(g/L) 20 40 60 80 100 120 140 160 180,0.5,0.4,0.3,0.2,0.1,血红蛋白测定(手工比色法),参考范围 RBC 男:4 5.51012/L 2013年行业标准4.3-5.81012/L 女:3.5 5.01012/L 3.8 5.11012/L HB 男:120-160g/L 130-175g/L 女:110150 g/L 115150 g/L 红细胞计数和血红蛋白测定的临床意义 生理性增高:新生儿、高原居民、缺氧的应急反应等。 病理性增高:真性红细胞增多症、心脏病、脱水等。 减少:临床各类贫血、白血病、手术后、产后、月经期等。,外周血片制作,各种血膜比较,瑞氏染色,原 理,瑞氏染色液主要染料由碱性美蓝和酸性伊 红两
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